李 斌 ，閆潤(rùn)堃，劉曉林，孟智超，李 悅，孟沛藝，黃 勇

(河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471023)

環(huán)狀RNA(Circluar RNAs，circRNAs)是一類不具有5′和3′末端頭尾的閉合環(huán)狀非編碼RNA分子，廣泛存在于真核細(xì)胞中[1-2]。早在1976年，在馬鈴薯(Solanumtuberosum)塊莖類病毒中首次發(fā)現(xiàn)一些RNA病毒能抗磷酸二酯酶的降解，并鑒定出這些RNA分子是由一個(gè)以上外顯子以共價(jià)閉環(huán)結(jié)構(gòu)形式存在[3]。隨后研究人員通過(guò)電子顯微鏡能觀察到真核細(xì)胞中此RNA為環(huán)形結(jié)[4]。鑒于circRNAs結(jié)構(gòu)的特殊性和當(dāng)時(shí)科技條件對(duì)RNA分子世界認(rèn)識(shí)的限制，circRNAs曾一度被認(rèn)為是因RNA剪切拼接錯(cuò)誤而形成且?guī)缀鯚o(wú)生物功能的副產(chǎn)物，因而未引起當(dāng)時(shí)研究者的廣泛重視[5]。直到1991年，Nigro等首次證實(shí)在人類細(xì)胞中鑒定出了circRNAs，其重要的生理功能才逐漸被人們所認(rèn)識(shí)[6]。近年來(lái)，隨著生物信息分析技術(shù)的快速發(fā)展和RNA高通量測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步，越來(lái)越多的circRNAs在真核生物中被發(fā)現(xiàn)，使其成為繼發(fā)現(xiàn)微小RNA(MicroRNA，miRNA)，Piwi蛋白相作用RNA(Piwi-interactiing RNA，piRNA)和長(zhǎng)鏈非編碼(Long non-coding RNA，lncRNA)之后RNA領(lǐng)域又一研究的熱點(diǎn)[7-8]。本文綜述了circRNAs的生物學(xué)特征、形成機(jī)制、主要功能及其在水產(chǎn)中的最新研究進(jìn)展，為深入研究circRNAs調(diào)控機(jī)制提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 circRNAs的生物學(xué)特征

目前研究發(fā)現(xiàn)，circRNAs 在生物體中所具有的重要功能與它的生物學(xué)特征有關(guān)。主要特征有：1)細(xì)胞定位：大部分circRNAs來(lái)源于編碼基因的外顯子并位于細(xì)胞質(zhì)中，少數(shù)的circRNAs來(lái)源于內(nèi)含子和外顯子-內(nèi)含子并位于細(xì)胞核中[9]；2)在生物體中廣泛存在：circRNAs從病毒、真菌到高等脊椎動(dòng)物以及植物等多種生物組織中都存在(圖1)[10]；3)高穩(wěn)定性：由于circRNA是通過(guò)5′與3′端首尾相連共價(jià)閉合的環(huán)狀分子，所以能抵抗RNA外切酶(Ribonuclease R，RNase R)的降解，比對(duì)應(yīng)線性mRNA穩(wěn)定得多[11]；4)較高保守性：大部分circRNAs的一些序列在進(jìn)化上是保守的，不僅在哺乳動(dòng)物中具有保守性，甚至在進(jìn)化關(guān)系較遠(yuǎn)的果蠅也存在保守性[12]；5)半衰期較長(zhǎng)：研究表明，circRNAs比對(duì)應(yīng)的線性mRNA 轉(zhuǎn)錄本更具穩(wěn)定性，circRNAs的半衰期超過(guò)48 h，而mRNA的半衰期約10 h[13-14]；6)特異性表達(dá)：circRNA在不同細(xì)胞類型和不同組織中的發(fā)育階段有特異性表達(dá)，尤其是在病理和非病理組織中存在明顯的表達(dá)差異[15]，例如由DOCK1基因產(chǎn)生的circRNA在乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中高水平表達(dá)，而在肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中呈現(xiàn)低水平表達(dá)[16]；7)差異性表達(dá)：有研究表明約1/8 的基因同時(shí)含有線性mRNAs和circRNAs，而且在有些組織中，細(xì)胞內(nèi)circRNAs的含量比對(duì)應(yīng)的線性mRNA更加豐富，其表達(dá)水平比線性mRNA 高出10倍之多[17-19]。

2 circRNAs的形成

經(jīng)典的生物真核mRNA生成機(jī)制是mRNA前體(Precursor mRNA，pre-mRNA)剪切掉內(nèi)含子并連接外顯子，通過(guò)連接酶的作用從而形成具有5′帽子和3′尾巴的線性RNA轉(zhuǎn)錄本；而circRNAs的形成方式不同于線性RNA的剪切，它主要是由pre-mRNA以反向剪接方式產(chǎn)生，形成共價(jià)閉合環(huán)狀RNA分子，其產(chǎn)生過(guò)程通常涉及到本身宿主基因的轉(zhuǎn)錄和剪切，并與線性剪切機(jī)制相互競(jìng)爭(zhēng)。根據(jù)circRNAs在基因組中的來(lái)源及其構(gòu)成序列的堿基來(lái)源，可分為7 種類型：1)僅來(lái)源于外顯子的環(huán)狀RNAs(Exon circular RNAs，EcRNAs)；2)來(lái)源于外顯子-內(nèi)含子的環(huán)狀RNAs(Exon-intron circular RNAs，EIciRNAs)；3)僅來(lái)源于內(nèi)含子的環(huán)狀RNA(Intron circular RNAs，ciRNAs)；4)來(lái)源于融合基因的環(huán)狀RNA(Fusion-circRNAs，f-circRNAs)：基因間重排，產(chǎn)生異常融合而形成環(huán)狀RNAs；5)來(lái)源于反義鏈轉(zhuǎn)錄的環(huán)狀RNAs(Antisense circular RNAs)：6)來(lái)源于基因間序列的環(huán)狀RNAs(Intergenic circular RNA)；7)TricRNAs成環(huán)(tRNA intronic circRNAs)：由pre-tRNAs 剪切后形成的tricRNAs[21-23]。

目前公認(rèn)的生物體內(nèi)circRNAs形成主要是通過(guò)反向剪切來(lái)完成，有4種產(chǎn)生機(jī)制[24-26]。1)套索驅(qū)動(dòng)成環(huán)機(jī)制(Lariat-driven circularization)：主要通過(guò)外顯子跳躍，由附近上游外顯子的3′端形成剪接供體(Splice donor)和靠近附近下游外顯子的5′端形成剪接受體(Splice acceptor)以共價(jià)鍵結(jié)合的方式，然后再在剪接酶的作用下清除內(nèi)含子，形成ecircRNAs(圖2A)。2)內(nèi)含子配對(duì)成環(huán)機(jī)制(Intron pairing-driven circularization)：不通過(guò)外顯子跳躍，而是由上下游外顯子兩側(cè)的2個(gè)內(nèi)含子上的堿基反向互補(bǔ)配對(duì)，如ALU 重復(fù)序列，通過(guò)配對(duì)成環(huán)，然后除去內(nèi)含子進(jìn)而形成ecircRNAs；這種配對(duì)形成的環(huán)化機(jī)制也可以保留內(nèi)含子形成EIciRNA，這種形成機(jī)制還需要進(jìn)一步探索(圖2B)。3)RNA結(jié)合蛋白(RNA-binding protein，RBP)環(huán)化機(jī)制(RBP driven-circularization)：該蛋白可以和兩側(cè)翼內(nèi)含子序列結(jié)合，能在內(nèi)含子之間建立橋梁而堿基產(chǎn)生配對(duì)，保證側(cè)翼內(nèi)含子序列相互結(jié)合，從而促進(jìn)circRNAs 或者EIciRNAs的生成(圖2C)。4)內(nèi)含子套索環(huán)化機(jī)制(Circular intron RNA)：經(jīng)由剪接體形成的內(nèi)含子套索產(chǎn)生，要求5′剪接位點(diǎn)富含7個(gè)堿基的GU 序列和3′分支位點(diǎn)富含11個(gè)堿基的C序列，以避免脫分支酶對(duì)其降解，從而保證ciRNAs生成(圖2D)。目前關(guān)于circRNA形成機(jī)制的方式尚有爭(zhēng)議，后續(xù)的研究工作需要進(jìn)一步揭示其具體產(chǎn)生機(jī)制。

3 circRNAs的功能

circRNAs廣泛存在于真核生物中，具有circRNA序列保守性，表達(dá)呈現(xiàn)一定的組織特異性和發(fā)育階段性，這表明 circRNA是一種功能分子。隨著對(duì)circRNA研究的逐步深入，目前相對(duì)比較明確和成熟的觀點(diǎn)是circRNA具有吸附 miRNA、吸附蛋白、蛋白質(zhì)翻譯和調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄等功能。

3.1 作為miRNA的海綿體

circRNAs序列上具有miRNAs結(jié)合位點(diǎn)，能作為miRNA的“海綿吸附體”或競(jìng)爭(zhēng)性的內(nèi)源RNA(Competitive endogenous RNA，ceRNA)與miRNAs結(jié)合，增強(qiáng)其所調(diào)控靶基因的表達(dá)[27-28](圖3A)。早期的研究報(bào)道了一種存在于人和鼠腦組織中的circRNA，被稱之為小腦變性相關(guān)蛋白1反義轉(zhuǎn)錄物(Antisense tothe cerebellar degeneration-related protein 1 transcript，CDR1as)。該circRNA包含有74個(gè)能與miR-7結(jié)合的位點(diǎn)，能吸附miR-7，充當(dāng)“超級(jí)海綿吸附體”。當(dāng)過(guò)表達(dá)CDR1as時(shí)，能與miR-7結(jié)合，進(jìn)而促進(jìn)miR-7靶基因的表達(dá)；而當(dāng)CDR1as的表達(dá)被抑制時(shí)，則會(huì)降低miR-7靶基因的表達(dá)水平[29]。此外，另一個(gè)有代表性的研究是circSRY(Circular sex-determining region Y)，該環(huán)狀RNA分子來(lái)源于小鼠睪丸中Y 染色體中的性別決定區(qū)基因。研究發(fā)現(xiàn)，circSRY中含有16個(gè)miR-138保守結(jié)合位點(diǎn)，通過(guò)“海綿吸附”作用來(lái)抑制miR-138的活性，進(jìn)而調(diào)控miR-138所作用的靶基因[30]。目前越來(lái)越多的證據(jù)表明circRNAs 在真核生物中作為miRNA 海綿體吸附機(jī)制是circRNAs發(fā)揮調(diào)控功能中的一個(gè)普遍現(xiàn)象[31-32]。

3.2 作為蛋白質(zhì)的海綿體

一些circRNAs可以通過(guò)其環(huán)狀結(jié)構(gòu)上的特定靶點(diǎn)與蛋白質(zhì)結(jié)合，從而形成蛋白質(zhì)/circRNAs復(fù)合體，發(fā)揮生理作用(圖3B)。例如circRNAs可與RBP相互結(jié)合，調(diào)控circRNAs 的形成[33]。盲肌蛋白(Muscleblind，Mbl)是一種RBP，可結(jié)合其宿主基因第2外顯子，當(dāng)過(guò)表達(dá)Mbl時(shí)，則會(huì)促進(jìn)Mbl基因生成環(huán)狀分子circMbl，并同時(shí)抑制Mbl基因通過(guò)常規(guī)的剪接方式生成對(duì)應(yīng)線性mRNA轉(zhuǎn)錄本；而新生成的circMbl反過(guò)來(lái)又可以與過(guò)量的Mbl結(jié)合，進(jìn)行平衡circMbl和Mbl的生成量，使各自表達(dá)趨于穩(wěn)定[34]。circFoxo3可以與阻滯細(xì)胞循環(huán)的周期蛋白依賴性激酶抑制劑(Cyclin-denpendent kinase inhibitor1，p21)和細(xì)胞周期蛋白依賴激酶2(Cyclin-dependent kinase 2，CDK2)結(jié)合，形成circFoxo3-p21-CDK2三原復(fù)合物，從而影響CDK2的生物學(xué)功能，導(dǎo)致細(xì)胞不能正常進(jìn)入細(xì)胞周期，而發(fā)生細(xì)胞的周期停滯或者細(xì)胞凋亡[35-36]。此外，其他研究證實(shí)，circPABPN1能與(Human antigen R，HuR)蛋白競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合，并抑制PABPN1基因的翻譯[37]。此外，circANRIL可與pre-rRNA和(Pescadillo homolgue 1，PES1)蛋白進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合，抑制核酸外切酶對(duì)pre-rRNA的進(jìn)一步加工，阻止核糖體的成熟[38]。

3.3 編碼蛋白或者多肽

一般認(rèn)為circRNAs因具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)、無(wú)5′和3′端特征，曾被認(rèn)為無(wú)編碼蛋白或者多肽能力，通常定義為非編碼RNA。1986年，有學(xué)者在HDV(Hepatitis delta virus)中發(fā)現(xiàn)circRNA分子可以編碼病毒蛋白，而且與肝炎疾病的發(fā)生相關(guān)[39]。合成有內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)序列(Internal ribosome entry site，IRES)的circRNAs可以招募核糖體來(lái)執(zhí)行蛋白翻譯(圖3C)，而不含IRES的circRNAs 則不能開啟翻譯機(jī)制[40]。Li J等研究發(fā)現(xiàn)circRNAs序列中含有的綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)的開放閱讀框(Open reading frame，ORF)能在大腸桿菌體內(nèi)表達(dá)，并產(chǎn)生GFP[41]。另外一項(xiàng)研究也表明，在circRNAs中人工合成缺乏的IRES，可通過(guò)插入多個(gè)標(biāo)記有 Flag 編碼序列的方式，能保證circRNAs以滾環(huán)擴(kuò)增復(fù)制的形式進(jìn)行翻譯[42]。Chen X等首次建立了匯總可編碼蛋白的circRNAs數(shù)據(jù)庫(kù)(circRNADb)，并對(duì)潛在可能編碼circRNAs中的IRES和ORF進(jìn)行了注釋，并隨后用質(zhì)譜儀驗(yàn)證了他們編碼蛋白的表達(dá)[43]。來(lái)自小鼠和人成肌細(xì)胞的環(huán)狀分子circZNF609 ORF在成環(huán)時(shí)會(huì)產(chǎn)生一個(gè)與線性mRNA轉(zhuǎn)錄本相同的起始密碼子和終止密碼子，并不依賴于mRNA結(jié)構(gòu)的方式來(lái)編碼蛋白[44]。最近的研究表明，富含有N6-腺苷酸甲基化(m6A)的circRNAs序列，可以通過(guò)招募eIF4G2和 YTHDF3促進(jìn)不依賴于5′和3′結(jié)構(gòu)端翻譯的開啟機(jī)制而進(jìn)行編碼蛋白[45]。研究發(fā)現(xiàn)，circFBXW7能翻譯21 kDa并含有185氨基酸的蛋白質(zhì)FBXW7，該蛋白能與USP28競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合來(lái)調(diào)控原癌基因c-Myc 蛋白的穩(wěn)定性，來(lái)進(jìn)一步抑制惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖與發(fā)生[46]。Zhang M等研究亦證實(shí)了circPINT能通過(guò)IRES機(jī)制編碼出含有87aa的全新多肽(PINT87aa)[47]。后續(xù)對(duì)這些能編碼蛋白的circRNAs需要開展功能驗(yàn)證。

3.4 調(diào)控宿主基因的表達(dá)

研究表明，circRNAs與線性 mRNA在序列上具有高度的一致性，能通過(guò)互補(bǔ)序列與U1小核糖核蛋白(U1 small nuclear ribonucleoproteins，U1snRNP)和RNA聚合酶II(RNA polymerase II，Pol II)結(jié)合形成復(fù)合體順式調(diào)控宿主基因的表達(dá)(圖3D)。ciankrd52(Ciankyrin repeat domain 52)是來(lái)源于錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域52的circRNA，通過(guò)特異性的與U1snRNP和Pol II結(jié)合來(lái)調(diào)控宿主基因ankrd52表達(dá)，增強(qiáng)了ankrd52轉(zhuǎn)錄效率。當(dāng)特異性敲出ciankrd52 后，能明顯降低ankrd52的轉(zhuǎn)錄效率，說(shuō)明circRNA具有順式調(diào)控宿主基因表達(dá)功能[48]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)來(lái)源于細(xì)胞中的circEIF3J，同樣能與U1snRNP相互作用，對(duì)宿主基因EIF3J的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控[35]。Li F等證實(shí)，來(lái)源于E3泛素蛋白連接酶的環(huán)狀RNA分子cirITCH與E3泛素蛋白連接酶的3′UTR上同樣都具有miRNAs的結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)miR-7、miR-17和miR-214進(jìn)行海綿吸附。進(jìn)一步分析表明，cirITCH能與這些miRNAs相互作用，增強(qiáng)E3泛素蛋白連接酶的轉(zhuǎn)錄水平[49]。

注：A.充當(dāng)miRNA的分子海綿體； B.充當(dāng)?shù)鞍椎姆肿雍＞d；C.蛋白翻譯； D.基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控。

4 水產(chǎn)circRNAs研究進(jìn)展

當(dāng)前circRNAs 的研究大多數(shù)集中在與人類疾病相關(guān)方面的醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其是在癌癥研究報(bào)道非常多[26，50-51]，而在水產(chǎn)領(lǐng)域相關(guān)研究較少。隨著對(duì)circRNAs深入研究，一些魚類circRNAs也逐漸被發(fā)現(xiàn)與鑒定。Nitsche A等利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)，首次報(bào)道了腔棘魚肌肉可能存在的circRNAs[52]。Shen Y等對(duì)斑馬魚(Daniorerio)進(jìn)行了高通量組織測(cè)序，總共鑒定出了3 868個(gè)circRNAs，其中發(fā)現(xiàn)有1 122個(gè)circRNAs在人類、大鼠和腔棘魚中高度保守，表明這些保守的circRNAs在脊椎動(dòng)物中可能執(zhí)行相同的生理功能[53]。進(jìn)一步的靶點(diǎn)分析顯示有29個(gè)circRNAs能作為斑馬魚miR-2193的海綿吸附體。隨后有學(xué)者也對(duì)斑馬魚的五個(gè)重要組織包括血液、腦、心臟、鰓和肌肉進(jìn)行了circRNAs鑒定，又新發(fā)現(xiàn)3 428個(gè)circRNAs，部分circRNAs通過(guò)(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)得到實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)這些circRNAs都來(lái)源于已知注釋的蛋白和lncRNAs[54]。Liu H等對(duì)斑馬魚胚胎不同發(fā)育時(shí)相進(jìn)行了circRNAs鑒定，共發(fā)現(xiàn)了1 029 circRNAs，并在囊胚期、原腸胚、體節(jié)期和消化管形成期的不同發(fā)育階段都有不同表達(dá)水平[55]，并對(duì)其中隨機(jī)選取的23個(gè)circRNAs證實(shí)了它們的表達(dá)水平。研究結(jié)果暗示著有一些circRNAs可能與調(diào)控斑馬魚胚胎發(fā)育的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)有關(guān)。最近，Sun L Y等通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在斑馬魚中鑒定了3 431與神經(jīng)視網(wǎng)膜相關(guān)的circRNAs[56]。當(dāng)前，斑馬魚是已被科學(xué)界所熟知的重要模式生物，這些發(fā)現(xiàn)的circRNAs能為建立斑馬魚與人類疾病模型提供重要研究?jī)r(jià)值。

此外，在其他魚類中也有circRNAs的研究報(bào)道。Xu S等在大黃魚(Larimichthyscrocea)中發(fā)現(xiàn)了975個(gè)circRNAs，隨機(jī)選擇2個(gè)circRNAs得到了驗(yàn)證[57]。靶點(diǎn)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，在鑒定的975個(gè)circRNAs中，全部存在有5個(gè)以上的miRNAs結(jié)合位點(diǎn)；其中的22個(gè)circRNAs，發(fā)現(xiàn)具有10個(gè)以上的miR-430和let-7家族成員結(jié)合位點(diǎn)，這些靶點(diǎn)的功能分析還需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。最近，Hu X等在鯽魚(Carassiusauratus)腎臟組織中鑒定出了37個(gè)circRNAs，靶點(diǎn)預(yù)測(cè)表明，這些circRNAs作為海綿體能吸附520個(gè)miRNAs[58]。而且，通過(guò)circRNA-miRNA-mRNA間的互作網(wǎng)絡(luò)分析顯示，miRNAs至少能和1個(gè)circRNA和1個(gè)mRNA組成調(diào)控網(wǎng)絡(luò)共同發(fā)揮作用。circRNAs也與魚類病毒感染相關(guān)聯(lián)[59]。他們對(duì)來(lái)自感染GCRV(Grass carp reovirus)第1、3、5、7天草魚(Ctenopharyngodonidella)腎臟組織和未感染的正常組織進(jìn)行了cricRNAs測(cè)序鑒定，總共鑒定了5 052個(gè)新的circRNAs，其中有41個(gè)cricRNAs在感染病毒前和感染后的草魚腎臟組織中呈現(xiàn)差異表達(dá)。進(jìn)一步功能分析顯示，這些cricRNAs的宿主基因與金屬離子結(jié)合，蛋白質(zhì)泛素化，酶活性和核苷酸結(jié)合等生理活動(dòng)相關(guān)。靶點(diǎn)預(yù)測(cè)顯示，有72個(gè)miRNAs能與這些差異表達(dá)的circRNAs相結(jié)合。該研究結(jié)果為將來(lái)在草魚中深入研究circRNAs與宿主基因和病原體之間互作機(jī)理提供了參考。Fan B等首次從無(wú)乳鏈球菌感染的羅非魚(Oreochromisniloticus)腦組織中鑒定了11 263個(gè)circRNAs[60]。而且在這些鑒定的環(huán)狀分子中，99% circRNAs都存在有miRNAs的結(jié)合位點(diǎn)。進(jìn)一步差異表達(dá)分析顯示，有369上調(diào)和468下調(diào)的circRNAs，對(duì)其來(lái)源的宿主基因進(jìn)行KEGG通路分析，結(jié)果表明這些基因都與免疫響應(yīng)有關(guān)。

當(dāng)前在魚類中鑒定的circRNAs，主要集中在對(duì)miRNAs海綿作用和網(wǎng)絡(luò)調(diào)控通路分析，尚無(wú)circRNAs功能研究。如何實(shí)現(xiàn)其miRNA的海綿機(jī)制，未來(lái)需要更進(jìn)一步的功能研究。

5 展望

相比其他的非編碼RNA，circRNAs作為RNA世界的一顆新星，其調(diào)控作用也日顯重要，已成為當(dāng)前生物與醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，circRNAs與疾病的發(fā)生有著密切的相關(guān)性，尤其是與癌癥相關(guān)的疾病，因此，可以作為將來(lái)疾病監(jiān)測(cè)、檢測(cè)與治療的一種新型生物標(biāo)記或者應(yīng)用靶標(biāo)分子。目前，雖然已有極少部分的circRNAs功能得到闡釋，但仍然有大多數(shù)circRNAs功能未知，相關(guān)功能研究依然處于初始階段。隨著新一代的高通量測(cè)序和生物信息學(xué)分析技術(shù)快速發(fā)展以及circRNAs研究工具和數(shù)據(jù)庫(kù)的不斷完善，不僅會(huì)有大量的circRNAs被發(fā)現(xiàn)，而且circRNAs作為重要調(diào)控因子的面紗也將被逐步揭開。在水產(chǎn)研究方面，目前的研究還是停留在魚類以及病原體感染后組織circRNAs的發(fā)掘、驗(yàn)證和組織表達(dá)譜分析，對(duì)于circRNA 的功能研究還僅集中在circRNAs宿主基因的功能注釋或miRNA靶點(diǎn)結(jié)合網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)分析，關(guān)鍵的circRNA功能研究還鮮有報(bào)道。因此未來(lái)還需進(jìn)一步深入明確circRNAs在魚類基因中的調(diào)控作用，加深與魚類經(jīng)濟(jì)性狀和抗病基因的circRNAs篩選、鑒定與功能研究。結(jié)果有助于闡明復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)機(jī)制，更好地為將來(lái)水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物分子育種和品種改良提供理論研究基礎(chǔ)。