牛震丙， 劉靜， 馮利利

傳染性單核細(xì)胞增多癥(infectious mononucleosis,IM)主要是由EB病毒感染所誘發(fā)的一種急性單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)增生性疾病。EB病毒進(jìn)入口腔后患兒機(jī)體處于終身潛伏狀態(tài)，其首先在咽部、涎腺上皮細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制，隨之侵入至血液循環(huán)導(dǎo)致病毒血癥，進(jìn)一步累及淋巴系統(tǒng)的各個(gè)臟器和組織，腎臟損傷最為常見(jiàn)。IM疾病可累及腎實(shí)質(zhì)和間質(zhì)，急性腎炎發(fā)生率可達(dá)13%，主要表現(xiàn)為身體迅速水腫、尿液中出現(xiàn)細(xì)胞管型、顆粒管型和蛋白，嚴(yán)重者會(huì)引發(fā)血尿、小管間質(zhì)腎炎、腎病綜合征、腎衰竭等[1]。本文旨在觀察β2-微球蛋白與中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)聯(lián)合檢測(cè)IM患兒早期腎損傷的價(jià)值分析。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取我院2016年1月至2019年10月收治住院的IM患兒85例，根據(jù)是否有腎損傷分為腎損傷組42例和無(wú)腎損傷組43例。腎損傷組中男23例，女19例；年齡1～10歲，平均(5.50±2.14)歲。無(wú)腎損傷組中男25例，女18例；年齡1～11歲，平均(6.01±2.11)歲。同期選取我院健康體檢兒童40例為健康對(duì)照組，其中男24例，女16例；年齡1～12歲，平均(6.50±2.10)歲。3組研究對(duì)象在性別、年齡方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《臨床疾病診斷與療效判斷標(biāo)準(zhǔn)》中IM的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)符合IM的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡1～12歲；(3)患兒家屬知情同意。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)合并細(xì)菌、支原體、衣原體等病毒感染；(2)合并先天畸形、自身免疫性疾病。

1.5 方法

1.5.1 標(biāo)本采集 在兩組兒童入組后次日早晨留取尿液送至實(shí)驗(yàn)室，采用貝克曼庫(kù)爾AvantiJ-E型號(hào)離心機(jī)以3 500 r/min離心15 min，檢測(cè)β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、N-α-乙?；?β-D氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-glucosaminidasea,NAG)。

1.5.2 檢測(cè)方法 采用日立7600全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，采用乳膠免疫比濁法檢測(cè)β2-微球蛋白和NGAL，采用免疫透射比濁法檢測(cè)微量白蛋白/肌酐，采用低離子聚凝胺法檢測(cè)NAG。操作步驟：將試劑均分為R1和R2，將尿液放置于全自動(dòng)生化分析儀內(nèi)以終點(diǎn)法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為415 nm；設(shè)立3個(gè)空樣杯，分別加入校準(zhǔn)品、標(biāo)本、生理鹽水各15 μL，再加入R1試劑250 μL，孵育5 min后讀取吸光度A1，再加入R2試劑50 μL，反應(yīng)5 min后讀取吸光度A2，并計(jì)算出ΔA。ΔA=A2-A1；ΔA測(cè)定為檢測(cè)樣本吸光度變化；ΔA標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)品吸光度變化。項(xiàng)目含量=(ΔA測(cè)定/ΔA標(biāo)準(zhǔn))×C標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 3組β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、NAG水平對(duì)比 腎損傷組β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、NAG水平均高于無(wú)腎損傷組和健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；無(wú)腎損傷組和健康對(duì)照組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、NAG水平對(duì)比

2.2 3組β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、NAG陽(yáng)性率對(duì)比 腎損傷組β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、NAG陽(yáng)性率均高于無(wú)腎損傷組和健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.017)；無(wú)腎損傷組和健康對(duì)照組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.017)。見(jiàn)表2。

表2 3組β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、NAG陽(yáng)性率對(duì)比[n(%)]

3 討論

IM疾病主要是由EB病毒感染所致，EB病毒具有嗜淋巴細(xì)胞的特性，感染后細(xì)胞免疫被激活，侵犯淋巴免疫系統(tǒng)和血液系統(tǒng)，增生的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)至泌尿系統(tǒng)，進(jìn)而引發(fā)腎功能損傷[3]。目前臨床上對(duì)IM早期腎損傷疾病常用尿液或血液生化指標(biāo)進(jìn)行診斷，由于患兒年齡較小，反復(fù)進(jìn)行抽血會(huì)加重患兒身體、心理痛苦感，使患兒不配合醫(yī)護(hù)人員，增加醫(yī)護(hù)人員的負(fù)擔(dān)，因此選擇尿液中β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、NAG四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)行診斷。

β2-微球蛋白是人類白細(xì)胞抗原Ⅰ類抗原的輕鏈部分，是指由淋巴細(xì)胞生成的游離小分子蛋白，與免疫球蛋白的穩(wěn)定區(qū)結(jié)構(gòu)相似；β2-微球蛋白分子量低，其可從腎小球自由濾過(guò)，99%被近端腎小管吸收；β2-微球蛋白只通過(guò)腎臟分解代謝，大部分β2-微球蛋白是由腎近曲小管的小管細(xì)胞作用進(jìn)入至胞漿內(nèi)，微量部分通過(guò)尿液排出，進(jìn)而反映了腎小球的濾過(guò)功能，當(dāng)早期腎損傷時(shí)腎小球?yàn)V過(guò)功能下降，尿液中的β2-微球蛋白含量升高，因此β2-微球蛋白對(duì)診斷早期腎功能損傷有較高的特異性和敏感性[4-5]。

微量白蛋白是經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)的最小的蛋白，腎小管可完全吸收，當(dāng)IM患者發(fā)生腎損傷時(shí)，腎小球基底膜增厚、系膜增生、腎小球硬化及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生造成腎小球基底膜通透性提高和腎組織表面電荷發(fā)生變化，進(jìn)而導(dǎo)致腎小管重吸收能力降低，尿微量白蛋白排出量加大，促使尿微量白蛋白水平持續(xù)性提高。肌酐是一種小分子物質(zhì)，可通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)隨著尿液排出，人體每日排出的肌酐量較為恒定，肌酐與尿液濃度有較好的相關(guān)性；當(dāng)肌酐作為校正時(shí)可降低尿液濃度對(duì)微量白蛋白的影響，可有效反映腎臟功能。微量白蛋白/肌酐檢測(cè)時(shí)相對(duì)穩(wěn)定，不易受發(fā)熱、運(yùn)動(dòng)、藥物等外界因素的影響，對(duì)診斷尿蛋白具有較高的敏感性，其可作為評(píng)估局部性或全身性炎癥反應(yīng)的腎功能指標(biāo)，是腎損傷發(fā)生的征兆[6]。

NAG主要存在于血液、體液和各種組織器官內(nèi)，是溶酶體內(nèi)的高分子水解酶，大量的NAG主要分泌在腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)。在正常人體中NAG無(wú)法通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)到達(dá)尿液，在IM早期腎損傷患兒存在腎小球高濾過(guò)，腎小管上皮細(xì)胞溶酶體被激活，生成溶酶體增殖自溶現(xiàn)象；腎小管上皮細(xì)胞受損，造成細(xì)胞破壞、脫落和釋放，導(dǎo)致NAG活性增高，尿液中排出量增多。IM早期腎損傷患兒由于小血管痙攣，造成腎臟血氧供給不足、近曲小管通透性增加，NAG因子得以釋放，尿液中NAG含量提高[7]。

NGAL是在被激活中性粒細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)的小分子量分泌性的蛋白，主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞等特定的上皮細(xì)胞內(nèi)，其不僅具有調(diào)節(jié)金屬蛋白酶和運(yùn)輸疏水性小分子的作用，還可參與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、信號(hào)傳導(dǎo)的發(fā)展進(jìn)程中。NGAL可激活腎祖細(xì)胞并向腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行分化，具有修復(fù)N-鈣黏蛋白和抑制細(xì)胞凋亡的作用；當(dāng)腎臟出現(xiàn)毒性損傷時(shí)，NGAL含量會(huì)在2 h內(nèi)上升，在發(fā)生腎損傷24～48 h內(nèi)的NGAL濃度對(duì)診斷IM早期腎損傷的準(zhǔn)確率可達(dá)85%～88%，中性粒細(xì)胞釋放大量NGAL，進(jìn)而影響腎小球?yàn)V過(guò)對(duì)NGAL的清除，使NGAL含量在疾病早期大幅度升高[8-9]。本研究顯示，腎損傷組β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、NAG水平均高于無(wú)腎損傷組和健康對(duì)照組，腎損傷組尿液檢測(cè)陽(yáng)性率順序?yàn)镹GAL>NAG>β2-微球蛋白>微量白蛋白/肌酐，四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)靈敏度和特異性高于單項(xiàng)檢測(cè)，利于IM早期腎損傷患兒的診斷[10-11]。

綜上所述，β2-微球蛋白、NGAL、微量白蛋白/肌酐、NAG四項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)可有效診斷IM患兒早期腎損傷，利于患兒及時(shí)確診和治療，并降低患兒腎損傷程度，提高預(yù)后效果，值得在臨床上推廣。