魏 玲，王鴻驍，楊國淋?

（1.南充職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)系 637131；2.川北醫(yī)學(xué)院 637000）

實驗動物和動物實驗是生物醫(yī)學(xué)研究不可缺少的材料和手段，生命科學(xué)的發(fā)展常常需要使用動物模型來作為臨床研究的基礎(chǔ)。實驗動物對于人類研究生命科學(xué)具有重要的意義，是生命科學(xué)研究條件中的首要要素，其中實驗動物模型的選擇和動物實驗的結(jié)果直接影響到研究課題的確立和研究成果的水平[1]。動物實驗是培養(yǎng)學(xué)生外科手術(shù)操作能力、科研能力、科研思維必不可少一門課程，能夠更好地將理論與實踐結(jié)合，使學(xué)生在實踐中進(jìn)行科研創(chuàng)新。大學(xué)生開放性實驗是在綜合運(yùn)用該課程所學(xué)的知識基礎(chǔ)上，以學(xué)生為主體，按實驗?zāi)康倪M(jìn)行操作，在老師的指導(dǎo)下由學(xué)生獨(dú)立完成，從而培養(yǎng)學(xué)生的實踐能力和創(chuàng)新精神。實驗動物疾病模型廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究，建立的很多動物模型已經(jīng)廣泛被應(yīng)用于治療人體疾病，如胃食管反流模型，胃潰瘍動物模型，Ⅱ型糖尿病模型，急性心肌梗塞動物模型，家兔肺炎衣原體感染模型等[2-6]。胃是人體重要的消化器官之一，是食物的中轉(zhuǎn)站和臨時倉庫，是人體消化道中最龐大的部分，目前關(guān)于胃的研究很多，家兔的胃切除模型常常被用于研究家兔的功能研究。嚴(yán)杰等[7]人采用電針家兔足陽明經(jīng)頭面“四白學(xué)”，軀干“梁門”穴，下肢“足三里”穴，觀察其對胃黏膜損傷的防御性保護(hù)作用，從而證實了足陽明經(jīng)與胃具有相關(guān)性。郭濤等[8]通過研究幽門螺桿菌及其培養(yǎng)上清液粗提蛋白對兔離體胃壁細(xì)胞酸分泌的影響，證實了幽門螺桿菌及其分泌的空泡毒素（VacA）可能通過下調(diào)壁細(xì)胞H+-k+ ATP酶表達(dá)水平來抑制組胺刺激的壁細(xì)胞酸分泌。羅小林等[9]通過觀察家兔不同胃切除手術(shù)術(shù)后殘胃黏膜的病理改變，分析殘胃病變的發(fā)生率和病變程度，討論不同術(shù)式的優(yōu)劣性。Vera等[10]以125i標(biāo)記的豬胃動素為示蹤劑配體，采用直接結(jié)合技術(shù)對兔胃竇和十二指腸平滑肌組織胃動素受體進(jìn)行了研究。

本文以家兔為實驗動物模型對部分胃切進(jìn)行開放性探索實驗研究，旨在培養(yǎng)學(xué)生的動手能力，同時開拓學(xué)生的科研思維，也為開展此類實驗的研究者提供一定的參考意義。

1 實驗動物與材料

家兔10只，雌雄兼有，12月齡，3.0±0.2kg，由川北醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。麻醉劑：3%戊巴比妥鈉；常規(guī)手術(shù)器械：方盤、腰盤、3號刀柄、有齒鑷、無齒鑷、組織剪、彎頭止血鉗、直頭止血鉗、腸鉗、持針鉗、三角針、圓針、刀片、保定器、綁定器、碘伏、酒精、棉球等由川北醫(yī)學(xué)院實驗動物中心實驗室提供。主要實驗器械如圖1所示

圖1 實驗器械

2 家兔胃切操作流程

手前家兔先禁食禁水12h，整個手術(shù)在屏障系統(tǒng)的無菌實驗室完成，要求學(xué)生嚴(yán)格按照無菌原則進(jìn)行外科手術(shù)實驗，避免手術(shù)過程中感染，手術(shù)嚴(yán)格模擬臨床手術(shù)過程中的注意事項和操作。實驗分為10個動物實驗小組，每組由4人組成，包括主刀、一助、器械護(hù)士和麻醉師，分工明確，知曉職責(zé)。在手術(shù)開始前學(xué)生生要重點(diǎn)學(xué)習(xí)家兔的生物學(xué)特性、知道胃在解剖學(xué)上的位置、無菌知識、手術(shù)器械的分類和使用、動物福利等理論知識。對家兔的保定、抓取、耳緣靜脈注射等實驗?zāi)苁炀毑僮鳌＜彝梦盖谐龑嶒炇中g(shù)流程主要包括：①家兔保定；②耳緣靜脈注射麻醉；③開口；④ 結(jié)扎；⑤胃切除；⑥縫合；⑦術(shù)后護(hù)理。

2.1 家兔的保定

右手抓住家兔頸背部皮膚，輕輕提起，左手托住其臀部，使其呈坐位姿勢，類似于懷抱嬰兒（抓取的過程注意不要直接抓取家兔的耳朵），然后用家兔專用固定器保定家兔，讓其四肢伸展俯爬在固定器上如圖2。

圖2 家兔的保定

2.2 耳緣靜脈麻醉

首先使用精度為0.1g的電子稱重家兔，然后按1.0mL/kg計算濃度為3%戊巴比妥鈉麻醉劑量。在所需部位先揪除毛發(fā)，然后先碘伏后用酒精棉球擦拭使耳緣靜脈血管突出，左手拇指和食指在上部，中指、無名指和小指在耳緣下部，夾住家兔的耳朵固定。右手持注射器使針頭由靜脈中末端針尖斜面朝上進(jìn)針注射麻醉劑，具體操作示意圖見圖3-4。

圖3 耳緣靜脈消毒

圖4 耳緣靜脈注射

2.3 開口

待家兔完全麻醉后，將其四肢和頭部固定在家兔固定板上，為避免動物麻醉過程中發(fā)生窒息，可將舌頭拉伸至嘴角。然后在手術(shù)部位用剃毛刀除毛，將肋弓上邊緣到臍平面的毛剃干凈，裸露皮膚進(jìn)行碘伏消毒，然后鋪設(shè)創(chuàng)巾，由助手將皮膚繃緊，主刀手慢慢的進(jìn)行開口，沿腹白線割開皮膚，再沿著腹白線切開肌肉暴露腹腔，尋找合適的胃組織，一般選取胃底，體部血管少的部位。具體操作如圖5-8。

圖5 家兔固定

圖6 除毛

圖7 割開皮膚后

圖8 腹腔中暴露的胃

2.4 家兔胃切除和縫合

家兔切口找到合適的胃組織后，先做牽引線，無需打結(jié)，需穿過漿膜和肌層，一助用止血鉗對側(cè)夾起胃組織隔開胃壁并做好紗布止血準(zhǔn)備，防止胃糜涌出，防止割到血管，然后將胃糜倒入腰盤之中，進(jìn)行取材，切2cm2胃組織于盤上留樣。然后進(jìn)行胃縫合，縫合包括胃壁縫合，肌肉縫合，皮膚縫合3個部分。根據(jù)縫合原則，胃壁縫合采用康奈爾縫合，然后依次進(jìn)行肌肉縫合和皮膚縫合，肌肉縫合采用連續(xù)縫合方式，皮膚縫合采用間斷縫合方式，具體操作流程見圖9-16。

圖9 做牽引線

圖10 夾取胃組織

圖11 割開胃壁

圖12 取材

圖13 胃組織

圖14 胃壁縫合

圖15 肌肉縫合

圖16 皮膚縫合

2.5 術(shù)后護(hù)理

家兔胃切除手術(shù)完成后，待動物蘇醒，將其放在清潔的專業(yè)兔籠中飼養(yǎng)，溫度維持在25℃左右，在術(shù)后12h內(nèi)飲水里面加入20%葡萄糖或維生素C，之后按照正常飼養(yǎng)條件每日定時喂養(yǎng)，每日觀察動物健康狀況，一周后記錄動物的存活率。

3 小結(jié)與討論

本實驗經(jīng)術(shù)后良好的護(hù)理 10只家兔全部存活，存活率達(dá)到100%。在開展家兔胃切除實驗中需要注意以下幾點(diǎn)：①麻醉的種類和劑量，動物的體型和種類的不同，對麻醉的耐受程度也有很大的差異，因此要對動物的體型和種類選擇麻醉劑的種類和劑量，手術(shù)過程中如果家兔出現(xiàn)呼吸加快或者蘇醒的狀況則表明麻醉深度不夠，要補(bǔ)充麻醉藥物，在手術(shù)過程中還需注意檢測家兔心跳及呼吸情況；②兔胃切除開口不宜過大，一般在5cm左右，如果開口過大一方面不利于家兔傷口愈合，而另一方面容易引起后期感染；③重視動物福利，實驗過程中要遵守3R原則，術(shù)后應(yīng)得到良好護(hù)理，家兔膽小怕驚，對聲音敏感，耐寒不耐熱，耐干不耐濕，術(shù)后護(hù)理必須提供清潔安靜的飼養(yǎng)環(huán)境是保證動物術(shù)后恢復(fù)和存活率的重要保證。

家兔胃切實驗手術(shù)中包含了動物外科手術(shù)的基本知識，學(xué)生通過本外科實驗?zāi)茉诶碚摰幕A(chǔ)上更加深入掌握該技能，使學(xué)生能夠充分理解手術(shù)前的準(zhǔn)備、手術(shù)過程中的無菌觀念、麻醉方法及麻醉時出現(xiàn)意外的處理、手術(shù)的切口和縫合方法等知識，通過動物活體實驗可以激發(fā)學(xué)生的同情心理，學(xué)生充分體會到動物福利，3R原則等抽象概念，本研究為開展類似實驗研究的師生提供了一定的參考價值。