宋 鴿，王克超，關(guān)蘊(yùn)杰，秦思文，李慧娟，王 宏

（蒙牛乳業(yè)（沈陽(yáng)）有限責(zé)任公司，遼寧沈陽(yáng)110122）

地塞米松是一種人工合成的腎上腺皮質(zhì)激素，具有抗病毒、消炎、促進(jìn)泌乳等多種功效，在養(yǎng)殖業(yè)中被頻繁使用，造成動(dòng)物乳源不同程度的藥物殘留，人體攝入過(guò)量可能會(huì)引起激素代謝紊亂、肥胖、骨質(zhì)疏松等病癥，并可能產(chǎn)生致畸、致癌等風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。

地塞米松殘留量項(xiàng)目為國(guó)家監(jiān)管機(jī)構(gòu)重點(diǎn)抽檢指標(biāo)，根據(jù)我國(guó)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）、中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)的規(guī)定，地塞米松在牛奶中的最大殘留限量為0.3 μg/kg[3-4]。目前，地塞米松檢測(cè)方法主要有膠體金免疫層析法[5]、酶聯(lián)免疫法[6]、氣相色譜法[7]、氣相色譜-質(zhì)譜法[8]和液相色譜-質(zhì)譜法[9-11]等。其中液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用[12-14]。本文基于《牛奶和奶粉中地塞米松殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 22978—2008）和農(nóng)業(yè)部1031號(hào)公告《動(dòng)物源性食品中糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物多殘留檢測(cè) 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，通過(guò)簡(jiǎn)化色譜條件、優(yōu)化樣品前處理，更換離子源，建立一種快速有效的檢測(cè)方法，提高檢驗(yàn)結(jié)果精準(zhǔn)性。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

XSE204電子天平；UPLC-TQD高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電噴霧離子源（ESI-）；渦旋混合儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；高速冷凍離心機(jī)；氮吹儀；固相萃取裝置。

1.1.2 試劑

色譜純乙腈、甲醇、色譜純甲酸；地塞米松標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度＞99%）。HLB固相萃取柱；雞心瓶 150 mL；一次性有機(jī)過(guò)濾器0.22 μm。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

準(zhǔn)確量取地塞米松標(biāo)準(zhǔn)溶液，用基質(zhì)空白配制0.5 ng/mL、1 ng/mL、2.0ng/mL、5.0 ng/mL和10.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)≥0.99。（現(xiàn)用現(xiàn)配）。

1.2.2 樣品處理

稱取5～10 g樣品（精確到0.000 1 g）置于50 mL塑料離心管中，加入20 mL乙腈，渦旋混勻3 min，以8 000 r/min離心10 min，取上清液至雞心瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（50±5）℃水浴上減壓蒸發(fā)，將提取液濃縮至體積小于5 mL。

1.2.3 凈化

將提取液移至經(jīng)預(yù)處理的HLB固相萃取柱中，分別用兩次10 mL一級(jí)水洗滌雞心瓶，將洗滌液移至HLB固相萃取柱中，棄去全部流出液，抽干，用8 mL甲醇以≤ 3 mL/min流速洗脫，收集洗脫液于玻璃試管中，（50±5）℃水浴中氮?dú)獯蹈?，? mL的20%乙腈水溶解殘?jiān)?，?jīng)過(guò)0.22 μm一次性有機(jī)過(guò)濾器過(guò)濾后供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.2.4 測(cè)定

（1）液相色譜儀參考條件。色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流速：0.3 mL/min。

（2）質(zhì)譜參考條件。離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：負(fù)離子掃描；定量離子對(duì)：437.0/361.0，定性離子對(duì)：437.0/391.5；正離子掃描：定量離子對(duì)：393.2/373.2，定性離子對(duì)：393.2/355.2；流動(dòng)相：A相：乙腈，B相：0.1%甲酸水，流動(dòng)相梯度洗脫條件和流速見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件和流速

1.2.5 結(jié)果計(jì)算：

式中：X-試樣中地塞米松殘留量，單位為μg/kg；C-從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的試樣溶液中被測(cè)組分的濃度，單位為ng/mL；V-試樣溶液定容體積，單位為mL；m-最終試樣溶液所代表的的試樣質(zhì)量，單位為g。

2 結(jié)果與分析

2.1 改進(jìn)研究試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

依據(jù)1.2.1制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線y=155.845x+4.171 81，相關(guān)系數(shù)為r2=0.997 456，符合相關(guān)系數(shù)≥0.99的要求。

2.1.2 方法檢出限

由表2可知，依據(jù)《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 理化部分總則》（GB/T 5009.1—2003）附錄A中色譜法檢出限為3倍儀器噪音/標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中的斜率[15]，理論計(jì)算出該方法檢出限為0.2 μg/kg，故添加0.2 μg/kg濃度的樣品，該濃度加標(biāo)樣品能夠檢出，色譜峰型正常，回收率結(jié)果均在《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）[16]中60%～120%，結(jié)果符合要求。

表2 方法檢出限結(jié)果

2.1.3 回收率

由表3可知，添加濃度為0.2 μg/kg、 0.3 μg/kg、 1.0 μg/kg共3個(gè)濃度點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)6次平行測(cè)試，回收率結(jié)果均在《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）中60%～120%范圍內(nèi)，結(jié)果符合要求。

表3 加標(biāo)回收率結(jié)果

2.1.4 精密度

由表4可知，添加定量檢測(cè)限、限量值、5倍定量檢測(cè)限3個(gè)濃度樣品，連續(xù)檢測(cè)6個(gè)平行樣，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%分別為：12.4%、7.3%、7.3%。依據(jù)《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）F.3中精密度的要求，即當(dāng)被測(cè)組分含量在0.1 μg/kg時(shí)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)≤43%，當(dāng)被測(cè)組分含量在1 μg/kg時(shí)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)≤30%，符合方法要求。

表4 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果

2.2 改進(jìn)后方法對(duì)比

使用改進(jìn)方法與國(guó)標(biāo)方法分別檢測(cè)定量檢測(cè)限、限量值、5倍定量檢測(cè)限3個(gè)濃度樣品平行試驗(yàn)，回收率結(jié)果對(duì)比，改進(jìn)方法優(yōu)于國(guó)標(biāo)方法，具體見(jiàn)表5。

表5 改進(jìn)方法與國(guó)標(biāo)方法對(duì)比表

3 結(jié)論與討論

本研究是應(yīng)用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法建立一種快速有效檢測(cè)乳中地塞米松的檢測(cè)方法，與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中的方法相比，本方法更改了液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀的離子源，優(yōu)化了前處理過(guò)程，簡(jiǎn)化了操作步驟，重新設(shè)定了質(zhì)譜參數(shù)，縮短了分析時(shí)間，本研究標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，回收率70.0%～102.7%，精密度7.3%～12.4%，滿足《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）的標(biāo)準(zhǔn)要求，有效提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，滿足日常檢測(cè)需求，解決了實(shí)驗(yàn)室資源配置問(wèn)題，為保證乳的質(zhì)量安全提供了技術(shù)保障，值得在實(shí)驗(yàn)室中推廣。