信傳鑫，楊金濤，戴曉婧，蘇 玲, ，王 琦,

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學，食藥用菌教育部工程研究中心，吉林長春 130118；2.吉林農(nóng)業(yè)大學植物保護學院，吉林長春 130118；3.吉林農(nóng)業(yè)大學中藥材學院，吉林長春 130118）

樺褐孔菌（Inonotus obliquus（Ach. ex Pers.）Pilat）別名白樺茸，隸屬于擔子菌門（Basidiomycota），傘菌綱（Agaricomycetes），銹革孔菌目（Hymenochaetales），銹革孔菌科（Hymenochaetaceae），纖孔菌屬（Inonotus）[1]。早在16世紀，俄羅斯人便使用樺褐孔菌預防及治療各種疑難雜癥[2]，在芬蘭、波蘭等歐洲國家也被廣泛使用[3]?，F(xiàn)代學者研究表明，樺褐孔菌多糖同時具有抗腫瘤[4]、抗氧化[5]、免疫調(diào)節(jié)[6-7]等生物活性，作為純天然藥物多糖無/或具有較低的毒副作用，具有較高研究價值。而在樺褐孔菌多糖提取過程中，會有大量色素混于其中，使得提取的樺褐孔菌多糖純度不高，后續(xù)分離純化難度大、效率低，影響高純度多糖的制備、結(jié)構(gòu)分析、藥理活性研究[8]。因此，采用適當?shù)姆椒▽搴挚拙嗵巧剡M行脫色處理是其分離純化中必要的工藝步驟。

目前，常用的多糖脫色方法有活性炭吸附、過氧化氫、聚酰胺柱層析、大孔樹脂等[9]，其中活性炭吸附法在吸附色素的同時也將多糖一同吸附，多糖的損失較大，回收率低[10]；利用過氧化氫脫色時，多糖易發(fā)生水解，從而改變多糖結(jié)果及生物活性[11]；而聚酰胺預處理耗時較長且耗費大量試劑；大孔樹脂是兼具篩選與吸附功能的高分子材料，與上述兩種脫色方法相比，具有清洗簡單方便、容易再生、反應溫和、吸附力強、不改變多糖原有結(jié)構(gòu)與生物活性的優(yōu)點[12]，并且在吸附色素時，還可同步去除蛋白等雜質(zhì)[13]。但是，大孔樹脂種類繁多，包括極性、中極性、弱極性等不同類型，而且同一類型的大孔樹脂還有多種不同型號[14]。因此，在利用大孔樹脂吸附色素時，需根據(jù)被吸附物質(zhì)的性質(zhì)，選擇適宜的大孔樹脂。目前，大孔樹脂已被廣泛應用于吸附多糖中色素[15-16]，也有研究者利用S-8、D101等大孔樹脂對樺褐孔菌脫色[17-18]，但是其對大孔樹脂去除樺褐孔菌色素的機理尚不清楚，使吸附操作及大規(guī)模生產(chǎn)缺乏理論基礎，限制了樺褐孔菌多糖的實際應用。因此，本文對17種不同型號的大孔樹脂吸附樺褐孔菌多糖色素的吸附率及多糖保留率進行了比較，確定最適宜大孔樹脂型號，并對其吸附色素的動力學及熱力學進行探究，在此基礎上，優(yōu)化其動態(tài)洗脫條件，確定最佳洗脫工藝，為樺褐孔菌多糖的分離純化提供了理論及實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

樺褐孔菌菌核 吉林省長春市健龍生物科技有限公司；無水乙醇、苯酚、濃硫酸、氯仿、正丁醇 均為國產(chǎn)分析純，北京化工廠；17個不同型號大孔樹脂型號包括NKA-9、HPD-500、LSA-700B、LSA-10、LX-T5、DM130、LX-68、LX-8、LX-10G、LX-19、LX-300C、LX-68G、AB-8、LX-T28、XDA-7、LX-60、D101 北京鼎國生物科技有限公司。

RE-5210A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；ST16高速冷凍離心機 賽默飛世爾科技中國有限公司；BSA224S電子天平 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；YC-370冰箱 澳柯瑪集團；TU-1810紫外可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責任公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 樺褐孔菌多糖提取 樺褐孔菌菌核經(jīng)中藥粉碎機粉碎，過60目篩，獲得的菌粉備用。稱取500 g干燥菌粉，置于燒杯中，按料液比1:41(g/mL)加入蒸餾水，于水浴鍋80 ℃提取2 h。冷卻后8000 r/min離心10 min去除菌渣，收集提取液加熱濃縮至原有體積的1/5。放涼，按體積比1:4加無水乙醇，4 ℃靜置過夜醇沉12 h。第2 d，8000 r/min離心10 min，取沉淀，烘干。溶解并加入等體積Sevag試劑（三氯甲烷:正丁醇=4:1）除蛋白，透析去除小分子雜質(zhì)，凍干得樺褐孔菌多糖。

1.2.2 大孔樹脂預處理 將17種大孔樹脂分別浸泡于95%乙醇中24 h，充分溶脹，24 h后用95%乙醇清洗大孔樹脂直至無白色渾濁，再用去離子水洗至完全去除醇味，備用。

1.2.3 大孔樹脂篩選 稱取500 mg樺褐孔菌多糖，溶解于500 mL去離子水中配成1 mg/mL樺褐孔菌多糖溶液。分別稱取不同型號預處理后的大孔樹脂3.0 g于50 mL三角瓶中，再加入1 mg/mL多糖溶液10 mL，設置3組平行對照。將三角瓶置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，30 ℃吸附24 h后，取樺褐孔菌多糖溶液。450 nm測定色素吸光度，苯酚硫酸法于490 nm檢測糖含量。色素吸附率及多糖保留率計算公式如下[19]：

將吸附飽和后的大孔樹脂使用蒸餾水洗滌過濾，加入70%乙醇10 mL于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，30 ℃解吸24 h，取上層液體450 nm測定色素吸光度。

式中：A0為溶液初始色素吸光度；A1為溶液去除色素后的吸光度；A2為溶液解吸后的吸光度；M0為溶液初始多糖含量，mg/mL；M1為去除色素后溶液中的多糖含量，mg/mL。

1.2.4 大孔樹脂吸附動力學分析 稱取9份9 g HPD-500大孔樹脂，分別裝入9個三角瓶。稱取270 mg樺褐孔菌多糖，以蒸餾水溶為1 mg/mL多糖溶液，每個三角瓶中放入30 mL多糖溶液。分別在25、35、45 ℃以170 r/min恒溫震蕩300 min，在10、20、30、45、60、90、120、150、180、210、240、300 min時進行取樣，每個溫度設置三組對照。

色素吸附量計算方程如下[20]：

式中：Qt為t時刻的色素吸附量，1/g樹脂；A0為溶液初始色素吸光度；At為t時刻吸光度；m為樹脂的質(zhì)量，g。

1.2.5 大孔樹脂吸附熱力學分析 分別稱取9份HPD-500大孔樹脂1、2、3、4、5、6 g放入三角瓶中，每瓶加入10 mL的1 mg/mL樺褐孔菌多糖。分別在25、35、45 ℃下，以170 r/min恒溫震蕩150 min。測定多糖溶液在450 nm下吸光度。

式中：qe為 平衡吸附量，mmol/mL；Ce為吸附平衡時的溶質(zhì)濃度，mg/mL；A0為溶液初始色素吸光度；A為脫色后溶液吸光度。

1.2.6 動態(tài)吸附實驗

1.2.6.1 泄露曲線的繪制 大孔樹脂HPD-500裝入層析柱，平衡。10 mg/mL樺褐孔菌多糖溶液上樣，洗脫流速1.0 mL/min，每40 s收集一支試管，當洗脫液中有樣品泄露停止。以蒸餾水為空白對照，在450 nm波長處測定吸光度，繪制泄露曲線。樹脂吸附量=泄露點前上柱樣品體積×樣品濃度

1.2.6.2 徑高比優(yōu)化 層析柱分別按徑高比1:8、1:10、1:12裝柱，平衡。10 mg/mL樺褐孔菌多糖溶液上樣于3個層析柱，每個柱中1 mL，吸附1 h，蒸餾水以流速1.5 mL/min洗脫，收集洗脫液，濃縮定容[21]。計算色素吸附率、多糖保留率，進行綜合評分。

1.2.6.3 吸附時間優(yōu)化 層析柱按徑高比1:8裝柱，平衡。10 mg/mL樺褐孔菌多糖溶液上樣于3個層析柱，每個柱中1 mL，分別吸附1、2、4 h，蒸餾水以流速1.5 mL/min洗脫，收集洗脫液，濃縮定容。計算色素吸附率、多糖保留率，進行綜合評分。

1.2.6.4 上樣量優(yōu)化 層析柱按徑高比1:8裝柱，平衡。分別配制10、20、40 mg/mL多糖溶液，上樣于層析柱中，吸附1 h，蒸餾水以流速1.5 mL/min洗脫，收集洗脫液，濃縮定容。計算色素吸附率、多糖保留率，進行綜合評分。

1.2.6.5 洗脫流速優(yōu)化 層析柱按徑高比1:8裝柱，平衡。10 mg/mL樺褐孔菌多糖溶液上樣于3個層析柱，每個柱中1 mL，吸附1 h，蒸餾水洗脫，3個層析柱的洗脫流速分別為1.0、1.5、2 mL/min，收集洗脫液，濃縮定容。計算色素吸附率、多糖保留率，進行綜合評分。

1.2.7 樺褐孔菌多糖純度測定 取未純化10 mg/mL多糖溶液1 mL，測定多糖含量。層析柱分別按徑高比1:10裝柱，平衡。10 mg/mL樺褐孔菌多糖溶液1 mL上樣于層析柱，吸附1 h，蒸餾水以流速1.5 mL/min洗脫，收集洗脫液，測定多糖含量，并烘干稱重。

式中：C為樺褐孔菌多糖含量，mg/mL；V為溶液體積，mL；m為多糖質(zhì)量，mg。

1.2.8 樹脂重復使用周期 層析柱分別按徑高比1:10裝柱，平衡。10 mg/mL樺褐孔菌多糖溶液1 mL上樣于層析柱，吸附1 h，蒸餾水以流速1.5 mL/min洗脫，收集洗脫液，濃縮定容，脫色完成后，70%乙醇進行解吸，蒸餾水平衡后再次上樣，上樣8次。分別測定并計算8次色素吸附率、多糖保留率，進行綜合評分。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理采用Excel2016、Origin9.1進行數(shù)據(jù)整理擬合與繪圖，SPSS21進行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 大孔樹脂篩選

不同型號大孔樹脂對樺褐孔菌多糖色素吸附及多糖保留的結(jié)果見表1。實驗所選17種不同型號的大孔樹脂吸附樺褐孔菌多糖色素的能力差異明顯，其中對色素吸附率最高的大孔樹脂為LSA-700B，其色素吸附率為48.56%；而對色素吸附率最低的大孔樹脂為LX-68，其色素吸附率僅為4.64%。17種不同型號的大孔樹脂對樺褐孔菌多糖的保留率也有所差異，LSA-10保留率最高為99.35%，LX-300C保留率最低僅為17.16%。

表1 樹脂靜態(tài)吸附實驗結(jié)果Table 1 Results of resin static adsorption

但作為純化樺褐孔菌多糖的大孔樹脂，多糖的保留率與色素的吸附率都應是選擇其型號的條件。故綜合色素吸附率和多糖保留率2項指標進行評分，大孔樹脂HPD-500在吸附樺褐孔菌多糖色素時，效果最佳，因此選擇HPD-500樹脂進行后續(xù)實驗研究。

大孔樹脂吸附色素后，70%酒精進行色素靜態(tài)解除吸附。解吸效果如表2所示，各大孔樹脂解吸效果有所差異，其中LSA-10、HPD-500、NKA-9解吸效果最佳，而LX-300C大孔樹脂僅解吸30.33%。作為色素吸附率與多糖保留率綜合評分最高的HPD-500大孔樹脂，其同樣具有較好的色素解吸率，達到了89.64%，可進行重復使用，且色素可進行回收。

表2 樹脂解吸實驗結(jié)果Table 2 Results of resin static desorption

2.2 動力學曲線

在不同溫度下，大孔樹脂HPD-500對樺褐孔菌多糖色素靜態(tài)吸附動力學曲線如圖1。在前50 min吸附量較大，為快速吸附階段，此階段反應推動力可能為固液兩相中吸附質(zhì)的濃度差以及吸附劑表面大量的空余吸附位點；50 min后吸附速率有所降低，為慢速吸附階段，固液相中吸附質(zhì)濃度差降低且吸附劑表面位點趨于飽和，直至130 min達到吸附平衡，吸附速率減小到零。

圖1 樺褐孔菌色素在HPD-500樹脂上的吸附動力學曲線Fig.1 Adsorption kinetic curves of flavonoids of HPD-500 resinto Inonotus obliquus polysaccharide pigment

2.3 吸附動力學模型

分別使用Lagergren即準一級動力學模型、準二級動力學模型、顆粒內(nèi)擴散模型來擬合大孔樹脂在25、35、45 ℃時的吸附過程[22]。

式中：k1為 準一級吸附速率常數(shù)，min-1；k2為準二級吸附速率常數(shù)，mg/（g·min）；k3為粒內(nèi)擴散方程常數(shù)，mg/（g·min）；C為常數(shù)；qt為單位樹脂在t時刻的吸附量，g-1；qe為單位樹脂的飽和吸附量，即130 min時的吸附量，g-1；t為時間，min。

以時間t橫坐標，分別以lg（1-F）（F=qe/qt） 、t/qt為縱坐標繪制準一級動力學曲線、準二級動力學曲線。各溫度下動力學模型相關(guān)系數(shù)如表3，其中準二級動力學模型相關(guān)系數(shù)均達到了0.999，表明準二級模型能更好地描述其吸附過程[23]。準二級動力學模型速率控制步驟為樹脂內(nèi)的化學吸附，作用力來自被吸附物與樹脂之間的電子共用或電子轉(zhuǎn)移[24]，且準二級吸附速率常數(shù)k2隨溫度升高而增大，表明反應為吸熱反應。

表3 HPD-500樹脂對樺褐孔菌多糖色素吸附動力學模型擬合Table 3 Kinetic parameters of adsorption of Inonotus obliquus polysaccharide pigment adsorption on HPD-500 resin

普遍認為樹脂的吸附過程分為三步，即液膜擴散、顆粒內(nèi)擴散以及吸附反應，而吸附反應速度非常快故液膜擴散及顆粒內(nèi)擴散是控制反應的主要過程[25]。如表4所示顆粒內(nèi)擴散動力學曲線在25～45 ℃均未經(jīng)過原點，表明在25～45 ℃下控制吸附速率是由顆粒內(nèi)擴散與液膜擴散共同影響，但顆粒內(nèi)擴散仍是控制反應速率的主要因素。

表4 HPD-500樹脂對樺褐孔菌多糖色素顆粒內(nèi)擴散模型擬合Table 4 Weber & Morris of adsorption of Inonotus obliquus polysaccharide pigment adsorption on HPD-500 resin

2.4 靜態(tài)吸附等溫線

以Ce橫 坐標，qe為 縱坐標繪制靜態(tài)吸附等溫線，如圖2所示為HPD-500大孔樹脂在25、35、45 ℃下的吸附等溫線。隨溫度的升高，平衡吸附量逐漸增加，表明反應為吸熱反應。

圖2 不同溫度下HPD-500樹脂對樺褐孔菌多糖色素吸附等溫線Fig.2 Adsorption isotherms of HPD-500 resinon Inonotus obliquus polysaccharide pigment at different temperatures

分別采用Freundlich與Langmuir模型[26-27]對以上數(shù)據(jù)進行模擬：

式中：qe為 單位樹脂的平衡吸附量，g-1；qm為最大吸附量，g-1；Ce為 吸附質(zhì)的平衡濃度，mg/mL；kF為平衡吸附常數(shù)；n為特征常數(shù)；kL為吸附平衡時的解離常數(shù)。

根據(jù)Freundlich、Langmuir方程分別以lnCe、1/C為橫坐標，lnqe、 1/qe作為縱坐標進行擬合。結(jié)果如表5所示，F(xiàn)reundlich模型相較Langmuir模型有更高的擬合度，表明吸附為多分子層，被吸附的分子發(fā)生再次吸附且吸附可逆。在35 ℃時擬合度最高，表明HPD-500大孔樹脂在35 ℃下對樺褐孔菌多糖的等溫吸附過程更符合Freundlich模型。

表5 Freundlich和Langmuir等溫吸附方程及參數(shù)Table 5 Equations and parameters of Freundlich and Langmuir model

2.5 吸附熱力學參數(shù)

任選6個平衡吸附量qe如表6所示，代入Freundlich方程，分別算出三個溫度下的Ce值，以1/T作為橫坐標，lnCe為縱坐標作圖并進行線性擬合，由斜率得吸附焓變ΔH如表6所示[28-30]。

表6 HPD-500樹脂對樺褐孔菌多糖溶液色素的吸附熱力學性質(zhì)Table 6 Adsorption thermodynamic property of Inonotus obliquus polysaccharide solution on HPD-500

式中：k0為常數(shù)；R為氣體常數(shù)（8.314×10-3kJ/（mol·K））。

吸附自由能由公式（12）得如表6所示。

式中：n為Freundlich方程中的表觀常數(shù)。

大孔吸附樹脂吸附樺褐孔菌多糖的吸附熵變ΔS根據(jù)Gibbs-Helmholtz方程即公式（13）計算，結(jié)果見表6。

式中：ΔH為 計算所得吸附焓變，kJ/mol；ΔG為計算所得吸附自由能，kJ/mol。

由表可知ΔH均＞0，表明反應為吸熱反應，升高溫度有利于反應的進行。ΔH隨吸附量的增加而降低，可能由于已吸附質(zhì)中偶極矩的存在和吸附劑表面吸附中心能量不同[31]。ΔG＜0表明反應為自發(fā)反應，且溫度越高∣ΔG∣ 越大，表明自發(fā)趨勢越大。ΔS＞0表明反應為熵增過程，在吸附過程中伴隨著溶劑的置換，色素分子被固定于吸附質(zhì)上且水分子被解吸，而色素分子量大于水的分子量，所以有更多的水分子解吸，溶液系統(tǒng)的混亂度增加，為熵增過程。

2.6 動態(tài)吸附實驗

2.6.1 泄露曲線的繪制 泄露曲線如圖3，樣品從第3管開始發(fā)生泄漏，因此，最大上樣量為每毫升大孔樹脂上樣3.96 mg樺褐孔菌多糖。

圖3 泄露曲線Fig.3 Leakage curve

2.6.2 徑高比優(yōu)化 徑高比對樺褐孔菌多糖純化效果的影響如圖4所示。HPD-500層析柱的徑高比對吸附樺褐孔菌多糖色素的影響不大，平均在75%，而隨著徑高比降低多糖保留率先增加后減少，在徑高比1:10時達到峰值78.3%。綜合色素吸附率與多糖保留率進行評分，徑高比在1:8、1:10、1:12時綜合評分先升高再下降，在1:10時評分最高。因此，徑高比為1:10時綜合評分最高，為最優(yōu)條件。

圖4 徑高比對樺褐孔菌多糖純化效果的影響Fig.4 Effect of aspect ratio on purification of Inonotus obliquus polysaccharide

2.6.3 吸附時間優(yōu)化 如圖5所示，當吸附時間從1 h增加到4 h，色素吸附率較為一致，平均約為80%，與靜態(tài)吸附動力學曲線達到吸附飽和時間相同。當達到吸附飽和后，色素吸附率只發(fā)生小幅度變化。而隨著吸附時間增加多糖通過吸附作用逐漸進入大孔樹脂內(nèi)部，多糖保留率逐漸減少[11]。綜合色素吸附率與多糖保留率進行評分，在吸附時間為1 h時最高，隨后逐漸降低，故選擇吸附時間1 h為最佳吸附時間。

圖5 吸附時間對樺褐孔菌多糖純化效果的影響Fig.5 Effect of adsorption time on purification of Inonotus obliquus polysaccharide

2.6.4 上樣量優(yōu)化 由圖6可以看出，當上樣量從10 mg增加到40 mg，色素吸附率逐漸降低，多糖保留率在上樣量為10、20 mg時無差異，40 mg時下降。上樣量低于10 mg時影響吸附色素效率。當大孔樹脂吸附位點不變時，上樣量的增加會使吸附位點飽和，導致大量色素未被吸附，色素吸附率呈下降趨勢。而隨著上樣量的進一步加大，溶液中多糖含量同樣增加，會與色素競爭吸附位點造成色素吸附率及多糖保留率均下降[16]。故綜合色素吸附率與多糖保留率進行評分，在上樣量為10 mg時綜合評分最高，隨后逐漸降低。所以選擇10 mg為最佳上樣量。

圖6 上樣量對樺褐孔菌多糖純化效果的影響Fig.6 Effect of sample weight on purification of Inonotus obliquus polysaccharide

2.6.5 洗脫流速優(yōu)化 洗脫流速對樺褐孔菌多糖純化效果的影響如圖7所示。洗脫流速由1.0 mL/min升高為2.0 mL/min時，HPD-500對樺褐孔菌多糖色素吸附及多糖保留均呈先升后降的趨勢。多糖溶液進入大孔樹脂孔內(nèi)需要一定的壓力差，當流速過低時，多糖溶液在孔內(nèi)吸附減少。而流速過快時，會導致大孔樹脂來不及進行吸附，色素吸附率隨之降低[32]。在1.5 mL/min流速洗脫時，色素吸附率與多糖保留率分別為83.15%和78.89%，綜合評分為81，高于另外2組，因此確定1.5 mL/min為最佳洗脫流速。

圖7 洗脫流速對樺褐孔菌多糖純化效果的影響Fig.7 Effect of elution flow rate on purification of Inonotus obliquus polysaccharide

2.7 樺褐孔菌多糖純度

依據(jù)上述實驗所選出的最佳動態(tài)洗脫條件對樺褐孔菌多糖進行純化并進行多糖純度計算：選用篩選所得HPD-500大孔樹脂，將預處理后HPD-500大孔樹脂裝柱于徑高比為1:10層析柱中，取1.2.1中提取多糖上樣10 mg，吸附時間1 h，流速1.5 mL/min下進行洗脫，設置三個平行，收集洗脫液并濃縮定容，分別計算未純化多糖與純化多糖純度。經(jīng)過HPD-500樹脂純化后，樺褐孔菌多糖純度由20.40%±0.11%提高至56.52%±0.31%。結(jié)果表明，在此工藝下，HPD-500樹脂具有純化樺褐孔菌多糖能力。

2.8 樹脂重復使用周期

大孔樹脂HPD-500重復使用情況如表7所示，樹脂在重復使用8次后色素吸附率與多糖保留率未下降。說明HPD-500大孔樹脂重復使用8次，對樺褐孔菌多糖中色素吸附影響不大，且脫色后樹脂易解吸，表明HPD-500適于樺褐孔菌多糖中色素的吸附。

表7 HPD-500樹脂使用8次性能變化Table 7 Performance changes by HPD-500 resin after 8 times

3 討論與結(jié)論

本實驗通過對17種大孔樹脂吸附樺褐孔菌多糖中色素的吸附率及多糖保留率進行綜合評分，發(fā)現(xiàn)極性大孔樹脂，如NKA-9、LSA-700B、HPD-500具有較高的色素吸附率，原因可能為極性基團可以降低聚合物表面與樣品之間的界面張力，從而增加多糖與聚合物吸附劑之間的接觸，增強吸附效力。同時也說明樺褐孔菌多糖中色素可能為極性分子，其中去除色素效果最佳大孔樹脂為HPD-500，其對樺褐孔菌多糖的保留率達到了96.82%；已有研究對活性炭法、過氧化氫法、殼聚糖法及聚酰胺層析柱法等4種方法去除樺褐孔菌多糖色素的效果進行比較，發(fā)現(xiàn)聚酰胺層析柱法具有最好的效果，色素吸附率為93.39%，多糖保留率為81.68%[33]，此結(jié)果與本研究中大孔樹脂HPD-500去除色素效果相比，多糖損失高，但色素吸附率占優(yōu)。在去除色素過程中大孔樹脂法相較聚酰胺層析柱法預處理更簡便，試劑消耗量少，更適用于中量及大量樣品的純化。

吸附動力學結(jié)果表明HPD-500大孔樹脂在前50 min為快速吸附階段，動態(tài)吸附條件優(yōu)化實驗同樣說明吸附時間1 h左右為最佳脫色時間，吸附過程與準二級吸附動力學曲線更為擬合，說明吸附過程為化學吸附；并且反應同時受到顆粒內(nèi)擴散與液膜擴散的影響，提示適當增加大孔樹脂比表面積可以提高其吸附樺褐孔菌多糖色素的速率。吸附熱力學實驗表明，在25～45 ℃吸附曲線均更為符合Freundlich模型，表明吸附為多分子層的；吸附焓變ΔH＞0，吸附自由能ΔG＜ 0，吸附熵變ΔS＞0，表明吸附過程是放熱的、可自發(fā)進行的熵增反應，結(jié)果提示在實際操作及生產(chǎn)中升高溫度可以提升吸附速率。在明確吸附機理的基礎上，優(yōu)化動態(tài)洗脫條件，確定徑高比1:10，上樣量10 mg，吸附時間1 h，洗脫流速1.5 mL/min為最佳吸附條件，此條件下色素吸附率與多糖保留率分別為83.15%和78.89%。本實驗對樺褐孔菌多糖純化過程提供了實驗基礎，為樺褐孔菌多糖開發(fā)與利用提供技術(shù)支持。