廣東省廣州市番禺區(qū)農產品質量監(jiān)測所 廣東廣州 511450

1 優(yōu)化高校液相色譜-串聯質譜法檢測水產品孔雀石綠的實驗材料及方法

1.1 實驗材料、試劑、儀器設施

本次實驗所用的乙腈、甲醇、甲酸、色譜純均由Honeywell 公司提供，而國藥集團化學試劑有限公司則是負責提供氨水、無水乙酸銨、分析純等，此外雅水處理技術有效公司負責提供超純水、超純水機。實驗選擇的羅非魚、鯽魚、草魚及鱖花魚全部來自當地的農貿市場及超市，并且是通過隨機抽樣而來。同時，實驗過程用到的標準孔雀石綠、隱性孔雀石綠等全部都得德國的Dr.Ehrenstorfer公司所提供。實驗中所用液相色譜串聯質譜檢測儀器由沃特公司提供，同時，其他用到的XFH 型均質器、3-30K 型離心機、DC 型氮吹儀器皆選擇了國內外知名企業(yè)的產品。

1.2 溶液配制

實驗所用的5mmol/L 乙酸銨溶液制備過程如下：在1000mL的水中加入0.3850g 的無水乙酸銨，并借助冰乙酸將完全溶解后的溶液PH 數值調整到4.5，讓其通過0.2μm 的濾膜。工作溶液的配置過程如下：使用天平準確稱量孔雀石綠、隱色孔雀石綠，通過使用乙腈將之溶解之后配置成為500μg/mL 的母液，并在經過逐級稀釋以及使用乙腈進行定熔之后，將之制作成混合外標的標準工作溶液，其濃度為100μg/L，隨后使用內標物D5 孔雀石綠及D6 隱色孔雀石綠，配置成混合標準液為100μg/L 的工作溶液，將之全部放置在-18℃避光條件下進行保存。

1.3 樣品處理的優(yōu)化

傳統(tǒng)的樣品處理步驟如下：以GB/T19857-2005 為根據，選擇3 份陰性已知狀態(tài)下的生鮮羅非魚作為樣品并進行加標處理，具體孔雀石綠及隱色孔雀石綠溶液加標數量為2.5μg/kg 和5.0μg/kg。在此之后，嚴格遵循GB/T19857-2005 標準下的針對鮮活水產品及加工水產品的處理方式要求開展檢測。經過優(yōu)化處理之后的實驗過程步驟如下：在50mL 的離心管中加入5.0g 的勻漿樣品，并將之前制定的D5 孔雀石綠及D6 隱色孔雀石綠混合內標準工作溶液選取一定數量加入其中，確保兩種工作溶液的測定最終含量結果為2.00μg/kg。在此之后，將20ml 的乙腈及5g 酸性氧化鋁物質，隨后使用多管漩渦混合儀器，以2500r/min 的速度處理5 分鐘，在全面提取物質之后將其中的雜質有效清除。在此之后，以8000r/min 的速度處理5 分鐘，并在15ml 的離心管中加入混合儀器中處理完成的上清液4ml，之后將之放置在45℃的水浴環(huán)境下使用氮吹儀器進行處理，之后使用1ml 的乙酸銨-乙腈定容液進行定容處理，使用多管漩渦混合儀器，以2000r/min 的速度處理4 分鐘，并在通過0.22μm 濾膜之后，準備進行檢測。

1.4 氧化鋁實驗

在這一步操作中，通過使用優(yōu)化之后的實驗樣品前處理方法，使用酸性、中性及堿性的氧化鋁三種物質開展雜質去除凈化對比實驗，添加量均維持在5g 的水平，且每一種實驗物質設置6 個平行樣品。除此之外，需要分別使用2g、3g、4g、5g、6g 添加量的酸性氧化鋁開展雜質去除凈化對比實驗。同時，在具體的實驗操作中，全部使用孔雀石綠及隱色孔雀石綠的實際加標回收率衡量不同性質氧化鋁添加量條件下的回收率數據影響，且二者的實際加標濃度維持在2.0μg/kg 水平上。

在此之后，使用經過優(yōu)化的實驗樣品前處理方式針對尚未檢測出孔雀石綠及隱色孔雀石綠的羅非魚樣品處理為定熔液，并向其中加入之前制備的混合外標工作溶液，確保標準工作曲線外標濃度數值分為維持在0.5、1.0、2.0、5.9、6.0、10.010.0μg/L 水平上。同時，將之前制備的混合內標工作溶液加入其中，借此形成一個內標濃度為2.0μg/L 的標準性質工作曲線。

將濃度水平100μg/L 的混合外標工作溶液分別加入25、75、125μL 到陰性已知的羅非魚肉實驗樣品中，將之放置在4℃的環(huán)境條件下冷藏過夜之后，使用前文優(yōu)化之后的處理方式進行檢測，并將回收率及精密度數據進行計算。

2 結果分析

2.1 優(yōu)化之前的檢測結果

根據本次實驗結果表明，以GB/T19857-2005 為依據的測定生鮮水產品及加工水產品孔雀石綠方式進行檢測，回收率數據基本維持在70%-120%的基本要求水平上，但多次檢測結果的穩(wěn)定性較差，不具備較為優(yōu)秀的重復性，并且耗費的檢驗試劑數量及前處理工作時間較多。

2.2 優(yōu)化之后的回收率及精密度結果

分別將濃度為100μg/L 標準工作溶液以0.025、0.075、0.125ml 的數量加入到5g 的陰性已知羅非魚產品樣品中，隨后以優(yōu)化之后的方式開展檢測，孔雀石綠的回收率及精密度結果分別為102.4%、103.5%、104.4%以及2.3%、10.4%、1.7%，而隱色孔雀石綠的回收率及精密度結果為91.1%、95.3%、91.6%及4.1%、2.7%、1.2%。

3 結語

傳統(tǒng)的水產品孔雀石綠檢測方式，在回收率數據上較為不穩(wěn)定，且樣品前處理時間過長。經過優(yōu)化之后的液相色譜-串聯質譜法孔雀石綠檢測方式，經過試驗后發(fā)現其回收率較為穩(wěn)定且結果精密度較高，值得推廣使用。