蔡鶯鶯　石慶新　周秋菊　陳佳喜　沈莉萍　陸如岳　王冬蓮

[關(guān)鍵詞] 維生素D;高效液相色譜;營養(yǎng)現(xiàn)況;不同年齡

[中圖分類號] R153.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）18-0133-05

Investigation on the status quo of vitamin D nutrition of people in different ages in Taizhou area

CAI Yingying1，2? ?SHI Qingxin1，2? ?ZHOU Qiuju1，2? ?CHEN Jiaxi1，2? ?SHEN Liping1，2? ?LU Ruyue3? ?WANG Donglian1，2

1.Department of Clinical Laboratory， Taizhou Hospital of Zhejiang Province，? ?Linhai 317000， China; 2.Department of Clinical Laboratory， Enze Hospital of Taizhou Enze Medical Center （Group），? Taizhou 318053， China; 3.Department of Clinical Laboratory， Luqiao Hospital of Taizhou Enze Medical Center （Group），? Taizhou 318053， China

[Abstract] Objective To understand the status quo of vitamin D nutrition of people in different ages in Taizhou area，and to find out the main people with vitamin D poverty， so as to provide necessary scientific basis for the follow-up prevention and treatment of vitamin D poverty. Methods A total of 17815 cases of serum samples of vitamin D detected by high performance liquid chromatography combined with tandem mass spectrometry sent to and examined in Enze Hospital of Taizhou Enze Medical Center （Group） from August 2017 to December 2019 were analyzed retrospectively.They were divided into the neonate group， the infant group， the child group， the teenager group， the youth group， the middle-aged group and the elderly group according to their ages. Results The vitamin D level of the total population was 23.31 （17.98-29.59） ng/mL.The levels of vitamin D in the neonate group， the infant group， the child group， the teenager group， the youth group， the middle-aged group and the elderly group were 17.39 （14.21-29.91） ng/mL， 35.08 （29.71-41.41） ng/mL， 26.41 （21.91-31.45） ng/mL， 20.61（16.81-24.43） ng/mL， 21.59 （16.22-28.71） ng/mL， 22.61 （17.77-27.45） ng/mL and 22.12 （16.98-27.81） ng/mL， respectively， with statistically significant differences in different age groups （P<0.01）.In the assessment of status of vitamin D nutrition， vitamin D poverty accounted for 6.16%， deficiency accounted for 27.96%， and normal accounted for 65.88%， mainly with the normal serum content of vitamin D.In all age groups， the neonate group was the most poverty， the youth group and the teenager group were the second， and the middle-aged group and the elderly group were the third.There were statistically significant differences in status of vitamin D nutrition in different age groups （P<0.05）. Conclusion The vitamin D level in patients of Taizhou area is mainly normal， but vitamin D poverty with different degrees exists in different age groups except for the infant group， especially in the neonate group， the youth group and the teenager group.

[Key words] Vitamin D; High performance liquid chromatography; Status quo of nutrition; Different ages

維生素D是一種重要的類固醇激素，廣泛參與了人體骨代謝、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、代謝性疾病、感染性疾病和腫瘤的調(diào)控[1-5]。維生素D在體內(nèi)的充足水平，與以上相關(guān)疾病風(fēng)險呈負(fù)相關(guān)[1-5]。25-羥基維生素D是血液中維生素D的主要循環(huán)形式，穩(wěn)定性好，是公認(rèn)的評價人體維生素D營養(yǎng)狀況的可靠指標(biāo)[6]。2020年5月6日，國家衛(wèi)健委發(fā)布了衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T677～2020[6]，并于2020年11月1日起實(shí)施，該標(biāo)準(zhǔn)明確了人群維生素D營養(yǎng)狀況判定指標(biāo)及參考判定值。因此，參考新行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，有必要對臺州地區(qū)不同年齡層的人群維生素D營養(yǎng)狀況進(jìn)行調(diào)查分析。

本研究對臺州地區(qū)2017年8月至2019年12月送檢到恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）恩澤醫(yī)院的血清標(biāo)本17 815例，采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測維生素D，有助于了解臺州地區(qū)各年齡層中維生素D的營養(yǎng)現(xiàn)況，為后續(xù)防治維生素D缺乏提供科學(xué)依據(jù)，也為相關(guān)疾病的營養(yǎng)狀況評估提供新的參考。

1 資料與方法

1.1資料來源

收集2017年8月至2019年12月間在臺州地區(qū)的三家醫(yī)院（浙江省臺州醫(yī)院、臺州恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）恩澤醫(yī)院、路橋醫(yī)院）就診的，并集中送檢到恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）恩澤醫(yī)院進(jìn)行維生素D檢測的血清標(biāo)本17 815例，已剔除重復(fù)送檢的標(biāo)本。

1.2儀器和試劑

儀器：ABI3200MD型高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀（AB SCIEX，Singapore）。試劑：25-羥基VD2/VD3萃取液（衍生化法）試劑盒（浙江迪賽思診斷技術(shù)有限公司）。

1.3方法

1.3.1年齡分組? 將標(biāo)本根據(jù)年齡分為7組，具體分組和例數(shù)如下：新生兒組（1 d～1月）18例、嬰兒組（2月～1歲）1821例、兒童組（1～6歲）1595例、少年組（7～17歲）2236例、青年組（18～40歲）4757例、中年組（41～65歲）5390例、老年組（≥66歲）1998例。

1.3.2 維生素D的檢測

1.3.2.1血清樣品前處理 采集血液，待血液凝固，以4℃ 3000 r/min離心10 min分離血清。吸取血清樣品200 μL于2 mLEP管中，加入50 μL內(nèi)標(biāo)工作液;再加入萃取試劑（乙腈）400 μL，渦旋1 min;再加入1.2 mL正己烷，渦旋10 min，然后14000 r/min離心5 min;取離心后的上清液，在氮?dú)庀麓蹈?。?0 μL衍生化試劑工作溶液加入到吹干后的殘?jiān)?，渦旋1 min。50℃下反應(yīng)30 min，室溫冷卻后加入40 μL乙醇終止反應(yīng)，渦旋1 min，氮?dú)獯蹈?殘?jiān)?00 μL復(fù)溶液復(fù)溶，渦旋10 min，然后14000 r/min下離心5 min，吸取20 μL倒進(jìn)樣瓶中，用ABI3200MD型高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀（AB SCIEX，Singapore）分析。

1.3.2.2標(biāo)準(zhǔn)工作樣品前處理 向6個2 mLEP管中各加入190 μL磷酸鹽緩沖液工作溶液，依次向每個管中分別加入50 μL的內(nèi)標(biāo)和10 μL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液1～6 μL，混勻。加入萃取試劑（乙腈）400 μL，渦旋1 min;以下步驟同血清樣品前處理。

1.3.2.3質(zhì)控樣品前處理 吸取質(zhì)控樣品200 μL于2 m LEP管中，加入50 μL內(nèi)標(biāo)工作液;向其中加入萃取試劑（乙腈）400 μL，渦旋1 min;以下步驟同血清樣品前處理。

1.3.2.4工作條件參數(shù)? 色譜條件：色譜柱：Gemini C18（50×2 mm，5 μm）;其中流動相A為水（含0.1%甲酸），B為甲醇（含0.1%甲酸），流速：0.1 mL/min;進(jìn)樣量：10 μL。質(zhì)譜條件：電噴霧電離源（ESI），正離子模式;選擇多反應(yīng)監(jiān)測模式分析;氮?dú)庾鳛榕鲎矚夂洼o助氣，噴霧氣60 psi、氣簾氣20 psi、加熱溫度400 ℃，GAS2 60 psi，離子帶電5500 V，入口電壓9 V，碰撞能量28 V，碰撞出口電壓4 V。

1.3.2.5維生素D的樣本分析 打開軟件Queue Manager，檢查樣品隊(duì)列。待儀器平衡好，點(diǎn)擊Acquire菜單中的Start Sample按鈕開始樣品分析。結(jié)束后打開Quantitation Wizard（定量分析導(dǎo)航器）分析數(shù)據(jù)，獲得血清維生素D的檢測值。

1.3.3維生素D的營養(yǎng)評估 根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 677～2020[6]判定如下：<12 ng/mL為缺乏;12～20 ng/mL為不足;≥20 ng/mL為正常。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，正態(tài)分布的連續(xù)變量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。偏態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用Pearson卡方檢驗(yàn)，等級資料采用秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同年齡組中維生素D水平的比較

臺州地區(qū)2017年8月至2019年12月送檢到恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）恩澤醫(yī)院的血清標(biāo)本17815例中，男6922例（38.85%），女10891例（61.15%）;維生素D總水平為23.31（17.98～29.59）ng/mL。維生素D在新生兒組、嬰兒組、兒童組、少年組、青年組、中年組和老年組水平分別為17.39（14.21～29.91）ng/mL、35.08（29.71～41.41）ng/mL、26.41（21.91～31.45）ng/mL、20.61（16.81～24.43）ng/mL、21.59（16.22～28.71）ng/mL、22.61（17.77～27.45）ng/mL和22.12（16.98～27.81）ng/mL，各占比0.10%、10.22%、8.95%、12.55%、26.70%、30.26%和11.22%。其中，檢測人群以中年組最多，青年組次之，新生兒組最少。采用正態(tài)性檢驗(yàn)，除新生兒組外，其余各組均呈偏態(tài)分布（P<0.10）;因而采用秩和檢驗(yàn)，各年齡組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。按維生素D水平從高到低排序依次為嬰兒組>兒童組>中年組>老年組>青年組>少年組>新生兒組。見表1。

2.2不同年齡組維生素D營養(yǎng)狀況的比較

在總檢測人群中，維生素D缺乏占6.16%（1097例）、不足占27.96%（4981例）、正常占65.88%（11737例），以維生素D血清含量正常為主。比較各年齡組維生素D營養(yǎng)狀況，維生素D水平正常組中以嬰兒組占比最高，達(dá)97.58%（1777例）;新生兒組最低，占33.33%（6例）。維生素D不足組和缺乏組中均以新生兒組占比最高，分別是44.44%（8例）和22.22%（4例）;以嬰兒組最低，分別是2.20%（40例）和0.22%（4例）。維生素D正常組按比例從高到低分別是嬰兒組>兒童組>中年組>老年組>青年組>少年組>新生兒組;維生素D不足組與缺乏組基本一致，只少年組發(fā)生維生素D不足的比例更高。見表2。采用Pearson卡方檢驗(yàn)比較不同年齡組的維生素D營養(yǎng)狀況，各年齡組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?？傮w來說，除嬰兒組外，其余各組都有不同程度的維生素D缺乏;以新生兒組最為缺乏，青少年組其次，再次之是中老年組。

3討論

維生素D的檢測方法有質(zhì)譜法和免疫法。質(zhì)譜法的優(yōu)勢在于高通量，有標(biāo)準(zhǔn)測量程序，可精確區(qū)分25-羥基維生素D代謝物;劣勢在于未常規(guī)用于臨床樣本分析，非自動化且儀器復(fù)雜、昂貴，無法區(qū)分3-epi-25-羥基維生素D的異構(gòu)體[7]，存在檢測值偏高的可能性。免疫法的優(yōu)勢在于高靈敏度，需要的標(biāo)本量少，自動化;劣勢在于存在與其他維生素D代謝物的交叉反應(yīng)，測量需要維生素D結(jié)合蛋白的參與[8-10]，測量準(zhǔn)確度不高。本研究采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測25-羥基維生素D，結(jié)果更精確，能檢出更低含量的維生素D，臨床指導(dǎo)意義更大。

Hajar Mazahery等[1]研究報(bào)道，維生素D缺乏癥在美國、澳大利亞和新西蘭的患病率為27%～32%。本研究顯示臺州地區(qū)總檢測人群中維生素D缺乏、不足和正常分別占6.16%、27.96%和65.88%，與報(bào)道基本一致。喬璐莎等[11]報(bào)道，329例住院治療中新生兒維生素D水平為（14.21±12.05）ng/mL，正常、不足、缺乏、嚴(yán)重缺乏分別占22.19%、6.38%、54.71%、16.72%。王昌燕[12]等報(bào)道，西安市582例新生兒出生后24 h內(nèi)血清維生素D平均水平為（11.2±3.2）ng/mL，其中不足、缺乏和嚴(yán)重缺乏的合計(jì)占比96.70%。耿立蒙等[13]報(bào)道，山東省濱州地區(qū)2771例嬰幼兒（0～3歲）25-羥基維生素D水平為（36.27±9.09）ng/mL，缺乏、不足比率分別為4.5%、20.9%。高鳳英等[14]報(bào)道，河北省三河市600例兒童中，正常、不足、缺乏、嚴(yán)重缺乏分別占68.5%、19.8%、8.8%、2.8%。李晶等[15]報(bào)道，嘉興市338名健康嬰兒維生素D正常、不足、缺乏分別占99.70%、0.30%、0%。張正超等[16]報(bào)道，簡陽地區(qū)0～1歲組兒童維生素D正常、缺乏分別占比61.55%、38.45%;2～6歲組兒童維生素D正常、缺乏分別占比68.60%、31.40%。本研究中新生兒組維生素D水平為17.39±3.18（14.21～29.91）ng/mL，正常、不足、缺乏分別占33.33%、44.44%、22.22%;嬰兒組維生素D水平為35.08（29.71～41.41）ng/mL，正常、不足、缺乏分別占97.58%、2.20%、0.22%;兒童組維生素D水平為26.41（21.91～31.45）ng/mL，正常、不足、缺乏分別占84.33%、14.67%、1.00%。人體中維生素D的來源約90%由表皮和真皮層的7～脫氫膽固醇經(jīng)紫外線照射轉(zhuǎn)變而來[2，16-17]，10%來自天然食物攝取。新生兒無法通過皮膚經(jīng)紫外線照射轉(zhuǎn)變，主要來自母體，因此維生素D缺乏比例最高。而嬰兒組由于當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)、生活水平較高，父母普遍比較重視，保證足夠的維生素D攝入，因此維生素D正常比例最高。此外，1歲以后的嬰幼兒往往以兒童奶粉代替母乳，而兒童奶粉維生素D平均水平要低于母乳，加之隨著兒童年齡增加，存在厭食、挑食、偏食的情況[18]。因而，在兒童組維生素D正常比例又有所下降。

張正超等[16]報(bào)道，簡陽地區(qū)7～12歲組維生素D缺乏、正常分別占比69.91%、30.09%。陳京蓉等[19]報(bào)道，重慶市6～17歲青少年維生素D缺乏、不足分別占比9.32%、61.27%。本研究中少年組（7～17歲）維生素D缺乏、不足和正常分別占6.26%、39.22%和54.52%。這是因?yàn)榍嗌倌晏幱谏L發(fā)育的快速時期，營養(yǎng)需求增長較快，同時又有課業(yè)壓力導(dǎo)致戶外運(yùn)動時間相對減少，是維生素D缺乏的高危人群[18]。本文中青年組（18～40歲）維生素D缺乏、不足和正常分別占9.17%、33.40%和57.43%;中年組（41～65歲）維生素D缺乏、不足和正常分別占5.81%、30.20%和63.99%。兩者因?yàn)槭巧鐣闹袌?jiān)力量，工作、美容等因素導(dǎo)致戶外紫外線照射時間不足，也存在約40%的維生素D缺乏和不足。有趣的是，維生素D檢測人群以中年組為主，其次是青年組，表明這兩個人群的健康意識比較高。

李海俠等[10]報(bào)道的全國多家中心臨床大數(shù)據(jù)顯示，羅氏檢測分析老年人群維生素D缺乏率、不足率和正常率分別是40.04%、31.92%和28.04%;新產(chǎn)業(yè)檢測分析老年人群維生素D缺乏率、不足率和正常率分別是68.81%、24.18%和7.01%。本文中老年組（≥66歲）維生素D缺乏、不足和正常分別占9.21%、30.28%和60.51%。存在差異的原因在于不同地區(qū)緯度不同，光照時長、強(qiáng)度都有所不同;各地區(qū)經(jīng)濟(jì)水平不同也影響維生素D的膳食補(bǔ)充?？偟膩碚f，老年人因生理機(jī)能下降，外源轉(zhuǎn)化減弱，維生素D缺乏比較普遍。

維生素D不足和缺乏組都以新生兒組的比例最高，以嬰兒組最低。而吳依然等[2]報(bào)道，維生素D低水平與兒童多種感染性疾病相關(guān);而補(bǔ)充維生素D可減少冬季流感的發(fā)生率。肖培等[20]報(bào)道的前瞻性隊(duì)列研究顯示，兒童期維生素D水平越低，TC、LDL～C和非HDL～C異常的發(fā)生風(fēng)險越高，而充足的維生素D水平可能有助于心血管疾病的早期預(yù)防。但是，人體對補(bǔ)充的維生素D制劑反應(yīng)各異，受地理、季節(jié)、日照時間、疾病、藥物、年齡、BMI/體脂率等多種因素影響[1]。維生素D不足，可通過日曬和吃富含維生素D食品進(jìn)行補(bǔ)充，服用過量則存在中毒風(fēng)險。因此，需要遵醫(yī)囑選擇不同劑量維生素D制劑進(jìn)行補(bǔ)充，臨床醫(yī)生也需要關(guān)注患者維生素D營養(yǎng)狀況。

本研究的局限性在于研究中收集的新生兒組例數(shù)相對不足，結(jié)果可能存在一定的偏差;其次，這是一項(xiàng)回顧性分析，文中只初步分析了不同年齡人群的維生素D營養(yǎng)現(xiàn)狀，與特定疾病的相關(guān)性研究正在進(jìn)行中，有待進(jìn)一步的證實(shí)。

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（收稿日期：2021-02-02）