陳浩明，杭黎華，余劍芒，蘆為康，李帥

(江蘇大學(xué)附屬昆山醫(yī)院麻醉科，江蘇 昆山215300)

腫瘤作為威脅人類健康的重大疾病，一直是臨床研究的熱點。雖然腫瘤的治療目前已取得較大進(jìn)展，但對于部分惡性腫瘤仍無法治療或治愈。其主要原因是有些惡性腫瘤早期癥狀不明顯，且有些檢測技術(shù)對機(jī)體損傷較大，費用較高，無法及早實施。目前的治療手段主要為手術(shù)、放化療等，治療手段單一且機(jī)體易產(chǎn)生耐藥性，患者生存率低。故尋找全新的針對惡性腫瘤的早期診斷免疫標(biāo)志物和治療靶點成為臨床研究的關(guān)鍵。EZH2(enhancer of zeste homolog 2)是果蠅zeste基因增強(qiáng)子的人類同源物2，主要通過組蛋白修飾而抑制靶基因活性或直接沉默靶基因，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞衰老、分化及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程［1－2］。近年來，EZH2在常見腫瘤中的研究受到廣泛關(guān)注。相關(guān)研究表明，在多種惡性腫瘤前期，EZH2通過基因沉默機(jī)制改變細(xì)胞活性并影響調(diào)控轉(zhuǎn)錄，參與腫瘤的形成;同時，EZH2在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、預(yù)后和轉(zhuǎn)移中也起重要作用［3－4］。因此，深入研究EZH2在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用與機(jī)制，不僅對尋找腫瘤的特異性分子標(biāo)志物以及新型治療靶點具有重要意義，還對相關(guān)新型腫瘤藥物的研發(fā)有一定指導(dǎo)作用?，F(xiàn)就EZH2在部分常見腫瘤中的作用進(jìn)行綜述。

1 EZH2概述

1.1 EZH2的起源 1996年，Chen等［5］在21－三體綜合征研究中發(fā)現(xiàn)致病基因位點的相鄰基因有一段與E(z)高度同源的序列，遂將此段序列命名為EZH2，之后通過基因雜交技術(shù)認(rèn)為EZH2基因位于人染色體21q22.2上。但在2000年，Cardoso等［6］通過基因技術(shù)研究最終證實了EZH2基因定位于人染色體7q35上，并進(jìn)一步分析得出EZH2基因cDNA序列和果蠅zeste基因的增強(qiáng)子有60.5%的同源性，所以又將EZH2稱為果蠅zeste基因增強(qiáng)子的人類同源物2，屬于多梳基因家族，是構(gòu)成多梳抑制復(fù)合物(polycomb repressive complex，PRC)2的三個亞單位之一［7］。

1.2 EZH2的結(jié)構(gòu) EZH2的結(jié)構(gòu)復(fù)雜，共含有20個外顯子，長度為41～323 bp，19個內(nèi)含子，長度為0.15～17.7 kb，其中開放讀碼框均分布在19個外顯子上［7］，除基礎(chǔ)的基因結(jié)構(gòu)外，EZH2主要包括以下4個高度保守的結(jié)構(gòu)域［6］:在N端的Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)和半胱氨酸區(qū)以及C端由修飾子Su3－9、多梳蛋白家族E(Z)、TrxG蛋白家族共同結(jié)構(gòu)域組成的高度保守的SET結(jié)構(gòu)域。其主要功能為編碼組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，因此EZH2主要通過SET結(jié)構(gòu)域來發(fā)揮組蛋白甲基化修飾的作用，該區(qū)域受損或缺失后則不能產(chǎn)生相應(yīng)表觀遺傳學(xué)的改變，甚至可能導(dǎo)致某些基因的去抑制。

1.3 EZH2的作用機(jī)制 EZH2基因在細(xì)胞的增殖、分化及腫瘤形成方面均有重要作用。EZH2屬于多梳基因家族的核心成員，多梳基因家族包括PRC1和PRC2，分別維持基因抑制和基因沉默的作用［1］。PRC2主要通過EZH2基因的SET結(jié)構(gòu)域?qū)诵◇w組蛋白H3第9、27位賴氨酸甲基化進(jìn)行修飾，進(jìn)而沉默下游包括抑癌基因在內(nèi)的一系列靶基因(如細(xì)胞分化、腫瘤轉(zhuǎn)移等)的表達(dá)。目前研究發(fā)現(xiàn)EZH2的具體作用機(jī)制包括:①EZH2可發(fā)揮H3K27甲基轉(zhuǎn)移酶活性，當(dāng)PRC2募集至染色質(zhì)時，EZH2在H3K27上留下三甲基化標(biāo)志，阻止RNA聚合酶Ⅱ依賴的轉(zhuǎn)錄延伸，進(jìn)而沉默下游基因;②PRC2的亞單位可與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶2、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3發(fā)生免疫沉淀，共同抑制抑癌基因的表達(dá)［1－2］。

2 EZH2與常見腫瘤

目前在食管癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤等腫瘤組織中均檢測到EZH2表達(dá)改變，且EZH2的表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度、治療、預(yù)后均存在密切聯(lián)系［8］。大量研究表明，腫瘤細(xì)胞中EZH2過表達(dá)可導(dǎo)致腫瘤組織細(xì)胞增殖、遷移及腫瘤內(nèi)血管生成，并導(dǎo)致腫瘤組織的進(jìn)一步惡化［9－10］。不同腫瘤組織中EZH2的作用方式不同，但該基因存在過表達(dá)往往預(yù)示腫瘤預(yù)后不佳，現(xiàn)按系統(tǒng)分類介紹如下。

2.1 EZH2與消化系統(tǒng)腫瘤

2.1.1 EZH2與食管癌 食管癌是我國較常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，病死率位居世界第6位，全球每年增長約60萬，其中約一半新增患者在中國［11］。食管癌尤以鱗狀細(xì)胞癌占比最大，約為90%［12］。目前食管癌的治療手段主要為手術(shù)與化療，但由于缺乏對食管癌發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識，5年生存率仍只有20%左右，故探索食管癌發(fā)病機(jī)制有較大的學(xué)術(shù)價值。研究認(rèn)為，EZH2通過甲基轉(zhuǎn)移酶和乙?；附閷?dǎo)同源異型盒基因、p53以及INK4(inhibitor of CDK4)等抑癌基因失活進(jìn)而引起細(xì)胞惡性增殖［13］。大量病例研究表明，EZH2在食管癌中表達(dá)水平明顯升高，癌組織中EZH2蛋白陽性表達(dá)率約為65.7%，而正常組織EZH2無表達(dá)［14］。動物研究發(fā)現(xiàn)，食管癌裸鼠模型應(yīng)用EZH2抑制劑DZNeP3－Deazaneplanocin A(DZNep)后，模型裸鼠癥狀顯著改善，其具體機(jī)制可能是降低EZH2表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)哺乳動物雷帕霉素靶蛋白/p70核糖體蛋白S6激酶信號通路，使被沉默的抑癌基因恢復(fù)活性，從而促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡［15］。目前關(guān)于EZH2與食管癌的研究仍處于初始階段，但EZH2與食管癌的相關(guān)性已得到證實，這也為食管癌的治療提供了可能的研究靶點。

2.1.2 EZH2與肝癌 肝癌是我國常見的消化系統(tǒng)腫瘤，我國作為乙型肝炎大國，每年約有30萬例新發(fā)病例。Sudo等［16］于2005年第一次檢測了66例肝細(xì)胞癌患者的EZH2 mRNA表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝癌組織中EZH2的表達(dá)水平顯著高于周圍組織。Cai等［17］通過RNA干擾法降低人體干細(xì)胞中EZH2的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)EZH2表達(dá)水平降低時可顯著抑制肝癌細(xì)胞的增殖，初步證實了EZH2與肝癌有一定的相關(guān)性。隨著研究的深入，Zhang等［18］研究發(fā)現(xiàn)，使用EZH2的上游抑制劑miR－98調(diào)節(jié)Wnt/β聯(lián)蛋白信號通路可使抑癌基因復(fù)活，抑制腫瘤增殖。對于肝癌預(yù)后與轉(zhuǎn)移，Cai等［17］進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，EZH2調(diào)控的H3K27TM蛋白含量可影響肝癌預(yù)后，且H3K27TM的含量越高，患者預(yù)后越差，因此H3K27TM可能作為肝癌預(yù)后的獨立分子指標(biāo)。另有研究表明，EZH2可導(dǎo)致原發(fā)性肝癌靶向藥物甲苯磺酸索拉菲尼耐藥，EZH2表達(dá)水平越高，耐藥性越強(qiáng)，當(dāng)EZH2表達(dá)降低時，耐藥性亦降低［19］。其具體機(jī)制可能是通過抑制EZH2進(jìn)而調(diào)節(jié)下游胰島素樣生長因子－1受體的表達(dá)，從而導(dǎo)致細(xì)胞對索拉菲尼的敏感性提高，耐藥性降低。綜上，EZH2與肝癌的研究已較為成熟，對判斷肝癌的惡性程度、預(yù)后、治療提供了一個可行的方法。

2.1.3 EZH2與胃癌 胃癌是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，也是全球病死率居第2位的惡性腫瘤［20］，該病致死率高的主要原因是早期難以發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)臨床癥狀后多數(shù)為晚期，故確定胃癌早期發(fā)病階段的相關(guān)基因是疾病防治的關(guān)鍵。Zhou等［21］采用病例對照研究發(fā)現(xiàn)，早期胃癌組織中EZH2的表達(dá)水平升高，證實EZH2表達(dá)增加與胃癌風(fēng)險呈顯著正相關(guān)。Pan等［22］也證實了EZH2高表達(dá)與晚期胃癌呈顯著正相關(guān)，且晚期胃癌組織中EZH2的表達(dá)水平高于早期胃癌組織。有研究表明，EZH2通過甲基化酶活性作用于INK4/ARF基因啟動子，使該基因失活，而該基因調(diào)控抑癌基因p14、p15、p16的表達(dá)，當(dāng)該基因失活后，抑癌基因沉默，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞逃逸衰老而引發(fā)癌癥［23］。McCabe等［24］通過長時間大量病例研究發(fā)現(xiàn)，胃癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與EZH2表達(dá)水平有關(guān)，EZH2表達(dá)水平越高，胃癌轉(zhuǎn)移的風(fēng)險越大。綜上，EZH2與胃癌的發(fā)生機(jī)制、發(fā)展過程及預(yù)后均有密切關(guān)系。故EZH2的研究有望為早期胃癌的診斷提供可能的檢測靶點。

2.1.4 EZH2與結(jié)直腸癌 結(jié)直腸癌是一種受多因素作用、多基因參與和多階段發(fā)展的疾病，其發(fā)生的分子機(jī)制目前仍未明確，對患者生活質(zhì)量有較大影響，故探索一種更為合適的治療方法以及預(yù)后指標(biāo)是目前急需解決的問題。王建新等［25］分析63例結(jié)直腸癌病例發(fā)現(xiàn)，其中53例患者癌組織中EZH2過表達(dá)，且癌癥惡性程度與EZH2的表達(dá)水平呈正相關(guān)。Yamamoto等［26］研究證實，EZH2過表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的5年生存率有關(guān)，表達(dá)水平越高，5年生存率越低，轉(zhuǎn)移的可能性越大，惡性程度越高，因此EZH2可能作為結(jié)直腸癌預(yù)后的標(biāo)志物。李西霞和王曉春［27］研究發(fā)現(xiàn)，miR－608作為調(diào)控EZH2的上游靶點，通過降低EZH2的表達(dá)可抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖。張娟等［28］研究發(fā)現(xiàn)，miR－98通過下調(diào)EZH2表達(dá)可降低結(jié)直腸癌細(xì)胞的活性與侵襲能力。目前，結(jié)直腸癌的治療手段主要為手術(shù)治療，藥物治療以及分子機(jī)制方面研究仍不成熟，但大量研究已經(jīng)證明了EZH2與結(jié)直腸癌有明確的相關(guān)性，表明EZH2不僅可以作為結(jié)直腸癌預(yù)后的分子標(biāo)志物，也可以為結(jié)直腸癌非手術(shù)治療提供可能的基因靶點。

2.1.5 EZH2與胰腺癌 胰腺癌是最具侵襲性的惡性腫瘤之一，居惡性腫瘤病死率第4位，5年生存率低于5%［29］。目前胰腺癌的發(fā)病機(jī)制尚不明確，復(fù)雜的胰腺生理、早期診斷困難以及目前有限的治療方法是導(dǎo)致胰腺癌死亡率較高的原因［30］。Ougolkov等［31］通過免疫組織化學(xué)法檢測了104份標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)其中68%的標(biāo)本EZH2呈高表達(dá)。Toll等［32］研究也證明了EZH2在胰腺癌組織中高表達(dá)，陽性表達(dá)率為57.4%，非癌組織中EZH2不表達(dá)，其陽性率顯著高于胰腺炎組織，且與腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)。Lian等［33］研究發(fā)現(xiàn)，通過體外加用長鏈非編碼RNA結(jié)合EZH2從而降低EZH2的活性，進(jìn)而通過去甲基化修飾重新激活抑癌基因，達(dá)到減少胰腺癌細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞生長的目的。另有研究表明，EZH2特異性抑制劑GSK343可顯著抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，而且能顯著降低胰腺癌細(xì)胞的自我更新能力，增強(qiáng)對化療藥物的敏感性。胰腺癌作為死亡率最高的消化系統(tǒng)腫瘤，尋找明確的早期標(biāo)志物及藥物治療方法一直是研究的熱點，通過探索胰腺癌與EZH2的關(guān)系，明確兩者之間的相關(guān)性可為胰腺癌的治療和評估提供新策略。

2.2 EZH2與乳腺癌 乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居女性惡性腫瘤之首，對女性生命健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅［34］。乳腺癌的病因尚未完全明確，目前已知的可能機(jī)制是抑癌基因失活和癌基因激活等。研究發(fā)現(xiàn)［35－36］，乳腺癌可能與乳腺癌易感基因1、乳腺癌易感基因2、p53、人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因等易感基因有關(guān)，EZH2作為可調(diào)控抑癌基因的基因之一，近年來仍作為研究熱點。早期研究發(fā)現(xiàn)，EZH2在不同類型的乳腺癌組織中表達(dá)不同，EZH2在導(dǎo)管原位癌中表達(dá)增加，且隨著乳腺癌惡性程度增加，其表達(dá)水平也逐步升高。Kleer等［37］進(jìn)一步分析了280例乳腺癌患者的EZH2蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)浸潤性乳腺癌蛋白表達(dá)水平較正常乳腺細(xì)胞明顯上調(diào)，且證實EZH2與乳腺癌的侵襲性呈顯著正相關(guān)。徐靜等［38］研究表明，在惡性程度較高的三陰性乳腺癌中，EZH2陽性表達(dá)率為51.2%，為正常組織細(xì)胞陽性率的2.6倍。對于可能的原因，Ding等［39］采用生存回歸分析發(fā)現(xiàn)，EZH2能促進(jìn)正常乳腺上皮細(xì)胞增生，并增加發(fā)展為乳腺癌的概率，因此EZH2的表達(dá)水平可作為乳腺腫瘤早期分子生物標(biāo)志物。有研究發(fā)現(xiàn)，EZH2可降低乳腺癌MCF－7細(xì)胞對他莫昔芬的敏感性，產(chǎn)生耐藥［40］。Ren等［41］研究表明，miR－26a可負(fù)性調(diào)節(jié)EZH2，使其表達(dá)降低，進(jìn)而使細(xì)胞內(nèi)G1/S期－特異性周期蛋白－D1下降和p16基因的去甲基化來改變細(xì)胞周期，從而逆轉(zhuǎn)乳腺癌中他莫昔芬的耐藥性。綜上，EZH2與乳腺癌關(guān)系密切，其表達(dá)水平對乳腺癌的臨床診斷有重要的指導(dǎo)意義。隨著研究的深入，EZH2逐漸成為更重要的治療靶點，同樣也為乳腺癌的診斷和分型提供了新的靶點。

2.3 EZH2與前列腺癌 前列腺癌是男性最常見的惡性腫瘤之一，由于早期無痛，且病程進(jìn)展隱匿，發(fā)現(xiàn)時多為晚期。起病初期多為雄激素依賴型，后多發(fā)展成難治型非雄激素依賴型，故尋找早期分子指標(biāo)，盡早防治為目前研究的重點。Varambally等［42］采用DNA芯片技術(shù)分析局限性前列腺癌與轉(zhuǎn)移后前列腺癌組織樣本中各類基因的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，在增高的55個基因中EZH2增高趨勢最明顯，轉(zhuǎn)移后前列腺癌組織中的EZH2表達(dá)水平明顯高于未轉(zhuǎn)移組，且隨著前列腺癌惡性程度增加，EZH2的表達(dá)也有升高趨勢。李倩等［43］研究發(fā)現(xiàn)EZH2抑制劑DZNep可有效降低人前列腺癌細(xì)胞中EZH2過表達(dá)，進(jìn)而抑制癌細(xì)胞增殖，并且使用siRNA技術(shù)沉默EZH2基因，前列腺癌細(xì)胞增殖同樣受到抑制。陶陶［44］研究發(fā)現(xiàn)，EZH2通過靶向抑制miR－200c和miR－181b進(jìn)而沉默抑癌基因，促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞增殖和糖代謝，加快癌癥發(fā)展。目前已有前列腺特異性抗原、睪酮等標(biāo)志物用于前列腺癌的臨床診斷，但EZH2作為轉(zhuǎn)移性前列腺癌中表達(dá)上調(diào)最高的基因仍具有重要研究價值，這也為探索更為合適的前列腺腫瘤早期轉(zhuǎn)移及預(yù)后分子標(biāo)志物提供了一個可能的研究方向。

2.4 EZH2與血液系統(tǒng)腫瘤

2.4.1 EZH2與多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)MM是一種惡性漿細(xì)胞病，多發(fā)于老年人，死亡率較高，且目前無法治愈。MM發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，具體機(jī)制目前尚不清楚，可能與環(huán)境、遺傳等有關(guān)。MM的易復(fù)發(fā)、強(qiáng)耐藥性等特點是導(dǎo)致死亡率較高的原因。Zeng等［45］研究發(fā)現(xiàn)，EZH2在正常的原代骨髓漿細(xì)胞中不表達(dá)，但在MM中EZH2呈高表達(dá)，且進(jìn)一步研究表明EZH2的表達(dá)水平與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)。侯越等［46］對41例MM患者的持續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，同一批患者復(fù)發(fā)時EZH2的表達(dá)水平高于未復(fù)發(fā)時，再次治療有效時EZH2表達(dá)水平又再次下降。Rastgoo等［47］發(fā)現(xiàn)，抑制EZH2過表達(dá)可使耐藥細(xì)胞對藥物重新敏化，具體機(jī)制可能是通過抑制EZH2使miR－138過表達(dá)，進(jìn)而提高腫瘤細(xì)胞對藥物的敏感性，降低耐藥性。綜上，EZH2與MM的發(fā)病及治療效果有關(guān)，表明EZH2可作為MM的預(yù)后分子指標(biāo)，也可為MM的靶向治療提供新思路。

2.4.2 EZH2與淋巴瘤 淋巴瘤是血液系統(tǒng)發(fā)病率最高的惡性腫瘤，分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤是少數(shù)可治愈的惡性腫瘤，非霍奇金淋巴瘤根據(jù)細(xì)胞來源可分為T、B以及自然殺傷細(xì)胞型，其中B細(xì)胞淋巴瘤約占70%，目前的治療手段主要為放化療。Wagener等［48］對127例非霍奇金淋巴瘤樣本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，EZH2在淋巴瘤組織中表達(dá)率達(dá)86%，而在正常組織中EZH2不表達(dá)，故證實EZH2在非霍奇金淋巴瘤組織中過表達(dá)，其機(jī)制可能是在正常B淋巴細(xì)胞發(fā)育早期階段EZH2通過甲基化修飾調(diào)控免疫球蛋白H的重排，而免疫球蛋白H的高表達(dá)可增加淋巴瘤發(fā)生風(fēng)險。信瑞等［49］通過shRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默EZH2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)EZH2的沉默可明顯降低人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的增殖能力和活性。Cabrero等［50］通過siRNA技術(shù)干擾套細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、Burkitt＇s淋巴瘤細(xì)胞中EZH2的表達(dá)，結(jié)果顯示EZH2的沉默可顯著降低人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的克隆能力，提示EZH2可能參與調(diào)控B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)展過程。抑制自然殺傷細(xì)胞/T細(xì)胞淋巴瘤組織中EZH2的表達(dá)可加速腫瘤細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與EZH2表達(dá)降低后自然殺傷細(xì)胞/T細(xì)胞淋巴瘤中SNK－6細(xì)胞增殖被抑制有關(guān)［51］。綜上所述，非霍奇金淋巴瘤與疾病的類型、分子機(jī)制、免疫學(xué)等因素相關(guān)，總體機(jī)制較為復(fù)雜，故尋找合適的化療藥物和分子靶向藥物極為重要。

3 展 望

隨著人們對EZH2基因認(rèn)識的不斷提高，多數(shù)惡性癌癥的發(fā)生發(fā)展、耐藥往往與EZH2的表達(dá)升高有關(guān)，其機(jī)制大多與EZH2增高進(jìn)而沉默抑癌基因有關(guān)。但也存在相反的結(jié)論，如在晚期結(jié)直腸癌患者中，EZH2水平表達(dá)較低往往預(yù)示著其對奧沙利鉑敏感性較差，耐藥性增強(qiáng)［52］;在紫杉醇治療乳腺癌的研究中也得到相同的結(jié)論［53］。EZH2研究不僅局限于腫瘤，在疼痛研究中，Yadav和Weng［54］證實損傷的神經(jīng)細(xì)胞中EZH2表達(dá)水平明顯升高，且注射抑制劑DZNep后EZH2表達(dá)水平顯著下降，疼痛明顯緩解。類風(fēng)濕疾病中亦有此類研究報道［55］?？傊?，EZH2作用范圍廣泛，涉及疾病眾多，探索EZH2的作用機(jī)制及上下游靶點具有重要的臨床價值。