張德綢，楊慧麟，葉麗莎，葛建華

1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科（瀘州646000）；2.西南醫(yī)科大學(xué)人文與管理學(xué)院（瀘州646000）；3.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院骨與關(guān)節(jié)外科（瀘州 646000）

慢性心力衰竭（chronic cardiac failure，CHF）發(fā)生于心肌受損，收縮或舒張功能障礙，不能正常泵送血液，致使循環(huán)血量不能滿足機(jī)體代謝需求的病理生理綜合征，為心血管疾患的終末期，具有發(fā)病率高和死亡率高等特點(diǎn)，已經(jīng)成為全球關(guān)注的公眾健康問(wèn)題，而中國(guó)由于步入老年化社會(huì)，問(wèn)題顯得更為突出[1]。通過(guò)控制血壓，積極改善與調(diào)整心肌機(jī)能，提高心肌缺血耐受性、抑制心肌細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)心肌收縮及泵血功能，是預(yù)防及治療CHF 的關(guān)鍵。近年來(lái)國(guó)內(nèi)中醫(yī)中藥的開發(fā)研究與臨床應(yīng)用，彰顯一定優(yōu)勢(shì)并獲得確切的治療效果[2-3]。心安顆粒為純中藥制劑，組方主要為黃芪、苦參、赤芍、麥冬組成，其開發(fā)及研究從基礎(chǔ)分子生物到臨床應(yīng)用歷經(jīng)近20余年，其對(duì)心肌炎及心肌缺血保護(hù)作用得以佐證[4-8]，設(shè)想心安顆粒有效的保護(hù)機(jī)制是否有利于CHF 患者的預(yù)防和治療，然而該藥物尚缺少該方面探索及研究，故設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)，論證其可能存在的有效性及其機(jī)理。

1 實(shí)驗(yàn)材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥品及試劑

雄性SD大鼠50只，體重（276±26）g，購(gòu)自西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；心安顆粒：西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院提供（批號(hào)：川藥制字Z20080302）；鹽酸異丙腎上腺素注射液：2 mL：1 mg/支，上海禾豐制藥有限公司（國(guó)藥準(zhǔn)字H31021344）；貝那普利片：10 mg/片，上海禾豐制藥有限公司（國(guó)藥準(zhǔn)字H31021344）；美托洛爾片：25 mg/片，阿斯利康藥業(yè)（中國(guó)）有限公司（國(guó)藥準(zhǔn)字H32025391）；大鼠BNP 酶聯(lián)免疫分析試劑盒及大鼠肌鈣蛋白測(cè)定試劑盒（上海宏遠(yuǎn)生物科技有限公司）；多普勒心臟彩超儀（西門子公司型號(hào)ACUSONS 2000）；全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（德國(guó)拜耳型號(hào)ACS：180）；余由學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物模型建立 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)審批（編號(hào)20130121）。大鼠基礎(chǔ)飼料同環(huán)境適應(yīng)性喂養(yǎng)1w，整個(gè)實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)期間保證飼養(yǎng)室環(huán)境安靜、衛(wèi)生、寬敞，定時(shí)播放輕音樂(lè)等。隨機(jī)選40 只大鼠，術(shù)前禁食8 h，耳緣靜脈麻醉，心臟超聲檢查并記錄，然后固定大鼠，參考蔣洪強(qiáng)等[9]腹主動(dòng)脈縮窄法依次步驟操作。誘導(dǎo)建立SD 大鼠CHF 動(dòng)物模型（造模成功標(biāo)準(zhǔn)：大鼠出現(xiàn)精神萎靡，呼吸頻率加快，飲食量及活動(dòng)量明顯減少，尿量減少，毛色光澤度差且易脫落等，LVEF 明顯低于造模前，LVEF ≤50 %[10-11]）。余10 只為空白對(duì)照組。結(jié)果：建模40只大鼠，死亡8只，確定建模成功大鼠32只，選取其中30 只作為實(shí)驗(yàn)大鼠。術(shù)后青霉素40 萬(wàn)U/d，共3次，同環(huán)境、同方法飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)鼠按動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)章程規(guī)定及要求處置。

1.2.2 動(dòng)物分組及給藥方法 建模成功SD 大鼠再隨機(jī)選分組：模型對(duì)照組、西藥組和心安顆粒組，每組10只，與空白對(duì)照組共計(jì)四組。

空白對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)，無(wú)藥物干預(yù)；模型對(duì)照組予以生理鹽水（3 mL/kg·d）灌胃；西藥組予以貝那普利（1.05 mg/kg·d）與美托洛爾（5.25 mg/kg·d）混懸液灌胃，每日一次；心安顆粒組心安顆粒（3.15 g/kg·d）灌胃[6]，每日一次，連續(xù)灌胃共6周。各組大鼠在給藥期間常規(guī)喂養(yǎng)，保證相對(duì)恒定生活環(huán)境至灌胃結(jié)束。

1.3 指標(biāo)檢測(cè)

1.3.1 心功能檢測(cè) 同前耳緣靜脈麻醉后，局部備皮，SD 大鼠依次行心臟超聲檢查（同一專業(yè)技術(shù)人員協(xié)助完成），獲取左心室收縮末內(nèi)徑（left ventric?ular end systolic diameter，LVESD）、左心室舒張末內(nèi)徑（left ventricular end diastolic diameter，LVEDD）、左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）。

1.3.2 血清腦肽素（brain natriuretic peptide，BNP）、心肌肌鈣蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）含量檢測(cè)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（連續(xù)灌胃6 周后）取鼠動(dòng)脈血2 mL，置室溫自然凝固10 min，2 500 r/min 離心10 min，收集上清液，置于-80 ℃冰箱凍存，集中測(cè)試。按BNP酶聯(lián)免疫分析試劑盒及cTnI 酶聯(lián)免疫試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA）說(shuō)明書操作，測(cè)定血清BNP、cTnI含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩兩比較采用q檢驗(yàn)，P ＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)物基本情況

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，模型對(duì)照組與心安顆粒組各死亡1只大鼠，西藥組死亡2只大鼠。

2.2 心功能檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果

四組間LVESD、LVEDD 和LVEF 比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組LVESD、LVEDD 明顯增大、LVEF 明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；西藥組、心安顆粒組較模型對(duì)照組LVESD、LVEDD 明顯縮小，LVEF 升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。心安顆粒組與西藥組之間各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠用藥6周超聲心功能檢測(cè)結(jié)果比較（）

表1 各組大鼠用藥6周超聲心功能檢測(cè)結(jié)果比較（）

注：a、b、c分別與空白對(duì)照組比較，P ＜0.05；b與c比較，P>0.05；HR：b、c與a比較，P ＜0.05

2.3 血清BNP、cTnI含量

四組間血清BNP、cTnI含量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清BNP、cTnI 含量明顯升高（P ＜0.05）；西藥組、心安顆粒組較模型對(duì)照組血清BNP、cTnI 含量降低（P ＜0.05）；心安顆粒組與西藥組之間各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠用藥6周后血清BNP、cTnI含量測(cè)定結(jié)果（）

表2 各組大鼠用藥6周后血清BNP、cTnI含量測(cè)定結(jié)果（）

注：a與空白對(duì)照組比較，P ＜0.05；b與c比較，P>0.05

3 討論

CHF 是一種臨床常見(jiàn)疾病，由于治療費(fèi)用昂貴并可致命而備受關(guān)注，成年人發(fā)病率約2%，65歲以上則增加至6%～10%，確診后一年內(nèi)死亡約35%，然后每年呈下降趨勢(shì)[12]。CHF 為慢性長(zhǎng)期病理狀態(tài)下的心臟功能損傷，心輸出量減少，心室負(fù)荷過(guò)重，心肌收縮力減弱LVESD、LVEDD為心臟收縮及舒張時(shí)心肌機(jī)能的兩項(xiàng)指標(biāo)，而LVEF 更直觀表明左心室泵血能力，可以用心臟彩超探測(cè)獲取數(shù)據(jù)，是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床觀察CHF嚴(yán)重程度及治療效果的重要指標(biāo)，也被作為CHF診斷的重要參考參數(shù)[13]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為CHF存在廣泛心肌細(xì)胞損傷及死亡，心肌受到損傷時(shí)，心肌收縮力下降導(dǎo)致循環(huán)灌注不足，胞質(zhì)中的游離cTnI 進(jìn)入血液，血清cTnI 逐漸升高，提示心功能進(jìn)行性降低，其血清含量水平可反應(yīng)心肌細(xì)胞損傷及收縮能力退化程度，由于其高敏感、高特異性及易染色定位等特征，被用做為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床檢測(cè)的重要指標(biāo)和診斷心肌損傷或梗死的“金標(biāo)準(zhǔn)”[14]。BNP 為心室內(nèi)心肌細(xì)胞分泌的一種激素，具有利尿排鈉和舒血管作用，可降低全身血管阻力及中心靜脈壓，通過(guò)與利尿鈉肽受體（NPR）和中性內(nèi)肽酶（NEP）結(jié)合而被清除，通過(guò)抵制垂體后葉加壓素，減輕心臟前后負(fù)荷，與心功能分級(jí)及預(yù)后關(guān)系密切，為檢測(cè)評(píng)估和診斷心衰的重要標(biāo)志物[15]。

本實(shí)驗(yàn)研究方案設(shè)計(jì)及灌胃劑量選擇均在前期研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步拓展[4-8]，經(jīng)研究表明CHF大鼠西藥組及心安顆粒組經(jīng)6 周治療，飲食量及活動(dòng)量逐漸增加，活動(dòng)后呼吸及心率相對(duì)平穩(wěn)，精神狀態(tài)等較治療前改善明顯；模型對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前后變化不明顯。CHF 大鼠模型對(duì)照組血清BNP、cTnI 含量均顯著升高，且模型對(duì)照組LVESD、LVEDD 明顯增大，LVEF顯著降低，提示CHF 時(shí)左心室功能不全程度越高，BNP、cTnI 水平也就越高，二者呈正相關(guān)。組間兩兩比較，與模型對(duì)照組相比，心安顆粒組和西藥均能不同程度降低CHF大鼠血清BNP、cTnI含量，縮小左室收縮及舒張功能，增加LVEF值，說(shuō)明能明顯改善心功能及心衰癥狀；心安顆粒組和西藥組相比無(wú)明顯差異性。

心安顆粒為純中藥制劑，組方主要為黃芪、苦參、赤芍、麥冬組成，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)：黃芪皂苷具有正性肌力作用，可降低心肌AngII 信號(hào)通路、醛固酮及血管緊張素II含量，可抑制心肌細(xì)胞凋亡、肥大及纖維化，逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)，從而改善心肌活力，減少細(xì)胞凋亡[16-18]；麥冬具有增強(qiáng)心肌收縮力，減慢心率，其中麥冬提取物麥冬多糖-1（MDG-1）具有抗心肌缺血損傷作用，并具有促進(jìn)心肌內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖，增加心肌對(duì)缺血耐受性提高，可增加冠脈血流量保護(hù)缺血區(qū)心肌細(xì)胞從而減少細(xì)胞凋亡，得到改善心肌缺血、心律失常、心肌收縮能力及心臟泵功能[8-20]；苦參堿可改善實(shí)驗(yàn)性心衰大鼠心功能，擴(kuò)張外周血管，赤芍具有明顯擴(kuò)張冠脈、抗心肌缺血作用，兩者均具有降低心肌氧耗，改善心功能作用[21]。

4 結(jié)論

綜上所述，心安顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠CHF具有正性肌力、改善心肌供血、提高心肌耐缺氧能力的作用，從而改善心功能，理論上為臨床治療CHF提供新的思路及方法，但本組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量有限及實(shí)驗(yàn)操作誤差等原因，可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定影響，仍有待于后期進(jìn)一步探討研究。