張文杰 李曉斌 劉 律 馬 艷 魯 豪 楊 昊 歐陽文 楊開倫*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆肉乳用草食動(dòng)物營養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830052；2.新疆伊犁哈薩克自治州昭蘇種馬場，昭蘇 835000)

馬匹在進(jìn)行高強(qiáng)度的訓(xùn)練或比賽時(shí)，往往伴隨著肌肉損傷、運(yùn)動(dòng)疲勞和恢復(fù)緩慢等生理問題。因此，在保證科學(xué)訓(xùn)練基礎(chǔ)上為專項(xiàng)運(yùn)動(dòng)馬補(bǔ)充特殊營養(yǎng)添加劑，對(duì)專項(xiàng)運(yùn)動(dòng)馬的能源補(bǔ)充和疲勞恢復(fù)具有重要意義。胍基乙酸(GAA)是哺乳動(dòng)物體內(nèi)肌酸(Cr)及其磷酸化衍生物磷酸肌酸的唯一前體物質(zhì)[1]，GAA主要在腎臟由L-精氨酸和甘氨酸內(nèi)源合成，通過血液循環(huán)運(yùn)輸?shù)礁闻K，在胍基乙酸-N-甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下再經(jīng)甲基化生成Cr[2]。外源性補(bǔ)充Cr已被證實(shí)對(duì)雜交馬[3]、伊犁馬[4]和純血馬[5]運(yùn)動(dòng)潛力的提升有顯著的作用。然而，外源性補(bǔ)充Cr時(shí)存在不穩(wěn)定和成本高等缺點(diǎn)，導(dǎo)致生物學(xué)效價(jià)不能充分的發(fā)揮，而GAA具有性質(zhì)穩(wěn)定、生物利用度高和成本低等特點(diǎn)，可能是比Cr更適合的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)充劑。在動(dòng)物合成Cr的過程中，需要甲基供體，外源性補(bǔ)充GAA更會(huì)引起甲基供體需求的增加[6]。此外，外源性補(bǔ)充GAA會(huì)導(dǎo)致同型半胱氨酸含量的升高[7]，對(duì)動(dòng)物的健康有潛在的威脅，而使用甲基供體的營養(yǎng)添加劑來抑制GAA生成的同型半胱氨酸是十分有效的[8]。外源性補(bǔ)充GAA和甲基供體的聯(lián)合使用或能發(fā)揮更大的優(yōu)勢。

甜菜堿(Bet)是甘氨酸的三甲基衍生物，能為機(jī)體提供可用性較高的甲基[9]；GAA合成Cr的過程中需要S-腺苷蛋氨酸作甲基供體，而S-腺苷蛋氨酸來源于蛋氨酸(Met)，適宜補(bǔ)充Bet或Met可使GAA更有效地轉(zhuǎn)化為Cr。補(bǔ)充GAA及GAA和甲基供體對(duì)耐力的提高和肌肉力量的增強(qiáng)主要集中在人的相關(guān)研究[10-11]中，而在運(yùn)動(dòng)馬研究中卻鮮有報(bào)道。因此，本試驗(yàn)選取伊犁馬為試驗(yàn)動(dòng)物，在飼糧中補(bǔ)喂GAA、GAA+Bet以及GAA+Met，探究補(bǔ)喂GAA和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬運(yùn)動(dòng)性能、糖代謝及抗氧化能力的影響，豐富伊犁馬生理代謝學(xué)理論，為促進(jìn)伊犁馬高水平運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和競賽能力的發(fā)揮提供科學(xué)理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)

試驗(yàn)于2020年9月16日至2020年10月11日在新疆維吾爾族自治區(qū)伊犁哈薩克自治州昭蘇種馬場進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis) %

續(xù)表1項(xiàng)目Items含量Content磷P0.39消化能DE/(MJ/kg)8.91

GAA補(bǔ)喂量參考Setoue等[12]的研究結(jié)果，Bet和Met的補(bǔ)喂量按照GAA轉(zhuǎn)化為Cr消耗的甲基數(shù)來確定(Bet有3個(gè)甲基，其中2個(gè)可供代謝循環(huán)利用，GAA轉(zhuǎn)化為Cr消耗1個(gè)甲基，那么Bet的添加劑量為GAA的1/2，補(bǔ)喂量為30 mg/kg BW；Met有1個(gè)甲基可供利用，GAA轉(zhuǎn)化為Cr消耗1個(gè)甲基，那么Met的補(bǔ)喂量與GAA之比為1∶1，由于DL-Met的利用率為50%，則Met的補(bǔ)喂量為152 mg/kg BW)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組見表2。將各組的GAA、Bet、Met、玉米和次粉制作成顆粒后等分為2份，與精料補(bǔ)充料充分混合后每天08:00和20:00補(bǔ)喂，進(jìn)行為期25 d的試驗(yàn)。

表2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組Table 2 Experimental design and groups

1.3 飼養(yǎng)管理

所有試驗(yàn)馬匹均單廄飼養(yǎng)在同一環(huán)境中，每天每匹馬飼喂8 kg干牧草和4 kg精料補(bǔ)充料，自由飲水。飼喂時(shí)，馬匹預(yù)先采食1 kg干牧草，再補(bǔ)給精料補(bǔ)充料，待精料補(bǔ)充料采食完畢后，繼續(xù)添加干牧草。每天按時(shí)打掃馬廄，清除糞便，更換墊草，及時(shí)驅(qū)蟲。

1.4 訓(xùn)練方案及場地

試驗(yàn)馬匹每天進(jìn)行1次速度訓(xùn)練，馬匹訓(xùn)練時(shí)間安排在11:00—13:00或者17:30—19:30。首先進(jìn)行熱身訓(xùn)練，騎手騎乘試驗(yàn)馬先在草道上慢步10 min，隨即進(jìn)入沙道，進(jìn)行10 min快步訓(xùn)練，然后15 min慢跳訓(xùn)練，最后停止訓(xùn)練，牽遛5～10 min，直至馬匹呼吸平穩(wěn)。訓(xùn)練場地為新疆昭蘇種馬場伊犁馬測試調(diào)訓(xùn)中心，賽道由橢圓形沙道和草道組成。內(nèi)部沙道由細(xì)沙構(gòu)成，深度40 cm，底部為土基，道寬21 m，周長為800 m；外部草道由天然的牧草形成，寬20 m，周長為1 000 m。

1.5 指標(biāo)測定

1.5.1 比賽成績測定

補(bǔ)喂試驗(yàn)開始前(第0天)和試驗(yàn)結(jié)束后(第25天)在新疆昭蘇種馬場伊犁馬測試調(diào)訓(xùn)中心進(jìn)行2 000 m速度賽，賽道周長為1 000 m，用秒表記錄每匹馬的比賽用時(shí)，用以下公式計(jì)算每秒速度值、平均耗時(shí)減少以及成績提高幅度。

每秒速度值(m/s)=2 000(m)/比賽用時(shí)(s)；平均耗時(shí)減少(s)=試驗(yàn)第0天比賽用時(shí)(s)-試驗(yàn)第25天比賽用時(shí)(s)；成績提高幅度(%)=[平均耗時(shí)減少(s)/試驗(yàn)第0天比賽用時(shí)(s)]×100。

1.5.2 心率、呼吸頻率測定

試驗(yàn)第25天進(jìn)行2 000 m速度賽，在賽前2 h、賽后即刻和賽后2 h用Polar脈搏儀(購自上海益聯(lián)科教設(shè)備有限公司)測定每匹馬的心率，同時(shí)通過觀察胸廓起伏次數(shù)記錄每匹馬的呼吸頻率。

1.5.3 血漿生化指標(biāo)的測定

于試驗(yàn)第25天進(jìn)行2 000 m速度賽，分別在賽前2 h、賽后即刻和賽后2 h采集血樣，通過馬匹頸靜脈采集血液4 mL至氟化鈉抗凝管，3 500 r/min離心15 min，制備血漿，分裝至1.5 mL Eppendorf管中，標(biāo)記后-20 ℃冷凍保存。

馬匹血漿中GAA、Cr、肌酐(Crn)含量在新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)實(shí)驗(yàn)室采用高效液相色譜法測定[13]；血漿過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、肌酸激酶(CK)活性，總抗氧化能力(T-AOC)，丙二醛(MDA)、葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)含量送至北京華英生物技術(shù)研究所采用比色法測定；血漿胰島素(INS)、胰高血糖素(Gc)含量送至北京華英生物技術(shù)研究所采用酶聯(lián)免疫吸附法測定。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用Excel 2010進(jìn)行初步整理，試驗(yàn)結(jié)果以平均值(mean)和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件的one-way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著則用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)，0.05

2 結(jié)果與分析

2.1 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬2 000 m比賽成績的影響

由表3可知，各組第0天比賽用時(shí)、第25天比賽用時(shí)和每秒速度值間均無顯著性差異(P>0.05)。GAA組、GAA+Bet組和GAA+Met組在平均耗時(shí)減少方面顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；GAA組在成績提高幅度方面顯著高于GAA+Met組、對(duì)照組(P<0.05)，高于GAA+Bet組，但無顯著性差異(P>0.05)。

表3 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬2 000 m比賽成績的影響Table 3 Effects of supplemental feeding of guanidine acetic acid and different methyl donors on results of 2 000 m race in Yili horses (n=5)

2.2 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體對(duì)伊犁馬2 000 m比賽心率和呼吸頻率的影響

由表4可知，賽前2 h，各組馬匹心率和呼吸頻率穩(wěn)定；賽后即刻，各組馬匹心率和呼吸頻率均升高；賽后2 h，各組馬匹心率和呼吸頻率恢復(fù)至正常水平。各組馬匹心率和呼吸頻率在賽前2 h、賽后即刻和賽后2 h均無顯著性差異(P>0.05)。

表4 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體對(duì)伊犁馬2 000 m比賽心率和呼吸頻率的影響Table 4 Effects of supplemental feeding of guanidine acetic acid and different methyl donors on heart rate and respiratory rate of 2 000 m race in Yili horses (n=5)

2.3 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿GAA、Cr及Crn含量的影響

由表5可知，賽前2 h、賽后即刻和賽后2 h，各組馬匹血漿GAA、Cr和Crn含量雖均無顯著性差異(P>0.05)，但各試驗(yàn)組血漿GAA、Cr和Crn含量在對(duì)照組基礎(chǔ)上有一定的提高。

表5 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿GAA、Cr及Crn含量的影響Table 5 Effects of supplemental feeding of guanidine acetic acid and different methyl donors on plasma GAA,Cr and Crn contents in Yili horses (n=5) μmol/L

2.4 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿肌酸激酶活性、乳酸含量的影響

由表6可知，GAA組、GAA+Bet組、GAA+Met組血漿肌酸激酶活性在賽前2 h均有增加的趨勢(P=0.094)，乳酸含量也有小幅度升高；各組間血漿肌酸激酶活性和乳酸含量在賽后即刻和賽后2 h均無顯著性差異(P>0.05)。

表6 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿肌酸激酶活性、乳酸含量的影響Table 6 Effects of supplemental feeding of guanidine acetic acid and different methyl donors on plasma creatine kinase activity and lactic acid content in Yili horses (n=5)

續(xù)表6項(xiàng)目Items對(duì)照組ControlgroupGAA組GAAgroupGAA+Bet組GAA+BetgroupGAA+Met組GAA+MetgroupSEMP值P-value乳酸LD/(mmol/L)賽前2hPre-race2h0.820.920.880.900.050.154賽后即刻Immediatelyatpost-race1.121.131.111.440.910.385賽后2hPost-race2h0.740.780.730.650.040.739

2.5 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿糖代謝的影響

由表7可知，各組間血漿葡萄糖含量在賽前2 h、賽后即刻和賽后2 h均無顯著性差異(P>0.05)，GAA組和GAA+Bet組血漿胰島素含量在賽后即刻、賽后2 h顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，GAA組血漿胰高血糖素含量在比賽前后均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，GAA+Bet組在賽前2 h和賽后即刻較對(duì)照組有顯著升高(P<0.05)，GAA組總體優(yōu)于GAA+Bet組。

表7 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿糖代謝的影響Table 7 Effects of supplemental feeding of guanidine acetic acid and different methyl donors on plasma glucose metabolism in Yili horses (n=5)

2.6 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿抗氧化指標(biāo)的影響

由表8可知，賽前2 h，GAA組、GAA+Bet組和GAA+Met組血漿CAT、GSH-Px、SOD活性及T-AOC均高于對(duì)照組，MDA含量均低于對(duì)照組。其中，GAA組血漿GSH-Px、SOD活性和T-AOC顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，GAA+Bet組和GAA+Met組血漿SOD活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；賽后即刻，GAA組、GAA+Bet組和GAA+Met組血漿CAT活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，GAA+Bet組血漿MDA含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；賽后2 h，GAA組血漿T-AOC顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，MDA含量顯著降低(P<0.05)。

表8 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿抗氧化指標(biāo)的影響Table 8 Effects of supplemental feeding of guanidine acetic acid and different methyl donors on plasma antioxidant indices in Yili horses (n=5)

續(xù)表8項(xiàng)目Items對(duì)照組ControlgroupGAA組GAAgroupGAA+Bet組GAA+BetgroupGAA+Met組GAA+MetgroupSEMP值P-value谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px/(U/mL)賽前2hPre-race2h379.15b487.75a428.19ab398.40b15.550.047賽后即刻Immediatelyatpost-race312.13384.37359.62339.0311.050.113賽后2hPost-race2h276.07328.31299.89291.0912.580.549超氧化物歧化酶SOD/(U/mL)賽前2hPre-race2h73.04c110.43a90.85b85.90b3.43<0.001賽后即刻Immediatelyatpost-race70.5676.4782.1272.484.400.826賽后2hPost-race2h49.1254.8148.6447.871.810.544總抗氧化力T-AOC/(U/mL)賽前2hPre-race2h6.27b7.43a7.01ab6.71ab0.150.023賽后即刻Immediatelyatpost-race7.117.196.846.510.150.405賽后2hPost-race2h6.30ab7.03a6.05ab5.08b0.240.019丙二醛MDA/(nmol/mL)賽前2hPre-race2h3.302.712.472.940.120.064賽后即刻Immediatelyatpost-race3.17a2.68ab2.40b2.87ab0.100.035賽后2hPost-race2h4.30a3.22b3.90ab4.40a0.170.042

3 討 論

3.1 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬運(yùn)動(dòng)性能的影響

補(bǔ)充GAA或Cr具有增強(qiáng)肌肉力量[10]、改善運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)[14]、緩解運(yùn)動(dòng)疲勞[15]、促進(jìn)肌肉生長和提高抗氧化力[4]等作用。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組2 000 m比賽用時(shí)較對(duì)照組而言均有縮短，特別是在平均耗時(shí)減少和成績提高幅度方面，GAA組和GAA+Bet組顯著高于對(duì)照組，說明補(bǔ)喂GAA和GAA+Bet均能改善伊犁馬運(yùn)動(dòng)速度，其原因可能是由于補(bǔ)喂GAA或GAA和Bet后，增加了儲(chǔ)存在骨骼肌中磷酸肌酸和ATP的含量，并在劇烈運(yùn)動(dòng)期間發(fā)揮著重要的作用[16]。Teixeira等[3]研究指出，為平均體重為429 kg的雜交馬口服補(bǔ)充0.28 g/kg BW Cr 45 d后，對(duì)其比賽成績、心率和脈壓無顯著性影響。李曉斌等[4]發(fā)現(xiàn)，給伊犁馬補(bǔ)喂38 g Cr后，可提高伊犁馬1 000 m的運(yùn)動(dòng)成績，對(duì)賽前1 h、賽后即刻和賽后30 min的心率無顯著影響。結(jié)果均與本試驗(yàn)相似。

3.2 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿GAA、Cr及Crn含量的影響

GAA是Cr生物合成的唯一前體物質(zhì)，是能量代謝的重要底物。GAA可以在酶催化反應(yīng)下由L-Arg和甘氨酸內(nèi)源性形成，也可從富含動(dòng)物蛋白質(zhì)的食物中攝取[17]。GAA轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟后甲基化為Cr，Cr作為高能載體在細(xì)胞中發(fā)揮重要作用[18]。本試驗(yàn)中，給伊犁馬補(bǔ)喂GAA和不同甲基供體物(Bet、Met)后發(fā)現(xiàn)，GAA組、GAA+Bet組和GAA+Met組血漿GAA和Cr含量在賽前2 h、賽后即刻和賽后2 h均高于對(duì)照組，說明補(bǔ)喂的GAA經(jīng)腸道吸收后，通過血液循環(huán)進(jìn)入肝臟和腎臟，在肝臟、腎臟中GAA甲基化生成Cr，隨后又從肝臟釋放到血液循環(huán)中，經(jīng)肌酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白將Cr轉(zhuǎn)入肌纖維和其他組織[19]。外源性補(bǔ)充GAA可增加GAA和Cr的生物利用度。Sewell等[5]證實(shí)，補(bǔ)喂0.05 g/kg BW的Cr后，可增加純血馬血漿中Cr含量。Ostojic等[10]以48名健康志愿者為研究對(duì)象，通過口服補(bǔ)充1.2、2.4和4.8 g/d GAA 6周后發(fā)現(xiàn)，志愿者血漿GAA、Cr含量均有顯著性升高，且存在劑量效應(yīng)。與本試驗(yàn)略有不同，可能是由于物種之間的吸收機(jī)制存在差異，馬是草食動(dòng)物，與人類相比，肌酸的吸收可能會(huì)延遲或減少。GAA合成Cr的過程中需要S-腺苷蛋氨酸作甲基供體，而S-腺苷蛋氨酸來源于Met。本試驗(yàn)前期未對(duì)基礎(chǔ)飼糧中Met進(jìn)行測定，僅考慮在原有飼糧基礎(chǔ)上給伊犁馬補(bǔ)喂GAA時(shí)，可能會(huì)造成機(jī)體甲基的不足，因此，額外補(bǔ)充了甲基供體物(Bet和Met)，然而，GAA+Bet組和GAA+Met組與GAA組結(jié)果相近，并未達(dá)到顯著提高GAA和Cr含量的效果。在試驗(yàn)后期對(duì)基礎(chǔ)飼糧中Met含量測定后發(fā)現(xiàn)，精料補(bǔ)充料Met含量為0.63%，青干草Met含量為0.23%，每匹馬每天采食4 kg精料補(bǔ)充料(Met攝入量為25.2 g)和8 kg青干草(Met攝入量為18.4 g)，試驗(yàn)組馬匹平均體重為418.40 kg，外源性補(bǔ)喂GAA量為25.10 g，說明在本試驗(yàn)研究條件下，基礎(chǔ)飼糧中的Met能滿足外源性補(bǔ)喂GAA時(shí)所需要的甲基，不需要再額外補(bǔ)充。GAA組、GAA+Bet組和GAA+Met組血漿Crn含量在賽前、即刻和賽后均略高于對(duì)照組，與GAA、Cr含量的結(jié)果相符。Crn是Cr和磷酸肌酸的代謝產(chǎn)物，Crn含量的小幅度增加與Cr的含量升高有關(guān)。該試驗(yàn)結(jié)果與Stead等[20]和Ostojic等[21]給人補(bǔ)充GAA和不同甲基供體物的研究結(jié)果一致。

3.3 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿肌酸激酶活性、乳酸含量的影響

肌酸激酶是催化磷酸肌酸向ADP轉(zhuǎn)移的最具特征性的肌肉組織酶之一，馬匹在訓(xùn)練或比賽期間，肌酸激酶活性的高低常作為肌肉細(xì)胞損傷的檢測指標(biāo)[22]。Franciscato等[23]證實(shí)，肌酸激酶活性的升高表明肌肉損傷，肌酸激酶活性的下降速度反映肌肉恢復(fù)的快慢程度。在本試驗(yàn)中，GAA組和GAA+Met組血漿肌酸激酶活性在賽后即刻和賽后2 h較對(duì)照組均有所降低，說明在給伊犁馬飼糧中補(bǔ)喂GAA或GAA和Met聯(lián)合組后，可在一定程度上降低伊犁馬機(jī)體肌酸激酶的活性，進(jìn)而對(duì)其肌肉的快速恢復(fù)有積極的作用。而在賽前2 h，3個(gè)試驗(yàn)組血漿肌酸激酶活性在對(duì)照組基礎(chǔ)上均有升高，說明馬匹在運(yùn)動(dòng)前，補(bǔ)充GAA和不同甲基供體物(Bet、Met)后，可小幅度提高伊犁馬血漿肌酸激酶的活性。試驗(yàn)結(jié)果可能與機(jī)體Cr含量的升高有關(guān)。Dickinson等[24]認(rèn)為，肌酸激酶活性的增加可通過外源性補(bǔ)充Cr來實(shí)現(xiàn)。也有學(xué)者認(rèn)為，血清肌酸激酶活性的小幅增加與運(yùn)動(dòng)期間脂質(zhì)過氧化和肌肉組織缺氧導(dǎo)致的異常細(xì)胞膜通透性有關(guān)[25]。

馬匹在進(jìn)行短途、高強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量乳酸，造成肌肉酸痛、乏力等疲勞癥狀，影響骨骼肌收縮能力和馬匹的運(yùn)動(dòng)性能[26]。在本試驗(yàn)中，賽前2 h，對(duì)照組血漿乳酸含量略低于試驗(yàn)組，可能是因?yàn)樵囼?yàn)組馬匹在完成2 000 m比賽時(shí)，由于比賽用時(shí)的縮短，導(dǎo)致試驗(yàn)組馬匹的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度高于對(duì)照組，進(jìn)而增加了丙酮酸和乳酸等代謝產(chǎn)物的含量[27]。此外，GAA+Bet組在賽后即刻和GAA+Met組在賽后2 h，血漿乳酸含量有小幅度的降低，說明補(bǔ)喂GAA+Bet和GAA+Met對(duì)伊犁馬賽后機(jī)體乳酸清除有一定的作用。

3.4 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿糖代謝的影響

馬匹在進(jìn)行時(shí)高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)時(shí)，會(huì)引起血糖和骨骼肌中的肌糖原加速分解。Eijnde等[28]和Ju等[29]研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充Cr可改善人和大鼠葡萄糖的代謝，增加肌糖原的積累。在本試驗(yàn)中，給伊犁馬補(bǔ)喂Cr前體物質(zhì)GAA和GAA+Bet、Met聯(lián)合組后發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組血漿葡萄糖含量在賽后即刻高于對(duì)照組，說明給伊犁馬補(bǔ)喂GAA或GAA+Bet、Met后，增加了伊犁馬血漿的葡萄糖含量，試驗(yàn)結(jié)果可能與馬匹體內(nèi)Cr含量的增加有關(guān)。此外，本試驗(yàn)的3個(gè)試驗(yàn)組在比賽即刻和比賽后血漿胰島素和胰高血糖素含量均出現(xiàn)增加。導(dǎo)致這一現(xiàn)象的原因可能是馬匹在高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)時(shí)，血糖被大量消耗，胰高血糖素分泌增多，糖異生作用隨之增強(qiáng)[30]。其次，由于補(bǔ)喂GAA或GAA+Bet后，馬匹機(jī)體中血漿氨基酸含量增加，氨基酸生糖引發(fā)了胰島素和胰高血糖素含量發(fā)生了變化[6]。另外，Van Loon等[31]發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充Cr和碳水化合物會(huì)顯著提高胰島素含量，刺激胰島素的分泌和增加葡萄糖的受體。Rooney等[32]和李曉斌等[4]也證實(shí)，長期補(bǔ)充Cr會(huì)提高大鼠和馬的血漿胰島素和葡萄糖的含量。因此，本試驗(yàn)胰島素和胰高血糖素含量的升高也可能與Cr含量的增加有關(guān)。

3.5 補(bǔ)喂胍基乙酸和不同甲基供體物對(duì)伊犁馬血漿抗氧化能力的影響

運(yùn)動(dòng)會(huì)造成大量的活性氧(ROS)和自由基的積累[33]。在馬匹運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練中，如何快速清除機(jī)體產(chǎn)生的自由基，增加CAT、SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性和降低脂質(zhì)過氧化反應(yīng)中MDA含量來緩解氧化應(yīng)激，對(duì)運(yùn)動(dòng)能力的提高有著重要的意義。在本試驗(yàn)中，GAA組、GAA+Bet組和GAA+Met組均能提高賽前2 h和賽后即刻血漿中CAT、GSH-Px、SOD活性，說明補(bǔ)喂GAA、GAA+Bet和GAA+Met均可使伊犁馬血漿抗氧化能力增強(qiáng)。試驗(yàn)結(jié)果可能與GAA和不同甲基供體物進(jìn)入伊犁馬機(jī)體后，被迅速代謝為Cr有關(guān)，而Cr已被證實(shí)可作為外源性抗氧化劑來提高伊犁馬和焉耆馬的抗氧化能力[4,34]。此外，GAA組在馬匹血漿抗氧化能力提高方面，優(yōu)于GAA+Bet組和GAA+Met組，說明本試驗(yàn)條件下，基礎(chǔ)飼糧中的Met可為馬匹機(jī)體提供足夠的甲基，不需要額外補(bǔ)充甲基供體物便可使抗氧化能力顯著提高。本試驗(yàn)結(jié)果與Wang等[35]給生長育肥豬補(bǔ)喂不同水平GAA的結(jié)果相一致。因此，GAA也可作為一種良好的抗氧化劑來清除馬匹體內(nèi)的ROS和自由基，提高其運(yùn)動(dòng)能力。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，可以得出以下結(jié)論：

① 補(bǔ)喂GAA和不同甲基供體物(Bet、Met)可提高伊犁馬2 000 m比賽運(yùn)動(dòng)成績、比賽前后血漿胰島素和胰高血糖素含量以及抗氧化能力，以GAA效果最好。

② 補(bǔ)喂GAA和不同甲基供體物(Bet、Met)對(duì)伊犁馬比賽前后血漿GAA、Cr、Crn、乳酸、葡萄糖含量和肌酸激酶活性無顯著影響。

③ 給伊犁馬飼糧補(bǔ)喂60 mg/kg BW GAA時(shí)，基礎(chǔ)飼糧中所含的Met可為機(jī)體提供足夠的甲基，不需要再額外補(bǔ)充甲基供體物。