張宏巖

常規(guī)細(xì)胞涂片法中受間皮細(xì)胞增生、涂片厚度、組織形態(tài)結(jié)構(gòu)影響,容易將其誤診為轉(zhuǎn)移性腺癌,特別是間皮腫瘤、肺腺癌僅依靠細(xì)胞涂片往往難以準(zhǔn)確診斷,容易影響患者病情治療,導(dǎo)致患者病情延誤,因此,探尋安全、有效、準(zhǔn)確的診斷手段,對間皮腫瘤及肺腺癌患者存活具有重要意義［1,2］。本研究收集本院收治的90 例胸腔積液患者,分析胸腔積液細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)在肺腺癌患者中的診斷價值,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2018 年1 月～2020 年1 月本院收治的90 例胸腔積液患者納入研究,其中男48 例,女42 例；年齡最小21 歲,最大74 歲,平均年齡(47.5±9.2)歲。所有患者均存在胸腔積液,臨床特征、影像學(xué)檢查結(jié)果為惡性,在詳細(xì)了解此次研究內(nèi)容后自愿參與,且已簽署知情同意書；排除血液系統(tǒng)疾病、心、肝、腎等重要臟器器質(zhì)性損傷疾病、嚴(yán)重感染、精神疾病、認(rèn)知障礙,不具備獨立溝通能力及不配合者；本研究已獲本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 采集胸腔積液標(biāo)本 清晨所有患者均接受胸腔積液采集,采集量為50 ml,使用5 支試管進(jìn)行分裝,每支試管10 ml；使用離心機(jī)進(jìn)行離心處理,3000 r/min,時間為10～15 min,吸出上層清液,保留沉渣；使用部分沉渣進(jìn)行HE 細(xì)胞涂片制作,再將2.5 ml 戊二醛加入剩余沉渣中,固定好后進(jìn)行離心處理,3000 r/min,時間為5 min,將上層清液吸出,使用濾紙將沉渣脫水保留,再進(jìn)行石蠟包埋,并將其處理為3～4 μm 切片。

1.2.2 HE 染色 分別對細(xì)胞塊切片和細(xì)胞涂片進(jìn)行HE 染色處理,選擇科室2 名以上具備豐富經(jīng)驗的病理醫(yī)師進(jìn)行閱片,觀察標(biāo)本核不典型性、粘附性及細(xì)胞形態(tài),判定標(biāo)本性質(zhì)。良性反應(yīng)性間皮細(xì)胞增生：不具備不典型性,細(xì)胞彌散進(jìn)行分布,細(xì)胞形態(tài)較為溫和；惡性間皮瘤細(xì)胞或轉(zhuǎn)移性腺癌：重度不典型性細(xì)胞核和細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞成團(tuán)進(jìn)行分布；不確定良惡性：中重度不典型性細(xì)胞核,細(xì)胞彌散進(jìn)行分布,或輕中度不典型性細(xì)胞核,細(xì)胞成團(tuán)進(jìn)行分布。

1.2.3 免疫組化染色檢查 選擇福州邁新公司DAB顯色試劑和Maxvision試劑盒進(jìn)行免疫組化S-P法染色,所有相關(guān)指標(biāo)抗體均根據(jù)基因公司要求嚴(yán)格對間皮細(xì)胞免疫組化指標(biāo)(Desmin、WT-1、CK5/6)和肺腺癌免疫組化指標(biāo)(BerEP4、TTF-1、CK17、CD15)進(jìn)行檢查,其中Desmin、CK5/6、BerEP4、CK17 顏色結(jié)果為棕黃色細(xì)胞質(zhì)染色則診斷為陽性,CD15 出現(xiàn)細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)染色則診斷為陽性。

1.3 觀察指標(biāo) 對比細(xì)胞塊切片HE 染色和細(xì)胞涂片HE 染色對胸腔積液的診斷結(jié)果；常規(guī)細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)的惡性胸腔積液診斷率；間皮細(xì)胞免疫組化指標(biāo)(Desmin、WT-1、CK5/6)、肺腺癌免疫組化指標(biāo)(BerEP4、TTF-1、CK17、CD15)染色結(jié)果［3］。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞塊切片HE 染色和細(xì)胞涂片HE 染色對胸腔積液的診斷結(jié)果對比 90 例患者經(jīng)細(xì)胞塊切片HE 染色顯示38 例(42.22%)為良性,28 例(31.11%)為惡性,24 例(26.67%)為不確定性；細(xì)胞涂片HE 染色顯示37 例(41.11%)為良性,31 例(34.44%)為惡性,22 例(24.44%)為不確定性。細(xì)胞塊切片HE 染色和細(xì)胞涂片HE 染色對胸腔積液的診斷結(jié)果對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 常規(guī)細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)的惡性胸腔積液診斷率對比 90 例患者經(jīng)細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)診斷48 例(53.33%)為良性,42 例(46.67%)為惡性；常規(guī)細(xì)胞涂片診斷39 例(43.33%)為良性,33 例(36.67%)為惡性,18 例(20.00%)為不確定性。細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)的惡性胸腔積液診斷率明顯高于常規(guī)細(xì)胞涂片,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)病理檢查發(fā)現(xiàn)90 例患者中40 例為惡性,細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)診斷誤診2 例,診斷準(zhǔn)確率為95.24%(40/42)。

2.3 常規(guī)細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)染色結(jié)果對比 肺腺癌患者細(xì)胞中CD15、CK17、TTF-1、BerEP4 陽性表達(dá)率明顯高于良性細(xì)胞、間皮腫瘤、不確定性細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；良性細(xì)胞中Desmin、WT-1、CK5/6 陽性表達(dá)率明顯高于肺腺癌,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；肺腺癌患者細(xì)胞中Desmin、WT-1、CK5/6 陽性表達(dá)率低于間皮腫瘤細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 常規(guī)細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)染色結(jié)果對比［n(%)］

3 討論

胸腔積液屬于高發(fā)呼吸系統(tǒng)疾病,多見于炎癥、非小細(xì)胞肺癌、惡性胸膜間皮瘤、肺腺癌患者中,該疾病發(fā)病后雖進(jìn)展緩慢,但前期就已存在血行轉(zhuǎn)移情況,死亡率高,因此,早診斷、早治療對患者病情預(yù)后具有重要意義。在臨床診斷中,因胸腔積液細(xì)胞采樣、制片操作方便,速度快,通過觀察胸腔積液標(biāo)本中是否存在脫落癌細(xì)胞可判斷患者胸腔積液性質(zhì),成為常用病理診斷方式［4,5］。但由于胸腔積液成分較為復(fù)雜,部分細(xì)胞形態(tài)較為接近,僅依靠細(xì)胞涂片難以準(zhǔn)確判斷患者細(xì)胞性質(zhì),特別是肺腺癌、惡性間皮瘤形態(tài)相似度較高,細(xì)胞涂片HE 染色診斷容易出現(xiàn)誤診［6,7］。近年來,隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)日漸成熟,細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)逐漸在臨床診斷中推廣,該技術(shù)也常稱之為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù),主要通過抗體熒光素、同位素顯色劑化學(xué)反應(yīng),判斷組織細(xì)胞中多肽、蛋白質(zhì),特異性較高,臨床發(fā)現(xiàn)該診斷方式在間皮腫瘤及肺腺癌患者診斷中敏感性較高［8,9］。相較于細(xì)胞涂片,細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)由單人進(jìn)行專業(yè)儀器染色操作,雖操作復(fù)雜,但耗材低,可避免人為因素影響診斷結(jié)果,細(xì)胞塊均勻分布,脫落細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)可得到更好保存,彌補(bǔ)了細(xì)胞涂片細(xì)胞分布不均、形態(tài)模糊等弊端,可避免診斷結(jié)果假陽性,且能準(zhǔn)確對患者胸腔積液良惡性進(jìn)行判斷［10-12］。本研究結(jié)果顯示：細(xì)胞塊切片HE 染色和細(xì)胞涂片HE 染色對胸腔積液的診斷結(jié)果對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)的惡性胸腔積液診斷率明顯高于常規(guī)細(xì)胞涂片,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)病理檢查發(fā)現(xiàn)90 例患者中40 例為惡性,細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)診斷誤診2 例,診斷準(zhǔn)確率為95.24%(40/42)。肺腺癌患者細(xì)胞中CD15、CK17、TTF-1、BerEP4 陽性表達(dá)率明顯高于良性細(xì)胞、間皮腫瘤、不確定性細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；良性細(xì)胞中Desmin、WT-1、CK5/6 陽性表達(dá)率明顯高于肺腺癌,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；肺腺癌患者細(xì)胞中Desmin、WT-1、CK5/6 陽性表達(dá)率低于間皮腫瘤細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述,肺腺癌采取細(xì)胞涂片聯(lián)合細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)進(jìn)行診斷,可為臨床醫(yī)生提供更多診斷參考依據(jù),有助于提高診斷準(zhǔn)確率。