蔣京辰 李梅珊 朱廷春

1.廣西師范大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，省部共建藥用資源化學(xué)與藥物分子工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西民族藥省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，廣西 桂林 541004；2.邯鄲學(xué)院化學(xué)化工與材料學(xué)院，河北省雜環(huán)化合物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 邯鄲 056005

鉤藤(Uncariarhynchophylla)原名“釣藤”，為茜草科植物鉤藤Uncariarhynchophylla(Miq.)Miq.ex Havil、大葉鉤藤UncariamacrophyllaWall.、毛鉤藤UncariahirsutaHavil.、華鉤藤Uncariasinensis(Oliv.) Havil.或無(wú)柄果鉤藤UncariasessilifructusRoxb.的干燥帶鉤莖枝?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》記載其具有息風(fēng)定驚，清熱平肝之功效。常用于肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)、驚癇抽搐、高熱驚厥、感冒夾驚、小兒驚啼、妊娠子癇、頭痛眩暈[1]，其形態(tài)及常用藥用部位見(jiàn)下圖1和圖2[2]。

圖1 鉤藤入藥部位：干燥帶鉤莖枝圖

圖2 植物鉤藤形態(tài)及其常用藥用部位圖

鉤藤屬植物在我國(guó)有10～14種，而鉤藤的植物資源分布在福建、江西、廣東、廣西、湖南、湖北、貴州、云南、浙江、四川和安徽等[3-4]，詳見(jiàn)下表1[5]?！侗静菥V目》曰：“古方多用皮，后世多用鉤，取其力銳爾?！薄侗静輩R言》云：“鉤藤，久煎無(wú)力，他藥煎熟十余沸，投入即起，頗得力也。去梗純用嫩鉤，功力十倍?！盵6]《廣西本草選編》記載用鉤藤全株5錢(qián)至1兩，水煎服，治療感冒風(fēng)熱，高燒抽搐，高血壓，頭暈，頭痛，目眩。用全株1斤水煎代茶飲，可解斷腸草中毒[7]。

表1 鉤藤屬植物資源分布一覽表[5]

此外，在中醫(yī)治療當(dāng)中，鉤藤常與天麻做為藥對(duì)。如中醫(yī)天麻鉤藤飲方組出自《雜病證治新義》，該方具補(bǔ)益肝腎、平肝潛陽(yáng)以及清熱活血等作用，天麻鉤藤飲方是當(dāng)前中醫(yī)治療高血壓病的一張經(jīng)典代表方[8]。而國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)于天麻鉤藤飲方的研究大多停留在臨床患者或者實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的臨床療效觀察統(tǒng)計(jì)上[9-10]，對(duì)于鉤藤毒性成分的毒性作用在經(jīng)典方中所表現(xiàn)出來(lái)的不良反應(yīng)，以及是否成劑量相關(guān)性，鮮有文獻(xiàn)發(fā)表。本文就鉤藤化學(xué)成分及其藥理作用、毒性作用及其在整體動(dòng)物上的毒性表現(xiàn)和毒性作用機(jī)制做一綜述。

1 鉤藤化學(xué)成分及其藥理作用

1.1 鉤藤化學(xué)成分 近年來(lái)，對(duì)鉤藤的主要藥效/毒效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究[11-12]表明，其主要成分含生物堿類、黃酮類、萜類、酯類以及其它成分(如胡蘿卜苷，β-谷甾醇，α-香樹(shù)素乙酸酯，對(duì)羥基肉桂酸甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯，烏蘇酸，東莨菪素，咖啡酸、地榆素，食子酰原矢車菊素， 玄參苷等多種成分)。

研究[13-14]表明，生物堿類物質(zhì)(吲哚類)，特別是鉤藤堿( Rhynchophylline) 和異鉤藤( Isorhynchophylline) ，是鉤藤的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和毒性物質(zhì)基礎(chǔ)。其中，鉤藤堿占鉤藤總堿28.9%，異鉤藤堿占鉤藤總堿14.7%，二者合占在鉤藤總堿的40%以上。此外，辛文波等[15]從鉤藤和毛鉤藤葉中分離出毛鉤藤堿、去氫毛鉤藤堿、異去氫鉤藤堿、柯諾新、喜果苷、卡丹賓堿、二氫卡丹賓堿、帽柱木菲堿以及臺(tái)鉤藤堿A和B等；鄭嘉寧等[16]從大葉鉤藤中分離得到柯諾辛堿、柯諾辛堿B等6 種生物堿。

1.2 鉤藤藥理作用 研究[17]表明，鉤藤具有降壓作用。鉤藤總堿、鉤藤堿、異鉤藤堿均有較明顯的降壓作用，但其中鉤藤堿降壓強(qiáng)度略低于異鉤藤堿，其降壓特點(diǎn)是先降壓，然后快速升壓，然后持續(xù)下降。黃樊南等[18]發(fā)現(xiàn)鉤藤堿具擴(kuò)張小血管功能且能拮抗激動(dòng)劑導(dǎo)致的血管收縮。Zhang等[19]使用大鼠離體動(dòng)脈血管模型，發(fā)現(xiàn)鉤藤堿和異鉤藤堿能顯著擴(kuò)張大鼠離體動(dòng)脈血管，同時(shí)對(duì)于KCL誘導(dǎo)的動(dòng)脈血管收縮的拮抗作用，鉤藤堿和異鉤藤堿具有相近的抑制作用。此外，在中醫(yī)臨床治療頑固性高血壓(Resistant or Refractory hypertension, RH)中，鉤藤多是和其它中藥關(guān)聯(lián)用藥[20]。劉大勝等[21]對(duì)文獻(xiàn)中的中藥多藥物進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析(設(shè)定最小支持度為0.05，最小置信區(qū)間為0.1，最小提升度為1)，得到RH中藥用藥關(guān)聯(lián)圖如圖3，其結(jié)果表明牛膝、鉤藤、茯苓等與其它藥物之間關(guān)聯(lián)度較高。

圖3 頑固性高血壓(Resistant or Refractory Hypertension, RH)多味中藥關(guān)聯(lián)分析圖

另外，鉤藤具有鎮(zhèn)靜和抗癲癇作用。Hsieh等[22]研究發(fā)現(xiàn)，鉤藤生物堿類成分(如鉤藤堿和異鉤藤堿)能抑制大鼠的中樞神經(jīng)多巴胺(DA)，從而提高其高香草酸(HVA)和3,4-二羥苯乙酸(DOPAC)水平，進(jìn)而抑制運(yùn)動(dòng)反應(yīng)。鉤藤堿和異鉤藤堿能顯著抑制神經(jīng)突觸傳遞，在大鼠致癇模型中能表現(xiàn)出明顯的抗癲癇作用。鉤藤堿具有抗血小板聚集和抗血栓作用。陳長(zhǎng)勛等[23]在大鼠靜脈注射鉤藤堿10～20 mg/kg，發(fā)現(xiàn)其能明顯抑制花生四烯酸(AA)、膠原和腺苷二磷酸鈉鹽(ADP)誘導(dǎo)的血小板聚集；鉤藤堿還能明顯降低ADP或膠原合并腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠模型肺血栓死亡率。此外，鉤藤還具有抗腫瘤活性。Zhang等[24]發(fā)現(xiàn)，鉤藤總堿可逆轉(zhuǎn)口腔上皮多藥耐藥癌細(xì)胞KBv200對(duì)長(zhǎng)春新堿的耐藥性；Muhammad等[25]表明，麗葉堿(Uncarine D)對(duì)腫瘤細(xì)胞如SK-MEL，KB，BT-549以及SK-OV-3具有細(xì)胞毒性；翅果定堿(Uncarine C)對(duì)卵巢癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒性。鉤藤還具有消炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、利尿等其它藥理作用[26]。

2 鉤藤的毒性作用

2.1 鉤藤?gòu)?fù)方制劑及其其它劑型的毒性作用 劉麗春等[27]以復(fù)方杜仲片(主要成分是杜仲和鉤藤)進(jìn)行急性毒性和長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠對(duì)復(fù)方杜仲片灌胃給藥的最大耐受量為35.6 g/kg，約為臨床劑量的200倍且未見(jiàn)主要臟器組織有異常；大鼠對(duì)臨床劑量的60倍為高劑量組連續(xù)給藥14 d可見(jiàn)總膽紅素和總膽固醇有下降，停藥15 d后恢復(fù)在正常值范圍。復(fù)方杜仲片的配伍減毒方面，陳有軍等[28]以水解酪蛋白粉配伍復(fù)方杜仲片進(jìn)行小鼠最大給藥體積灌胃的14 d急毒實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明兩者配伍的急毒組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。此外，王盟等[29-30]以鉤藤總堿為主要成分研制的鉤藤總堿緩釋滴丸，進(jìn)行小鼠14 d急毒實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)鉤藤總堿緩釋滴丸的LD50=1900.7 mg/kg，95%的可信區(qū)間為1651.8～2167.9 mg/kg；然后進(jìn)一步進(jìn)行大鼠連續(xù)給藥12周停藥2周的長(zhǎng)毒實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果為80 mg/kg的高劑量組大鼠可見(jiàn)ALT，AST和ALP升高，肝臟臟體比升高，鏡下可見(jiàn)肝臟部分出現(xiàn)變性和灶狀壞死，提示長(zhǎng)期給藥可產(chǎn)生肝毒性。此外，王盟等[31]利用納米技術(shù)以鉤藤堿為主要成分制成鉤藤堿固體脂質(zhì)納米粒，其急毒實(shí)驗(yàn)表明鉤藤堿固體脂質(zhì)納米粒的LD50=2125.5 mg/kg，95%的可信區(qū)間為2019.2～2231.6 mg/kg；大鼠連續(xù)給藥12周的長(zhǎng)毒實(shí)驗(yàn)表明鉤藤堿固體脂質(zhì)納米粒各劑量組大鼠均無(wú)明顯異常。張密等[32]將半夏生物總堿和鉤藤生物總堿按照1∶4，1∶1和4∶13個(gè)配比分別進(jìn)行小鼠急毒實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)上述3個(gè)配比的LD60=2.304 mg/kg，LD40=2.304 mg/kg和LD50=3.888 mg/kg，表明其中4∶1配比的減毒作用明確。

2.2 鉤藤單體及其化學(xué)成分的毒性作用 鉤藤的生物堿類物質(zhì)是其主要的毒性物質(zhì)基礎(chǔ)。王盟等[29]進(jìn)行小鼠口服灌胃鉤藤總堿的急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠灌胃鉤藤總堿的LD50為649.85 mg/kg，95%置信區(qū)間為549.45～768.59 mg/kg。吳二兵等[33]發(fā)現(xiàn)，小鼠灌胃鉤藤總堿的LD50=(630.9±118.1)mg/kg，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物毒性表現(xiàn)為活動(dòng)減少，全身軟弱無(wú)力，耗食量降低，藥后約 24 h 恢復(fù)正常。劉遂庫(kù)[34]對(duì)小鼠腹腔注射和皮下注射鉤藤堿的LD50分別是162.3 mg/kg和165 mg/kg， 同時(shí)靜脈注射的LD50為105 mg/kg。另外，異鉤藤堿和毛鉤藤堿對(duì)小鼠腹腔注射的LD50分別是217 mg/kg和110 mg/kg；對(duì)小鼠靜脈注射的LD50分別為80 mg/kg和35 mg/kg[34-35]。

國(guó)內(nèi)外對(duì)于鉤藤生物堿的毒性作用的機(jī)制研究涉及較少，目前研究表明，鉤藤總堿的毒性作用機(jī)制涉及肝臟系統(tǒng)。姜慶城[36]在大鼠連續(xù)口服灌胃12周的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)中，分別設(shè)定鉤藤總堿水溶液的低中高劑量為2.5 mg/kg，10 mg/kg和15 mg/kg，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鉤藤總堿各劑量組的肝功指標(biāo)ALT，AST水平均高于對(duì)照組且呈劑量相關(guān)性，表明鉤藤總堿對(duì)大鼠肝臟具有一定損傷作用。王曉聰?shù)萚37]進(jìn)行大鼠連續(xù)口服灌胃鉤藤總堿(低中高劑量分別3.5 mg/kg，9 mg/kg和14 mg/kg)10周的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果表明，高劑量組肝臟指數(shù)( 46.28±2.98)和ALT指數(shù)(293.14±41.58) 均明顯高于對(duì)照組肝臟指數(shù) (28.47 ± 3.55)和ALT指數(shù)(152.14 ±11.25)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) ，提示鉤藤總堿具有肝毒性。另外，張榮梅等[38]用濃縮梔子和黃芩水煎液治療鉤藤總堿誘導(dǎo)的大鼠肝損傷，結(jié)果表明梔子和黃芩水煎液可以抑制鉤藤總堿導(dǎo)致的AST,ALT升高及炎性損傷，具有拮抗鉤藤總堿肝毒性作用。鉤藤生物堿類的毒性作用除了累及肝臟系統(tǒng)外，也有研究報(bào)道其有累及神經(jīng)系統(tǒng)。Zhou等[39-40]和江明金等[41]發(fā)現(xiàn)，鉤藤堿在低濃度下是安全的，而高濃度具有一定的神經(jīng)毒性，其最大安全濃度為400 mol/L；同時(shí)鉤藤堿能持續(xù)上調(diào)NR1 mRNA的表達(dá)并具有濃度/時(shí)間依賴性，同時(shí)還能下調(diào)NR2B mRNA的表達(dá)并具有時(shí)間依賴性但不具有濃度依賴性，鉤藤堿上調(diào)神經(jīng)細(xì)胞核NR1蛋白表達(dá)，同時(shí)下調(diào)樹(shù)突干，樹(shù)突棘和軸突上NR2B蛋白表達(dá)，導(dǎo)致NR1/NR2B受體族數(shù)量水平下降，表明鉤藤堿可能是一種選擇性的非競(jìng)爭(zhēng)性NMDA受體抑制劑，而非選擇性NMDA受體拮抗劑的靶點(diǎn)作用與離子通道，存在嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)[42-43]。

3 結(jié)語(yǔ)

鉤藤是廣西壯族自治區(qū)在2021年確定的31種區(qū)域特色中藥材之一，有多種藥理作用，同時(shí)也存在肝毒性和神經(jīng)系統(tǒng)毒性。研究表明鉤藤主要活性成分有生物堿類，黃酮類，萜類，酯類以及其它成分，其毒性成分的研究主要集中在生物堿類成分上(如鉤藤堿)。目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)多采用整體動(dòng)物毒理學(xué)研究(主要大小鼠急毒和大小鼠長(zhǎng)毒等)表明，鉤藤生物堿類成分所具有肝毒性的毒性機(jī)制尚不明確，而其神經(jīng)毒性潛在的毒性機(jī)制可能為非選擇性NMDA受體拮抗劑的擴(kuò)大作用。值得注意的是，上述對(duì)于鉤藤肝毒性和神經(jīng)毒性大多是基于鉤藤堿單體得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所得。對(duì)于鉤藤其它成分中(如異鉤藤堿、黃酮類、萜類等)是否有獨(dú)特結(jié)果的毒性或者活性成分，以及其含量水平與所表現(xiàn)的活性或毒性是否成劑量相關(guān)性依然需要驗(yàn)證和探索。