江皓 張藝?yán)w

摘要：本次試驗(yàn)完成了大花君子蘭分化成苗的研究。結(jié)果表明，2，4-D 2mg/L+NAA 1mg/L+KT 2mg/L外植體愈傷誘導(dǎo)最好，分化培養(yǎng)NAA 0.5mg/L +6-BA2mg/L+ KT 1mg/L出苗效果最好，生根培養(yǎng)不需要添加植物激素。君子蘭組織培養(yǎng)的成功，意識(shí)著君子蘭工廠化的可行性，加速君子蘭行業(yè)的發(fā)展。

關(guān)鍵詞：大花君子蘭，組織培養(yǎng)，誘導(dǎo)，分化

大花君子蘭（Clivia miniata）是石蒜科植物。其植株有君子風(fēng)采，開花如蘭，所以有君子蘭的美稱。君子蘭花色一般為橘紅色?；?、葉并美。美觀，耐陰，大方，非常適合室內(nèi)擺設(shè)。其花朵常在冬春兩季以及圣誕節(jié)、元旦、春節(jié)期間開放，象征喜慶、吉祥、富貴，成為布置會(huì)場(chǎng)、裝飾廳堂、友情饋贈(zèng)的理想花卉，被譽(yù)為“花之君子”、“中國(guó)室內(nèi)花卉的皇后”。

目前君子蘭主要采用分株和播種繁殖，分株繁殖雖然可以保持母體的優(yōu)良性狀，但是效率極低，播種繁殖雖然可以大量繁殖，但是子代基因不確定性很大。而組織培養(yǎng)可以保持母體的優(yōu)良性狀并且可以快速的大量繁殖，現(xiàn)有的文獻(xiàn)在君子蘭初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和生根煉苗等方面開展了大量研究，如君子蘭組織培養(yǎng)多選擇花梗、子房、葉片、胚珠等作為外植體，基本培養(yǎng)基多選擇MS或1/2MS，初代培養(yǎng)誘導(dǎo)愈傷組織常用的激素為6-BA、2，4-D、NAA，也有選擇ZT等作為初代培養(yǎng)激素;，增殖分化培養(yǎng)基多為6-BA，KT，生根煉苗培養(yǎng)多采用1/2MS，降低細(xì)胞分裂素濃度，適當(dāng)添加NAA等生長(zhǎng)素即可取得較好的生根效果。但生產(chǎn)實(shí)際應(yīng)用時(shí)，現(xiàn)有的研究多集中在北方地區(qū)，且普遍反應(yīng)為誘導(dǎo)和增殖緩慢，增殖率低等問(wèn)題，工廠化育苗技術(shù)尚不成熟，有待在南方地區(qū)進(jìn)一步開展君子蘭工廠化育苗的各個(gè)環(huán)節(jié)研究，將組織培養(yǎng)技術(shù)作為君子蘭大量繁殖的主要途徑，進(jìn)一步擴(kuò)大君子蘭在南方年宵花的份額。

1.材料與方法

1.1供試材料

試驗(yàn)材料為大花君子蘭中‘和尚’品種，購(gòu)買自吉林長(zhǎng)春市，上盆養(yǎng)護(hù)于溫州科技職業(yè)學(xué)院南校區(qū)溫室大棚。試驗(yàn)采用大花君子蘭“和尚”的幼花上的花托作為實(shí)驗(yàn)所用外植體。

1.2試驗(yàn)方法

試驗(yàn)前先取外植體在流水下清洗30 min，然后在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行消毒。外植體先用75%乙醇浸泡15 s后用無(wú)菌水清洗四次后用1.5%次氯酸鈉溶液浸泡8 min，期間不停振動(dòng)。然后最用再用無(wú)菌水清洗四次，最后再用無(wú)菌濾紙吸干水分。然后將外植體切成適合大小（1cm × 1 cm）接種于MS培養(yǎng)基（4%蔗糖+0.6%瓊脂）。

1.2.1愈傷誘導(dǎo)

選取 NAA 和 2，4 - D，KT三種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，在外植體誘導(dǎo)愈傷階段生長(zhǎng)素用量較大，我們通過(guò)試驗(yàn)認(rèn)為2，4-D 2mg/L+NAA 1mg/L+KT 2mg/L，其中2，4-D有較好的促進(jìn)愈傷誘導(dǎo)的作用，但不宜過(guò)高，過(guò)高會(huì)抑制形態(tài)的發(fā)生。接種20天切口處開始產(chǎn)生黃白色蓬松的愈傷組織，之后降低2，4-D濃度至0.5mg/L后繼代，繼代一段時(shí)間后愈傷組織逐漸變?yōu)榕虼缶o實(shí)，這個(gè)時(shí)候就可以轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基。

1.2.2愈傷組織分化

將愈傷轉(zhuǎn)入含NAA0.5mg/L +6-BA2mg/L+ KT 1mg/L的MS培養(yǎng)基，之后會(huì)逐漸分化出芽。也有研究表明培養(yǎng)基中添加LH可以促進(jìn)芽的分化。

1.2.3壯苗生根

再生苗一部分在分化培養(yǎng)基中就開始生根，沒有在分化培養(yǎng)基上生根的再生苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基后大多數(shù)都會(huì)長(zhǎng)出根。生根培養(yǎng)基本培養(yǎng)基用1/2MS，加入0.01%的AC有利于生根，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)1/2MS含激素培養(yǎng)基與不含激素空白培養(yǎng)基結(jié)果差異不顯著。

1.2.4煉苗與移栽

再生苗經(jīng)煉苗后洗凈根部的培養(yǎng)基，種植到混合基質(zhì)上，混合基質(zhì)使大花君子蘭表現(xiàn)出較好的移栽效果，在混合基質(zhì)配比為泥炭：蛭石：珍珠巖：松樹皮=5：1：1：3，移栽一個(gè)月后幼苗開始生根，并且與母體相似度較高。

2.影響因素分析

2.1植物激素濃度影響

初代培養(yǎng)中，我們是在MS培養(yǎng)基中添加2，4-D、KT 、NAA生長(zhǎng)素可以誘導(dǎo)脫分化和促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)，2，4-D濃度不能過(guò)高，因?yàn)?，4-D用量過(guò)高時(shí)會(huì)抑制形態(tài)發(fā)生過(guò)程，對(duì)后期分化成苗有負(fù)面影響。細(xì)胞分裂素用量過(guò)高會(huì)抑制芽的分化，因此繼代培養(yǎng)加2mg/L 6-BA就可以，生根時(shí)則不需要添加任何激素。

2.2外植體的選擇

根據(jù)我們多次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于葉片，根而言，花托出愈率最高，而且污染率較低。取材較為容易，再生苗與母體相似度較高，而且不會(huì)對(duì)母株有傷害。所以用幼嫩花托作為外植體培養(yǎng)是最佳的選擇。

3 討論

君子蘭的組織培養(yǎng)中，選用幼嫩花托為外植體能保持親體優(yōu)良性狀的優(yōu)點(diǎn)，且能直接取材進(jìn)行培養(yǎng)。通過(guò)不同激素配比的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們優(yōu)化了君子蘭組織培養(yǎng)培養(yǎng)基，得到了一套較為理想的培養(yǎng)體系即愈傷誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為 MS +蔗糖 40 g/L +瓊脂 6g/L+ 2，4-D 2mg/L+NAA 1mg/L+KT 2mg/L;分化培養(yǎng)基為 MS + 蔗糖 40 g/L+瓊脂 6g/L + NAA 0.5mg/L +6-BA 2mg/L+ KT 1mg/L;生根培養(yǎng)基為 1/2 MS 培養(yǎng)基。

君子蘭產(chǎn)業(yè)大多集中在北方，而此次在南方進(jìn)行君子蘭離體繁殖的成功，為擴(kuò)大君子蘭在南方年宵花市場(chǎng)提供了有效的途徑。

君子蘭的不同品系的離體培養(yǎng)所需要的物質(zhì)，植物激素都各不相同，這一點(diǎn)還需要我們通過(guò)不斷試驗(yàn)進(jìn)一步地研究、探索。

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