姚巧珍

（內(nèi)鄉(xiāng)縣動物疫病預(yù)防控制中心，河南 內(nèi)鄉(xiāng) 474350）

虎紅平板凝集實驗是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡便、檢測快速的血清學(xué)檢測方法。常用于牛羊布魯氏菌病普查凈化的血清學(xué)監(jiān)測初篩。影響虎紅平板凝集實驗檢測結(jié)果的因素，主要是人員、設(shè)備、被檢樣品、操作、檢測環(huán)境這五種因素，作為一名合格的檢測人員應(yīng)對每一個檢測環(huán)節(jié)認(rèn)真分析，排除一切可能引起檢測結(jié)果不準(zhǔn)確的因素，使檢測的結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，為布魯氏菌病的普查凈化提供可靠服務(wù)。

在眾多的獸醫(yī)實驗室檢測方法中，虎紅平板凝集實驗是一種最簡單實用的檢測方法。該方法敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡便、檢測快速，常用于牛羊布魯氏菌病普查凈化的血清學(xué)監(jiān)測初篩。其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響布病凈化的進(jìn)度和普查效果，由于布病傳播的特殊性和危害性，漏檢一例將會導(dǎo)致全群凈化工作的延后甚至失敗，因此在監(jiān)測過程中一定要保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

1 虎紅平板凝集實驗檢測方法

首先準(zhǔn)備實驗材料，包括虎紅平板凝集抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清（陰性血清由制標(biāo)單位提供，按說明書使用），新鮮、無明顯蛋白凝塊、無溶血和無腐敗氣味的被檢血清，標(biāo)準(zhǔn)的一次性反應(yīng)板，50 μl 或100 μl 的單道移液器,供攪拌用的混合棒。然后進(jìn)行實驗檢測，實驗前，先將血清和抗原在室溫下放置30 min；再將反應(yīng)板上標(biāo)記被檢血清號，然后加相應(yīng)被檢血清30 μl；接著在被檢血清旁滴加虎紅平板凝集抗原30 μl；再用混合棒攪拌血清和抗原，使之充分混合，在5 min內(nèi)觀察結(jié)果。要求每次試驗應(yīng)設(shè)陰、陽性血清對照，最后進(jìn)行結(jié)果判定。在陰、陽性血清對照成立的前提下，對被檢血清進(jìn)行判定：受檢血清在3～4 min 內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者即判為陽性（+），無凝集現(xiàn)象呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。

2 影響虎紅平板凝集實驗結(jié)果的幾種因素

2.1 人員的不規(guī)范操作導(dǎo)致實驗結(jié)果的不準(zhǔn)確

在整個檢測過程中，檢測員起著關(guān)鍵性的主導(dǎo)作用，實驗室的檢測能力很大程度上取決于人員的業(yè)務(wù)素質(zhì)和工作能力，人員不規(guī)范的操作直接影響檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.2 使用不合格的設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、實驗材料導(dǎo)致實驗結(jié)果的不準(zhǔn)確

儀器設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、實驗材料是實驗室開展檢測工作所必需的重要資源，也是保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確的基礎(chǔ)。實驗室設(shè)備管理為監(jiān)測數(shù)據(jù)的代表性、準(zhǔn)確性、精密性、可比性和完整性提供了有力的基礎(chǔ)。如使用被污染的移液器，或未經(jīng)過校準(zhǔn)的移液器均會導(dǎo)致加樣時加樣量不準(zhǔn)確造成實驗結(jié)果的不準(zhǔn)確；使用過期、失效、沒有批準(zhǔn)文號的抗原也會導(dǎo)致實驗結(jié)果的不準(zhǔn)確；用不合格的反應(yīng)板也會導(dǎo)致實驗結(jié)果的不準(zhǔn)確。

2.3 被檢血清溶血或腐敗導(dǎo)致檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確

在整個檢測過程中，血清樣品的質(zhì)量直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。如使用溶血、腐敗的樣品均會導(dǎo)致結(jié)果的不準(zhǔn)確。

2.4 不按操作規(guī)程進(jìn)行操作導(dǎo)致檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確

如使用移液器不規(guī)范，加樣的量過多或過少，加樣時槍頭直接接觸樣品等不規(guī)范操作均會導(dǎo)致實驗結(jié)果的不準(zhǔn)確。

2.5 實驗室環(huán)境不達(dá)標(biāo)導(dǎo)致檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確

實驗室環(huán)境建設(shè)是實驗室的重要組成部分，是反映實驗室水平及實驗室實力的重要標(biāo)志，也是實驗室監(jiān)測能力必備的物質(zhì)基礎(chǔ)。實驗室受污染及溫濕度過高、過低，都會導(dǎo)致實驗檢測的結(jié)果不準(zhǔn)確。

3 確保實驗結(jié)果準(zhǔn)確應(yīng)采取的措施

3.1 檢測人員要持證上崗

實驗室檢測員是至關(guān)重要且是根本性的影響因素，因此實驗室應(yīng)對檢測技術(shù)人員進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)和考核，對培訓(xùn)活動及培訓(xùn)效果進(jìn)行有效評價，對培訓(xùn)中和已培訓(xùn)人員進(jìn)行適當(dāng)監(jiān)督。檢測人員必需持證上崗并定期進(jìn)行培訓(xùn)、考核、監(jiān)督。

3.2 儀器設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和實驗材料要符合檢測要求

儀器設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和實驗材料是實驗室開展檢測工作所必需的重要資源，也是保證檢測質(zhì)量獲取可靠數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)，直接決定了檢測結(jié)果的質(zhì)量。對儀器設(shè)備應(yīng)在采購、檢定、標(biāo)識、使用、維護(hù)、保養(yǎng)、期間核查等方面展開，以確保檢測結(jié)果的質(zhì)量。因此移液器要做好期間核查和定期校準(zhǔn)，做好維護(hù)和保養(yǎng)，每做完一次實驗，要求用酒精擦拭，預(yù)防移液器被污染。所用的實驗抗原有標(biāo)準(zhǔn)批號并按要求保存且要在有效期內(nèi)。實驗用的反應(yīng)板要求用標(biāo)準(zhǔn)的一次性布病專用反應(yīng)板。

3.3 血清樣品要保證質(zhì)量

血清樣品要求清亮、不溶血、不腐敗。采血時夏季溫度過高，采好的血在陽光下暴曬或劇烈震蕩均容易造成血清樣品腐敗和溶血。冬季溫度過低，血液分離不出血清會導(dǎo)致實驗結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在采樣結(jié)束時血清未凝固前不得劇烈震蕩，否則容易造成溶血。夏季避免陽光暴曬，當(dāng)天不能檢測的要及時放置在冰箱2～4℃保存，防止血清腐敗。冬春季氣溫過低時，保溫箱內(nèi)放入50℃的礦泉水瓶（內(nèi)裝溫水），采血后立即放入離心管架上，防止溶血，否則也會影響檢驗結(jié)果。

3.4 實驗操作要按照操作規(guī)范進(jìn)行

操作時一要設(shè)置對照組，方便判定結(jié)果和判定所用的抗原是否合格；二要懸空加樣并保證等量，抗原和血清均為30 μl；三是要求反應(yīng)時間為3～4 min。

3.5 實驗室檢測環(huán)境要符合實驗要求

實驗室必須是通過考核的BSL-2 級的實驗室，做到定期消毒，檢測時要求實驗室溫度在25℃左右，濕度要求在55%左右。

綜上所述，影響虎紅平板凝集實驗檢測結(jié)果的因素很多，作為一名合格的檢測人員應(yīng)對每一個檢測環(huán)節(jié)認(rèn)真分析，排除一切可能引起檢測結(jié)果不準(zhǔn)確的因素，使檢測的結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，為布魯氏菌病的普查凈化提供服務(wù)。