劉俊仙，劉 菁，陽太億，高軼靜，段維興，雷敬超，劉麗敏，劉紅堅，張榮華，何為中，李 松，熊發(fā)前 *

（1.廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究所，廣西 南寧530007；2.廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟作物研究所，廣西 南寧530007）

0 引言

【研究意義】甘蔗廣泛生長于熱帶和亞熱帶地區(qū)，不僅是世界上重要的糖料作物，也是我國重要的糖料作物、能源作物和經(jīng)濟作物，甘蔗產(chǎn)業(yè)對于保障國家蔗糖供給安全有著舉足輕重的作用。LTR逆轉(zhuǎn)座子具有普遍性、拷貝數(shù)豐富、高度異質(zhì)性和插入位點多態(tài)性，非常適合用來開發(fā)分子標(biāo)記。LTR逆轉(zhuǎn)座子常被用來開發(fā)S-SAP（特異擴增多態(tài)性）[1]、IRAP（逆轉(zhuǎn)座子位點間擴增多態(tài)性）[2]、REMAP（逆轉(zhuǎn)座子-微衛(wèi)星擴增多態(tài)性）[2]和RBIP（基于逆轉(zhuǎn)座子插入多態(tài)性）分子標(biāo)記技術(shù)[3]。而分離和鑒定LTR逆轉(zhuǎn)座子是開發(fā)分子標(biāo)記的前提。因此，克隆甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列具有重要意義。【前人研究進展】吳子鶯等[4]使用簡并引物成功分離了甘蔗屬大莖野生種60條Ty1-copia類逆轉(zhuǎn)座子逆轉(zhuǎn)錄酶序列。Raza等[5]根據(jù)文獻中報道的簡并引物以及跟Mutator（Mu）和Activator（Ac）有同源性甘蔗的EST設(shè)計的引物，利用PCR技術(shù)從當(dāng)?shù)馗收嵩耘喾NBL4中擴增并分離出甘蔗的Ty1-copia類LTR逆轉(zhuǎn)座子以及Mutator（Mu）和Activator（Ac）轉(zhuǎn)座子，表明這3類轉(zhuǎn)座子元件存在于甘蔗栽培種（BL4）基 因 組 中。Rossi等[6]利 用“transposable element”“transposase”“transposon”和“retrotransposon”為關(guān)鍵詞，以期望值低于e?50為搜索標(biāo)準(zhǔn)，搜索甘蔗EST數(shù)據(jù)庫，結(jié)果鑒定出276條跟轉(zhuǎn)座元件同源的序列，其中，DNA轉(zhuǎn)座子148條（54%）、逆轉(zhuǎn)座子128條（46%），逆轉(zhuǎn)座子中的Ty1-copia明顯多于Ty3-gypsy，沒有發(fā)現(xiàn)SINE、LINE和M ITE序列。Rossi等[7]經(jīng)過測序和比對從甘蔗EST數(shù)據(jù)庫中鑒定出34條類mudrA序列，序列系統(tǒng)進化分析揭示出在單子葉和雙子葉植物分化前植物界已經(jīng)存在著4大類類mudrA序列，且至少有3類存在于甘蔗的祖先種中，且每一大類中具有轉(zhuǎn)座活性的類mudrA序列成員的數(shù)目是變化的，所有結(jié)果表明甘蔗屬中存在著活性的Mu轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)。De A raujo等[8]從甘蔗EST數(shù)據(jù)庫中鑒定出276條跟植物轉(zhuǎn)座元件同源的EST序列，經(jīng)過cDNA全測序，68條甘蔗轉(zhuǎn)座子序列被指定為11個家族，表達分析顯示在同一個家族中的轉(zhuǎn)座子不同成員呈現(xiàn)不同的表達模式，沒有發(fā)現(xiàn)組織特異轉(zhuǎn)座子家族，愈傷組織是轉(zhuǎn)座子表達數(shù)量最大的組織，表明組織培養(yǎng)顯著影響了不同轉(zhuǎn)座元件的表達水平；De Jesus等[9]利用甘蔗EST數(shù)據(jù)庫鑒定出轉(zhuǎn)座子超家族hAT，并研究了它在甘蔗基因組中存在的多樣性。Nakayama[10]從甘蔗野生種Saccharum robustum中分離出一個新的tourist類M ITE轉(zhuǎn)座子，序列兩端有TIR和TSD，該序列在甘蔗屬基因組中呈現(xiàn)高拷貝數(shù)，在此基礎(chǔ)上開發(fā)出的IMP分子標(biāo)記技術(shù)可以厘清甘蔗屬6個野生種的親緣關(guān)系。Zhang等[11]綜合運用多種生物信息學(xué)分析軟件和分析策略鑒定了甘蔗屬96個BAC克隆序列中的各類轉(zhuǎn)座元件。Zhang等[12]發(fā)表了單倍體割手密AP85-441的基因組，長末端重復(fù)逆轉(zhuǎn)座子在基因組中占45.62%，其中，Ty1-copia和Ty3-gypsy分別占14.19%和26.04%?！颈狙芯壳腥朦c】目前，有關(guān)甘蔗LTR反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的研究鮮見報道。在國內(nèi)，尚未見甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列的克隆報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】克隆糖蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列，并進行序列特征分析，調(diào)查RT基因序列的組成和變異模式，分析與其他物種之間的系統(tǒng)進化關(guān)系，以期為下一步開發(fā)甘蔗LTR逆轉(zhuǎn)座子的分子標(biāo)記奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料甘蔗品種為國內(nèi)種植面積最大的糖蔗品種新臺糖22。

1.2 甘蔗基因組DNA提取

甘蔗基因組DNA的高質(zhì)量提取采用筆者先前建立的改良CTAB法[13]進行。

1.3 甘蔗RT基因擴增

甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因的PCR擴增參照前人設(shè)計的簡并引物進行，上下游引物分別為：Gyrt1：5′-AGMGRTATGTGYGTSGAYTAT-3′和Gyrt2：5′-CAMCCMRAAMWCACAM TT-3′，其中，R=A/G，Y=C/T，M=A/C，S=C/G，W=A/T，N=A/T/C/G[14]。PCR擴增體系、擴增程序以及PCR產(chǎn)物的分離檢測參考文獻[15]的方法進行。

1.4 目的片段的克隆和測序

目的片段的克隆和測序參考文獻[15]的方法進行。

1.5 甘蔗RT基因序列分析

序列同源性檢索、序列統(tǒng)計分析、序列圖及Logo圖生成、蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)預(yù)測、蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)角數(shù)和氫鍵數(shù)統(tǒng)計、保守基序預(yù)測等參考文獻[16]的方法進行；運用MEGA6.0軟件的鄰接法（No.of differences模型）構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，自展值設(shè)置為1 000；與甘蔗EST數(shù)據(jù)庫比對，鑒定具有轉(zhuǎn)錄活性的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子。

2 結(jié)果與分析

2.1 甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列的分離

根據(jù)Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因的保守區(qū)域設(shè)計簡并引物對，擴增結(jié)果顯示，在新臺糖22中檢測到了Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因，長度約為430 bp（圖1），表明Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子存在于甘蔗品種新臺糖22的基因組DNA中。對擴增得到的目的片段進行克隆和測序，共獲得42條序列，利用DNAMAN軟件去除其中的相同序列，利用NCBI中的blastx和blastn與已報道的其他植物的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列進行比對，去除非RT基因序列，總共獲得36條RT基因序列，對每條序列進行命名（SoRT3-X），GenBank登錄號對應(yīng)MK830281～MK830316（表1）。對36條序列進行多重比對并生成Logo圖，以展示堿基在每個位置上的保守性（圖2～3）。

圖1 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因的PCR擴增Fig.1 PCR am p lification of RT of Ty3-gypsy-like retrotransposons

圖2 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列多重比對Fig.2 M ultip lealignm ent of RT of Ty3-gypsy-like retrotransposons

2.2 甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列的相似性分析

分析發(fā)現(xiàn)，只有SoRT3-26的序列長度為430 bp，其余序列長度均為432 bp。SoRT3-26相較于其他序列在第212、213、281個位點處各缺失了1個堿基，但在第253個位點處多出了1個堿基C。36條序列的A、T、C、G變化范圍分別為111～135、114～155、49～93和87～110，AT所占比為56.71%～64.81%，AT與GC比值為1.31～1.84（表1）。核苷酸序列間相似性為46.2%～99.3%，其中，SoRT3-26與SoRT3-31的相似性最低，為46.3%，SoRT3-11與SoRT3-44的相似性最高，達99.3%；氨基酸序列間相似性為10.1%～100.0%（表略）。

表1 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列的基本信息Table 1 Basic inform ation on RT geneof Ty3-gypsy-like retrotransposons

2.3 甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列的聚類分析

遺傳進化樹結(jié)果顯示，36條甘蔗RT基因序列被分為5個家族（Ⅰ～Ⅴ），其中，家族Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ分別包含11、5、3、16條序列，家族Ⅴ只包含SoRT3-26，家族Ⅴ與其他家族遺傳距離最大，親緣關(guān)系最遠，單獨聚為一類（圖4）。

圖4 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列遺傳進化樹Fig.4 Phylogenetic tree of RT of Ty3-gypsy-like retrotransposons

2.4 甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因的氨基酸序列分析和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析

將36條RT基因序列翻譯成氨基酸序列后，序列多重比對結(jié)果顯示，所克隆序列符合Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列特征（圖5）。36條序列中有6條發(fā)生了1～6個無義突變，其中，SoRT3-9（第48個氨基酸處）、SoRT3-22（第50個氨基酸處）、SoRT3-31（第65個氨基酸處）和SoRT3-47（第126個氨基酸處）各發(fā)生了1個無義突變，SoRT3-28分別在第13、31、49、77個氨基酸處發(fā)生了4個無義突變，且這4個無義突變都集中在序列的上游部分，SoRT3-26發(fā)生了6個無義突變，分別在第23、80、93、97、105、125個氨基酸處，造成無義突變的原因是SoRT3-26在第212、213、281這3個位點各丟失了1個堿基，但在第253個位點多出了1個堿基C。剩余30條序列沒有發(fā)生無義突變，這些序列可能仍具有轉(zhuǎn)錄活性。

圖5 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因氨基酸序列的多重比對Fig. 5 M ultip le alignment of am ino acid sequencesof RT of Ty3-gypsy-like retrotransposons

圖3 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列比對logoFig.3 A lignm ent logo of RT of Ty3-gypsy-like retrotransposons

根據(jù)核苷酸聚類分析結(jié)果，選擇各家族中的代表序列，利用Phyre2預(yù)測其蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)，圖6為家族Ⅰ中代表序列SoRT3-21的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)，代表序列蛋白三級結(jié)構(gòu)匹配覆蓋度最高的模板為c2opqA和c3kk1B，置信度均為100，屬于逆轉(zhuǎn)錄酶家族。二級結(jié)構(gòu)包含5～6個α-螺旋和8～9個β折疊；三級結(jié)構(gòu)包含12～19個轉(zhuǎn)角和76～94個氫鍵，還包含5個明顯的螺旋結(jié)構(gòu)和5個明顯的折疊結(jié)構(gòu)（表2），說明螺旋結(jié)構(gòu)和折疊結(jié)構(gòu)存在大量結(jié)構(gòu)元件（藍色端是C端，紅色端是N端）。

表2 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)信息Table2 RT protein structure of Ty3-gypsy-like retrotransposons

圖6 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)（A）與三級結(jié)構(gòu)（B）Fig.6 Secondary (A)and tertiary (B)protein structuresof RT of Ty3-gypsy-like retrotransposon

2.5 甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因保守基序預(yù)測

RT基因序列保守基序預(yù)測結(jié)果顯示，36條序列共存在8種保守基序，其中，34條序列同時包含4種保守基序（motif 1、motif 2、motif 3和motif 4），SoRT3-28和SoRT3-26與上述34條序列差異明顯（圖7）。

圖7 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因保守基序預(yù)測Fig.7 Predicted conservative motifs of RT of Ty3-gypsy-like retrotransposons

2.6 甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列的系統(tǒng)進化樹構(gòu)建

為了解甘蔗與其他植物Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列間的進化關(guān)系，將甘蔗品種新臺糖22與其他植物的RT基因氨基酸序列進行多重比對，進而構(gòu)建系統(tǒng)進化樹（表3、圖8）。從系統(tǒng)進化樹上可以看出，所有甘蔗RT基因序列被分為7類（Ⅰ～Ⅶ），其中，Ⅰ類中的18條甘蔗RT基因序列與擬南芥的BAB40828.1具有較高同源性，Ⅱ類只含有16條甘蔗RT基因序列，Ⅰ和Ⅱ兩大類中共分布著34條甘蔗RT基因序列（94.44%），表明甘蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列具有相當(dāng)高的保守性與相似性。Ⅲ類只有1條來自列當(dāng)（ABD43042.1）的RT基因序列，Ⅳ類和Ⅴ類中都是來自其他物種植物的RT基因序列，SoRT3-28單獨聚為Ⅵ類，SoRT3-26與大豆的BAB40834.1、菠菜的BAB40833.1、粳稻的BAB40824.1一起聚為Ⅶ類。

圖8 甘蔗與部分其他物種植物Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因的氨基酸序列系統(tǒng)進化樹Fig.8 Phylogenetic tree of am ino acid sequences of RT of Ty3-gypsy-like retrotransposons from sugarcane and some other plant species

表3 部分其他物種植物的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列信息Table 3 Am ino acid sequences of RT of Ty3-gypsy-like retrotransposons from som eother p lant species

2.7 甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)錄活性分析

將36條甘蔗品種新臺糖22中Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列提交到NCBI與甘蔗EST數(shù)據(jù)庫進行比對，以檢測甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果顯示，當(dāng)查詢覆蓋度分別為87%、87%、87%、85%、86%、86%時，SoRT3-9、SoRT3-21、SoRT3-22、SoRT3-27、SoRT3-29、SoRT3-34與甘蔗EST數(shù)據(jù)庫中的GE325024.1和GE325034.1之間的一致性分別為91.25%、94.96%、92.84%、93.53%、93.33%、84.27%；當(dāng)查詢覆蓋度分別為99%、99%、97%、99%時，SoRT3-23、SoRT3-35、SoRT3-36、SoRT3-41與甘蔗EST數(shù)據(jù)庫中的CA177106.1之間的一致性分別為90.26%、89.10%、88.57%、89.10%；當(dāng)查詢覆蓋度均為97%時，SoRT3-23、SoRT3-35、SoRT3-41與甘蔗EST數(shù)據(jù)庫中的CA203336.1之間的一致性分別為88.15%、86.76%、86.49%（表4）。以上結(jié)果說明GE325024.1、GE325034.1、CA177106.1、CA203336.1這4條EST序列為甘蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子的部分轉(zhuǎn)錄序列。

表4 Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列與EST數(shù)據(jù)庫比對結(jié)果Tab le 4 Sequence alignm ent w ith EST database on RT of Ty3-gypsy-like retrotransposons

3 討論與結(jié)論

本研究首次從甘蔗品種新臺糖22中擴增出約430 bp大小的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因目的條帶，與前人研究結(jié)果一致[14,17?21]。目的條帶經(jīng)回收、克隆和測序后，得到了42條序列，去除非RT基因序列和相同序列后，總共獲得了36條甘蔗RT基因序列。以上說明Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子存在于甘蔗品種新臺糖22中，當(dāng)然也證實了采用簡并引物從甘蔗品種新臺糖22中擴增和克隆Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列的策略是行之有效的。

在36條甘蔗RT基因序列中，除SoRT3-26的序列長度為430 bp外，其余序列長度均為432 bp，表明甘蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列在長度變化上高度保守，這與前人研究結(jié)果不太一致[19,21]；所有序列均富含AT，A/T堿基含量的增加使序列呈現(xiàn)一定異質(zhì)性；核苷酸序列間相似性呈現(xiàn)較高異質(zhì)性；氨基酸序列間相似性呈現(xiàn)高度異質(zhì)性；相比核苷酸序列，氨基酸序列表現(xiàn)出更高異質(zhì)性；除SoRT3-28和SoRT3-26外，各序列間保守基序完全一致，呈現(xiàn)高度保守性；在36條甘蔗RT基因序列當(dāng)中，有6條發(fā)生了無義突變，最多的1條出現(xiàn)了6個終止密碼子，無義突變會使得基因功能改變或喪失，無義突變是甘蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子產(chǎn)生一定異質(zhì)性和多拷貝的重要原因。

聚類分析將36條RT基因序列分為5個家族，家族Ⅰ和家族Ⅳ是構(gòu)成新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子的主要成分，表明新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列具有相當(dāng)高的保守性與相似性。各家族內(nèi)部成員數(shù)量越多，序列相似性越高，存在有轉(zhuǎn)錄活性的逆轉(zhuǎn)座子的可能性也越大，其轉(zhuǎn)座發(fā)生時間也可能越近[22]。家族Ⅰ和家族Ⅳ中很有可能存在著具有轉(zhuǎn)錄活性的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子，這兩個家族存在的歷史也更為久遠。

各家族中代表序列的蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)整體構(gòu)型基本類似，但在氫鍵數(shù)和轉(zhuǎn)角數(shù)上存在著較大差別，家族Ⅴ中的SoRT3-26，其存在6個終止密碼子突變，可能已經(jīng)失去活性，核苷酸聚類分析中顯示其與其他家族遺傳距離最遠，在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上的表現(xiàn)也與其他代表序列存在明顯差異，其氫鍵數(shù)和轉(zhuǎn)角數(shù)要明顯少于其他代表序列，這也表明甘蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子存在一定異質(zhì)性和多態(tài)性，這些差異可能會影響到甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)錄活性、轉(zhuǎn)座效率以及拷貝數(shù)等。

36條中的34條同時包含motif 1、motif 2、motif 3和motif 4，占克隆序列總數(shù)的94.44%，說明這4種保守基序是構(gòu)成甘蔗品種新臺糖22中Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列的主要成分，也從保守基序角度表明甘蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列具有高度保守性與相似性。只有2條甘蔗RT基因序列的保守基序在種類及長度上與上述34條甘蔗RT基因序列存在明顯差異，SoRT3-28存在5種保守基序，其下游的motif 2與上述34條甘蔗RT基因序列的motif 2一致，SoRT3-26也存在5種保守基序，其上游的motif 3與上述34條甘蔗RT基因序列的motif 3一致，推測這兩個保守基序是決定這2條序列為甘蔗RT基因序列的重要原因，這兩條甘蔗RT基因序列在系統(tǒng)進化樹中也是被劃分為與其他家族親緣關(guān)系最遠的家族Ⅵ和Ⅶ，也從側(cè)面驗證了這兩條甘蔗RT基因序列含有不同保守基序的準(zhǔn)確性。

系統(tǒng)進化樹顯示，Ⅰ類中的18條甘蔗RT基因序列與擬南芥的BAB40828.1具有較高相似性，親緣關(guān)系較近；SoRT3-26由于發(fā)生了多個終止密碼子突變而導(dǎo)致其在核苷酸聚類分析中與其他序列遺傳距離最大而單獨為一家族，但在系統(tǒng)進化樹中發(fā)現(xiàn)其與大豆的BAB40834.1、菠菜的BAB40833.1和粳稻的BAB40824.1之間的遺傳距離最小而聚為Ⅶ類。以上可能是甘蔗Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子在進化過程中與這些物種植物發(fā)生過橫向傳遞。除SoRT3-26外，SoRT3-28也與其他甘蔗RT基因序列遺傳距離較大，親緣關(guān)系較遠，說明這兩條序列特異性比較強，在起源和進化上較為古老，可能是甘蔗所特有的。

通過比對甘蔗EST數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)10條甘蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列與4條甘蔗EST序列相似性高，且1條甘蔗RT基因序列有時同時與幾條甘蔗EST序列相似性高，表明甘蔗中存在可轉(zhuǎn)錄的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子，下一步可以對這些有轉(zhuǎn)錄活性的Ty3-gypsy逆轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)錄特性和功能進行深入詳細研究。

本研究首次分離出36條甘蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子RT基因序列，并對其序列特征及多樣性進行詳細分析，進行聚類分析和系統(tǒng)進化樹構(gòu)建，進一步發(fā)現(xiàn)了10條具有轉(zhuǎn)錄活性的甘蔗品種新臺糖22的Ty3-gypsy類逆轉(zhuǎn)座子，這些為基于LTR逆轉(zhuǎn)座子的甘蔗分子標(biāo)記開發(fā)和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。