陳貞明

（福建片仔癀化妝品有限公司，福建漳州，363000）

蔓荊子（Vitex trifoliaL.）是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，為馬鞭草科植物單葉蔓荊的果實(shí)，在最早的藥學(xué)專(zhuān)著《神農(nóng)本草經(jīng)》就有所記載。主要產(chǎn)于我國(guó)山東、江西、浙江等地。秋季果實(shí)成熟，曬干、去凈雜質(zhì)作為臨床中藥使用，味辛，苦，性微寒，能疏散風(fēng)熱，清利頭目。單葉蔓荊的化學(xué)成分主要是黃酮類(lèi)、二萜類(lèi)、木脂素類(lèi)、環(huán)烯醚萜類(lèi)等，其中黃酮類(lèi)含量最高［1］。單葉蔓荊中的黃酮類(lèi)成分具有抑菌活性、抗炎活性，可鎮(zhèn)痛、舒張血管等；二萜類(lèi)成分具有抗氧化活性、細(xì)胞毒活性等，還有一些其他化學(xué)成分的功效也逐步得到研究。因此，單葉蔓荊具有較廣泛的藥理作用，具有解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、降血糖［2-5］等作用。

蔓荊子黃素屬于多甲氧基黃酮類(lèi)化合物，是單葉蔓荊的主要黃酮類(lèi)成分，具有抗腫瘤、抗炎、舒張血管、抑菌等作用［6-9］。蔓荊子黃素在干燥成熟果實(shí)中含量最高，比干燥葉片含量高約40%［10］；不同的炮制方法對(duì)藥材中蔓荊子黃素的含量也有所影響，其中酒浸烘制可使其含量最高［11］。相關(guān)文獻(xiàn)指出，生品蔓荊子經(jīng)過(guò)炮制后黃酮類(lèi)成分含量有所下降，水溶性浸出物增加，除了參考蔓荊子黃素含量，還應(yīng)結(jié)合高效液相色譜法或其他方法反映蔓荊子炮制質(zhì)量，進(jìn)一步揭示蔓荊子的炒制科學(xué)內(nèi)涵［12］。

1 儀器與材料

1.1 試驗(yàn)儀器

Waters e2695 高效液相色譜儀（美國(guó)Waters 公司）；UTP-313 型電子天平（上?；ǔ彪娖饔邢薰荆籏Q—210A 型超聲波清洗儀器（昆山市超聲儀器有限公司）；FSJ-A03D1 小型粉碎機(jī)（小熊電器股份有限公司）；RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器（蘇州賽恩斯儀器有限公司）；SHB-IIIA 循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）

1.2 試驗(yàn)材料

蔓荊子（亳州市弘寶堂商貿(mào)有限公司）；蔓荊子黃素對(duì)照品（分析標(biāo)準(zhǔn)品≥99.5%，阿拉丁）；甲醇（北京生化科技有限公司）；乙腈（北京生化科技有限公司）；乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司）

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

采用乙醇回流法提取蔓荊子中蔓荊子黃素。準(zhǔn)確稱(chēng)取100 g 蔓荊子藥材，放入小型粉碎機(jī)粉碎。料液比1∶15，分兩次提取，向圓底燒瓶中加入30%乙醇，置于電熱套連接冷凝器進(jìn)行熱回流提取，每次提取時(shí)間為3 h。提取后溶液放置室溫后過(guò)濾，3500 r/min離心15 min后抽濾，得到上清液即為蔓荊子提取液。將蔓荊子提取液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器減壓回收溶劑直至浸膏，放入真空干燥箱烘干后得到蔓荊子提取物。提取物中加入適量甲醇配置成0.1 mg/mL蔓荊子溶液，過(guò)0.22μm有機(jī)膜過(guò)濾備用。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取蔓荊子黃素對(duì)照品適量，加甲醇定容至25 mL 棕色量瓶中，搖勻，制得質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的蔓荊子黃素儲(chǔ)備液。

2.3 色譜條件

色譜柱選擇 Aglient C18 柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-體積分?jǐn)?shù)0.05%磷酸（體積比70∶30）。檢測(cè)波長(zhǎng)為322 nm，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為20μL，柱溫為30 ℃。見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品色譜圖Fig.1 Chromatogram of reference substance

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察

將蔓荊子黃素母液稀釋成 12.5、25、50、100、200 μg/mL，精密吸取20 μL，按照2.3 項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析。以蔓荊子黃素進(jìn)樣的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并計(jì)算出蔓荊子黃素的線(xiàn)性回歸方程為Y = 1.42× 104X - 2.172×102，R2=0.9997。結(jié)果表明，蔓荊子黃素的濃度范圍在12.5～200μg/mL，其峰面積與進(jìn)樣的濃度具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。見(jiàn)圖2。

圖2 供試品色譜圖Fig.2 Chromatogram of test article

2.5 精密度考察

取供試品溶液，按色譜條件進(jìn)樣20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，記錄蔓荊子黃素的峰面積。計(jì)算蔓荊子黃素的RSD 為0.71%（n = 6），小于3.0%，表明該方法的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性考察

按2.2 項(xiàng)下方法新配制蔓荊子供試品溶液，室溫下放置，分別在 0、2、4、6、8、10、12 h 進(jìn)樣，記錄蔓荊子黃素的峰面積。計(jì)算蔓荊子黃素RSD為1.05%（n = 7），小于3.0%，結(jié)果表明本蔓荊子供試品溶液在12 h內(nèi)保持穩(wěn)定，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性考察

取蔓荊子粉末6 份，分別按2.2項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法配制溶液，按色譜條件進(jìn)行分析，記錄蔓荊子黃素的峰面積。計(jì)算蔓荊子黃素的RSD 為0.96%（n=6），小于3.0%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率測(cè)定

分別精密吸取2.2 項(xiàng)下蔓荊子黃素對(duì)照溶液2、2、3、3、4、4 mL，置于20 mL 容量瓶中，揮干，取 6 份已知含量的供試品溶液加入容量瓶中，加入甲醇溶液稀釋至刻度，取20 μL 分別注入高效液相色譜儀器中。按照色譜條件，測(cè)定蔓荊子黃素含量，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表一。

表1 蔓荊子黃素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Test results of sample recovery of vitexin

2.9 樣品含量測(cè)定

取3 批蔓荊子藥材，精密稱(chēng)定，按照2.2 項(xiàng)下制成供試品溶液，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算蔓荊子中蔓荊子黃素的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同編號(hào)蔓荊子樣品中蔓荊子黃素含量Table 2 Content of vitexin in Vitex trifolia samples with different numbers

3 討論

蔓荊子化學(xué)成分復(fù)雜，其黃酮類(lèi)、萜類(lèi)等主要成分在多個(gè)方面具有治療功效。通過(guò)對(duì)蔓荊子的化學(xué)成分進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)蔓荊子黃素對(duì)齒齦腫痛、目赤多淚、目暗不明、頭暈?zāi)垦５燃膊【哂忻黠@的治療作用，表明其臨床應(yīng)用具有很大的潛能性。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)高效液相色譜條件的優(yōu)化，得出了較好的蔓荊子黃素的出峰時(shí)間，并判斷出了在254 nm 處有最好的吸收效果，因此選擇254 nm作為高效液相色譜的檢測(cè)波長(zhǎng)。試驗(yàn)通過(guò)對(duì)蔓荊子黃素標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣，進(jìn)行梯度洗脫以確定試驗(yàn)中流動(dòng)相的大體比例，后采用等度洗脫對(duì)流動(dòng)相的比例進(jìn)行調(diào)整，進(jìn)一步選擇最適合于該試驗(yàn)的流動(dòng)相比例，來(lái)達(dá)到優(yōu)化的目的，使試驗(yàn)的結(jié)果更加準(zhǔn)確。