姜 偉，徐 聰，楚遵鋒，陳 偉，邢林林，孔祥華，劉 存，孫圣福

（1.龍口市動物疫病預防控制中心，山東龍口 265701；2.山東省動物疫病預防與控制中心，山東濟南 250100；3.濟南市動物疫病預防與控制中心，山東濟南 250102）

馬屬動物主要由家馬、驢、騾和斑馬組成[1]。我國養(yǎng)馬歷史悠久，長期以來，馬是重要的畜力和交通工具。隨著經(jīng)濟社會的發(fā)展，近年來馬的傳統(tǒng)役用和交通功能被機械逐步取代，養(yǎng)殖量逐漸減少，而與馬產(chǎn)業(yè)緊密相關(guān)的體育運動、休閑騎乘、文化旅游、專業(yè)化馬產(chǎn)品開發(fā)等新業(yè)態(tài)開始蓬勃發(fā)展[2]。驢產(chǎn)業(yè)是我國畜牧業(yè)中的重要產(chǎn)業(yè)之一。近年來驢役用價值也在不斷萎縮，而其商用價值快速上升，驢皮、驢肉等產(chǎn)品的市場需求快速增長，尤其是阿膠產(chǎn)品給驢產(chǎn)業(yè)帶來了新的活力[3]。山東省是養(yǎng)驢大省，規(guī)模化驢場超過200 個，存欄量超過100 萬頭。

馬傳染性貧血（equine infectious anemia，EIA），簡稱馬傳貧，是由反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬馬傳貧病毒引起的一種持續(xù)感染性疫病，可以感染馬、驢、騾等馬屬動物，臨床癥狀主要為發(fā)熱、貧血、黃疸、浮腫和消瘦[4]。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。非洲馬瘟（African horse sickness，AHS），是由非洲馬瘟病毒引起的一種急性或亞急性傳染病，主要表現(xiàn)為呼吸困難、體溫升高，病死率可達95%[5]，OIE 將其列為須通報動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。馬流行性感冒（equine influenza，EI），簡稱馬流感，是由正黏病毒科流感病毒屬馬A 型流感病毒引起的一種病毒性呼吸道傳染病，馬、驢、騾等馬屬動物對其均易感，主要表現(xiàn)為發(fā)燒、咳嗽、流鼻液和母畜流產(chǎn)，目前以H3N8 亞型為主[6]，OIE 將其列為須通報動物疫病，我國將其列為三類動物疫病。為了解山東省馬屬動物中上述3 種病毒疫病的流行狀況，2020 年對山東省部分馬屬動物養(yǎng)殖場進行了病原或抗體檢測，以期為山東省馬屬動物疫病防控提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品

2020 年11 月，選擇馬屬動物養(yǎng)殖比較密集的濟南、青島、聊城和德州等地市的養(yǎng)殖場，場群內(nèi)按照發(fā)現(xiàn)疫病的策略進行抽樣，設置信區(qū)間95%、試驗敏感性100%、預期流行率2%。在青島市的2個馬場（每場存欄約100 匹），每場隨機采75 匹馬的血清和全血樣品，共采集馬血清和全血樣品各150 份；在驢存欄數(shù)量較多的濟南、聊城和德州等地市，選擇存欄約1 000 頭的4 個場點，每個場點隨機選擇136 只，同時采集血清和全血樣品，共采集驢血清和全血樣品各544 份。

1.2 試劑

H3N8 亞型EI 血凝抗原、EIA 抗體ELISA 檢測試劑盒、AHS 病原熒光PCR 檢測試劑盒，均由動物用生物制品國家工程研究中心提供；核酸提取試劑盒，由Roche 公司提供；0.016 mol/L 的過碘酸鉀，由本實驗室配制。

1.3 檢測與結(jié)果判定

1.3.1 EIA 采用ELISA 方法檢測抗體，按照試劑盒說明書進行。檢測為陽性，判定該份樣品為陽性，有1 份及以上陽性樣品的場，判定為陽性場。

1.3.2 AHS 采用熒光PCR 方法進行病原檢測。將全血樣品，采用核酸提取試劑盒提取核酸，然后用AHS 病原熒光PCR 檢測試劑盒進行擴增和檢測。檢測為陽性，判定該份樣品為陽性，有1 份及以上陽性樣品的場，判定為陽性場。

1.3.3 H3N8 亞型EI 采用HI 方法進行H3N8 亞型抗體檢測。向待檢血清中加入2 倍體積新配制的0.016 mol/L 過碘酸鉀溶液，置于（22±2）℃作用15 min；之后加入與血清等體積的含3%甘油的PBS，以中和過剩的過碘酸溶液，混合后置于（22 ±2）℃作用15 min；最后，在56 ℃水浴中滅活30 min，采用1%雞紅細胞進行HI 試驗。被檢樣品HI 效價≤3log2，判為陰性；HI 效價=4log2，判為可疑，進行重檢，若重檢效價≥4log2，判為陽性，≤3log2，判為陰性；HI 效價≥5log2，判為陽性。有1份及以上陽性樣品的場，判定為陽性場。

2 結(jié)果

對采集的694 份血清樣品進行EIA 抗體檢測，結(jié)果全部為陰性。對采集的694 份全血樣品進行AHS 病原檢測，結(jié)果全部為陰性。

對采集的639 份樣品（去除不合格樣品55 份）進行H3N8 亞型EI 抗體檢測，結(jié)果在6 個場點均檢測到陽性樣品，場群陽性率為100%；檢出520份血清陽性樣品，樣品陽性率為81.38%（520/639）。其中：147 份馬血清樣品中檢出126 份陽性，樣品陽性率為85.71%；492 份驢血清樣品中檢出394份陽性，樣品陽性率為80.08%。詳見表1。

表1 H3N8 亞型EI 抗體檢測結(jié)果

3 分析與討論

本次馬屬動物主要病毒性疫病調(diào)查涉及6 個場點，采樣動物均未接種過所調(diào)查疫病的疫苗，因此檢出陽性即為感染。檢測結(jié)果顯示，EIA 和AHS 均為陰性，而H3N8 亞型EI 群體陽性率和樣品陽性率分別為100%和81.38%，說明H3N8 亞型EI 在這些場點流行普遍，感染率高。

EIA 曾遍及全世界，給養(yǎng)馬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失。近年來，在國外尤其是歐美國家有流行范圍擴大的趨勢，我國周邊的日本、蒙古國和印度，也有發(fā)生EIA 的報道[7]。雖然目前我國已經(jīng)接近消滅該病，但國外日趨嚴峻的疫情形勢和頻繁的國際交流給該病防控提出了更高的要求。

2020 年3 月底，泰國多次向OIE 通報發(fā)生AHS 疫情，最近的疫點距離我國邊境不足800 km，再加上該病可經(jīng)蚊蟲叮咬傳播，使我國防控壓力增大。目前該病無有效治療藥物，主要通過染疫馬匹撲殺、同群馬匹緊急免疫和蚊蟲殺滅等策略進行綜合防控，同時進行馬屬動物AHS 監(jiān)測。

EI 在世界許多國家廣泛存在，我國許多地區(qū)也存在著不同程度的感染[8-9]。從本次調(diào)查的結(jié)果看，所有的場點均監(jiān)測到抗體陽性，樣品陽性率在80%以上，說明EI 流行比較嚴重，流行較為普遍。

由于項目采樣的局限性，僅采集了6 個場點，場點數(shù)量偏低，檢測結(jié)果不能代表全省馬屬動物疫病的實際狀況，僅能從側(cè)面了解全省的基本情況。今后應結(jié)合國內(nèi)外馬屬動物疫情形勢，在全省加強馬屬動物疫病監(jiān)測，尤其是要加強H3N8 亞型EI的監(jiān)測與防控。