荊 鶴，宋玉國

(北華大學附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132011)

橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto thyroiditis，HT)是一種由多種淋巴細胞共同參與的疾病，近幾年，其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢，多發(fā)于雌激素產(chǎn)生明顯變化的圍絕經(jīng)期女性，約為同年齡期男性的5～10倍[1-3].

淋巴細胞亞群是一類具有高度異質(zhì)性特點的細胞群體，B淋巴細胞的活化發(fā)生在淋巴結和脾臟等次級淋巴器官中，HT患者甲狀腺組織中的B淋巴細胞間接被激活，并在體外自發(fā)分泌抗甲狀腺抗體[4].NK細胞以調(diào)節(jié)ADCC反應為渠道，參與機體內(nèi)的免疫反應，從而導致甲狀腺功能衰竭.有研究[5]表明：NK細胞通過CD40-CD154相互作用的調(diào)節(jié)途徑誘導自體靜息狀態(tài)下的B細胞合成免疫球蛋白，并參與免疫球蛋白同種類型間的相互轉化.因此，HT患者血液中B細胞、NK細胞數(shù)量的不平衡和細胞活性不穩(wěn)定等特征對疾病的發(fā)展進程產(chǎn)生了一定影響.

1 材料與方法

1.1 材 料

參照《內(nèi)分泌及代謝性疾病臨床診療指南》[6]中橋本氏甲狀腺炎診斷要點，并排除妊娠、感染等其他影響甲狀腺功能的因素，篩選圍絕經(jīng)期女性病例組42例，年齡40～56歲，平均(49.34±3.52)歲.同期健康女性對照組38例，年齡41～52歲，平均(44.72±4.71)歲，其甲狀腺功能正常，無其他病史.兩組均于空腹狀態(tài)下抽取靜脈血4 mL，分為非抗凝血和抗凝血各2 mL備用.

1.2 方 法

甲狀腺激素及相關自身抗體檢測：應用科美自動光激化學發(fā)光儀(LICA500)檢測血清中甲狀腺激素、超敏促甲狀腺激素、TPO抗體、TG抗體的含量.

雌激素定量檢測：應用達成AULIA200全自動化學發(fā)光儀檢測血清中雌二醇的含量.

T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞亞群檢測：每例標本分別標記3個試管，混勻抗凝血后分別向試管中加入50 μL標本全血，向1號試管加入CD3-PC5、CD4-PE、CD8-ECD熒光抗體各10 μL；向2號試管加入CD3-PC5、CD56-PE、CD19-ECD熒光抗體各10 μL；向3號試管加入CD3-PC5、CD4-FITC、CD25-PE熒光抗體各10 μL；分別放置振蕩器中混勻15 s，避光狀態(tài)下室溫孵育15 min.在持續(xù)振蕩下分別再向3個試管加入甲酸600 μL，10 s后加入260 μL碳酸鈉、氯化鈉、硫酸鈉混合溶液，繼續(xù)振蕩10 s.再分別加入0.9%濃度的生理鹽水3 mL，1 500 r/min離心5 min，吸棄試管內(nèi)上清液.依次再加入0.9%生理鹽水1 mL，放置混勻10 s.應用Navios流式細胞儀，依次對每個樣本的3個標記試管進行測量.

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結 果

2.1 甲狀腺激素、相關自身抗體及雌二醇檢測結果

病例組與健康對照組比較FT4明顯降低，TSH、TG-Ab、TPO-Ab以及雌二醇含量均明顯升高，兩組間檢測值比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01).見表1.

表1 病例組和對照組甲狀腺激素、相關自身抗體及雌二醇臨床指標Tab.1 Clinical index of thyroid hormone，related antibody and estradiol in case group and control group

2.2 T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞亞群檢測結果

與健康對照組比較，病例組Treg細胞顯著降低，B淋巴細胞、NK細胞明顯升高，兩組檢測值比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01).見表2、圖1～3.

圖1 病例組與對照組CD4+CD25+Treg細胞亞群流式細胞檢測結果Fig.1 Flow cytometry test results of CD4+ CD25+ Treg cell subsets in case group and control group

圖2 病例組與對照組B細胞亞群流式細胞檢測結果Fig.2 Flow cytometry test results of B cell subsets in case group and control group

圖3 病例組與對照組NK細胞亞群流式細胞檢測結果Fig.3 Flow cytometry test results of NK cell subsets in case group and control group

表2 T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞亞群檢測結果Tab.2 Test results of T lymphocyte，B lymphocyte and NK cell subsets

2.3 病例組雌二醇含量變化對淋巴細胞亞群的影響

按雌二醇卵泡期正常參考范圍值(18.9～276.1 pg/mL)上限與下限之和的平均值(147.5 pg/mL)為分界點，將HT病例組數(shù)據(jù)分為雌二醇偏高組(n=18)和雌二醇偏低組(n=24)，分析雌二醇含量變化對淋巴細胞亞群的影響.見表3.雌二醇偏高組B細胞檢測值為(12.89±4.92)%，對比雌二醇偏低組B細胞檢測值(7.66±3.21)%明顯偏高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01).

表3 病例組中雌二醇含量變化對淋巴細胞亞群影響Tab.3 Influence of estradiol content change on lymphocyte subsets in case group

3 討 論

橋本氏甲狀腺炎患者病理生理表現(xiàn)為甲狀腺組織被大量淋巴細胞和漿細胞浸潤，隨著甲狀腺濾泡被大量破壞，甲狀腺激素隨之改變，同時淋巴細胞和漿細胞也將導致甲狀腺功能發(fā)生障礙.NK細胞作為人體免疫系統(tǒng)的第一道防線，能夠在不致敏的情況下發(fā)揮免疫學效應，是一類獨特的淋巴細胞亞群.同時還可以分泌細胞因子和趨化因子，溶解靶細胞參與特異性免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，是連接自然免疫和獲得性免疫的重要橋梁[7].已有實驗[8-12]證明：NK細胞通過CD154與B細胞表面CD40相互作用，調(diào)節(jié)誘導自體靜息狀態(tài)下的B細胞合成免疫球蛋白，并參與B細胞的成熟、免疫球蛋白的分泌和同種類型間的相互轉化(如轉換為IgG和IgA).NK細胞在自身免疫性疾病中直接破壞靶器官內(nèi)參與反應的細胞，通過ADCC作用調(diào)節(jié)并適應機體免疫反應，HT患者甲狀腺細胞中存在抗體介導細胞毒性反應，致使甲狀腺功能衰竭.本實驗針對NK細胞進行了檢測分析發(fā)現(xiàn)：病例組NK細胞數(shù)量高于健康對照組(P<0.01)；HT是一種慢性淋巴細胞性甲狀腺疾病，當機體發(fā)生免疫應答時，導致外周血中NK細胞不斷增加.由此可見，HT患者外周血中NK細胞數(shù)量不平衡、細胞活性不穩(wěn)定等特征，均在疾病的發(fā)展進程中發(fā)揮重要作用.

B細胞雖然在免疫細胞中是一個獨立的細胞群體，但它與T細胞相輔相成，在細胞免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用.B細胞表面的免疫球蛋白跨膜受體能夠特異性識別抗原，激活并啟動機體免疫反應，以主要組織相容性復合體-Ⅱ(MHC-Ⅱ)分子為載體將抗原呈遞給T細胞，Th細胞輔助支持B細胞活化，同時誘導被抗原過度刺激的B細胞產(chǎn)生相應的抗體[13-15].相關研究[16]表明：B細胞通過產(chǎn)生IL-10來抑制Th1細胞的免疫反應.B細胞不僅可以輔助T細胞，在甲狀腺疾病中也發(fā)揮其重要細胞活性，HT患者甲狀腺組織中的B細胞被激活后自發(fā)分泌相關抗體，ADCC作用是引起甲狀腺組織內(nèi)濾泡細胞破壞及凋亡的重要因素.HT患者B細胞數(shù)量增多，在B細胞聚集處可見甲狀腺濾泡破壞灶.分析其檢測數(shù)據(jù)，結果顯示：病例組B淋巴細胞數(shù)量高于對照組，且兩組間B細胞數(shù)量具有統(tǒng)計學意義(P<0.05).由此可見，探尋B細胞參與機體免疫反應中的細節(jié)，可以為B細胞介導免疫應答奠定基礎，同時也為HT患者在治療方面提供新的思路.

HT是一類器官自侵襲性疾病，多發(fā)于雌激素產(chǎn)生明顯變化的圍絕經(jīng)期女性，且女性患病率要高于同年齡期的男性，男女發(fā)病比率可達到1∶(5～10)，可見性別影響橋本氏甲狀腺炎的易感性[17-19].同時圍絕經(jīng)期是女性體內(nèi)雌二醇水平波動時期，針對這類女性患者進行研究[20]，有助于理解雌二醇在HT患者體內(nèi)所發(fā)揮的作用.通過檢測42例圍絕經(jīng)期HT女性雌二醇水平，并與38例圍絕經(jīng)期健康女性進行對比發(fā)現(xiàn)，病例組雌二醇含量升高，并且雌二醇含量在兩組中存在明顯統(tǒng)計學意義(P<0.05).雌激素不僅僅在生殖器官中發(fā)揮作用，同時也可以作用于機體免疫系統(tǒng)；雌激素刺激機體免疫系統(tǒng)，并參與免疫調(diào)節(jié)，免疫系統(tǒng)是雌激素直接作用的靶點，雌激素與淋巴細胞內(nèi)的雌激素受體結合，影響淋巴細胞的免疫功能，同時導致淋巴細胞數(shù)量的改變；應用內(nèi)分泌激素的免疫調(diào)節(jié)特性，有助于分析雌激素在橋本氏甲狀腺炎疾病中所發(fā)揮的作用，進而影響橋本氏甲狀腺炎的發(fā)展及預后[21-25].綜合分析HT患者淋巴細胞亞群及雌激素等指標，闡明各檢測指標在橋本氏甲狀腺炎疾病中的免疫學作用，可為HT的治療提供新的思路和方法.