杜 歡，秦小明，范秀萍，張家勝，李盛基

CO2協(xié)同低溫有水對(duì)卵形鯧鲹麻醉?；钚Ч挠绊?/p>

杜 歡，秦小明，范秀萍，張家勝，李盛基

（ 廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院 // 廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 // 廣東省海洋食品工程技術(shù)研究中心 // 水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 湛江，524088）

【目的】探究二氧化碳CO2麻醉協(xié)同低溫對(duì)卵形鯧鲹有水?；畹挠绊懀娱L(zhǎng)卵形鯧鲹（）的?；顣r(shí)間?！痉椒ā垦芯勘；钸^(guò)程中CO2質(zhì)量濃度、麻醉時(shí)間、麻醉溫度和魚(yú)質(zhì)量水比對(duì)卵形鯧鲹有水?；顣r(shí)長(zhǎng)的影響；在最佳麻醉?；顥l件下，測(cè)定其血清生化指標(biāo)、肌肉及肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)及代謝指標(biāo)。【結(jié)果】卵形鯧鲹在16 ℃、100 mg/L CO2水溶液中麻醉3 min其麻醉效果最佳。在15 ℃低溫下進(jìn)行有水?；?，魚(yú)水質(zhì)量比為2∶1，存活時(shí)間最長(zhǎng)，為（359±2）min，此條件下復(fù)蘇率達(dá)100%。經(jīng)過(guò)CO2麻醉協(xié)同低溫有水?；詈蟮穆研析K鲹血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）活性顯著升高（＜0.05）、尿素氮（BUN）和甘油三酯（TG）含量上升，血糖含量下降。肌肉中的乳酸脫氫酶（LDH）活性顯著上升（＜0.05），乳酸（LD）和糖原含量上升，過(guò)氧化氫酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量下降；肝臟中的LDH活性顯著上升（＜0.05）、CAT活性和LD的含量上升，MDA和糖原的含量下降。【結(jié)論】CO2協(xié)同低溫有水對(duì)卵形鯧鲹有較好的麻醉效果，有助于保活運(yùn)輸。在?；钸^(guò)程中卵形鯧鲹通過(guò)提升能量代謝水平和抗氧化能力應(yīng)答環(huán)境應(yīng)激，在一定程度上影響卵形鯧鲹?；钸^(guò)程的存活時(shí)間。

卵形鯧鲹；二氧化碳麻醉；低溫；有水?；?；血清生化；氧化應(yīng)激；代謝

卵形鯧鲹（），屬于硬骨魚(yú)綱鱸形目鲹科鯧鲹屬[1]，主要分布在我國(guó)熱帶及亞熱帶海域，是湛江市主要經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖類(lèi)之一[2]。卵形鯧鲹肉中不飽和脂肪酸含量高，富含亞油酸、二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA），營(yíng)養(yǎng)豐富、肉質(zhì)鮮美[3]，但其在運(yùn)輸中常因激烈掙扎導(dǎo)致外皮破損、撞傷等因素會(huì)使代謝速率加快、激素水平的上升[4]，極易引起品質(zhì)受損甚至死亡，因此卵形鯧鲹長(zhǎng)途運(yùn)輸?；罴夹g(shù)亟待發(fā)展。

二氧化碳（CO2）因其無(wú)毒、無(wú)藥性消退期的優(yōu)勢(shì)，麻醉后的魚(yú)可直接進(jìn)入市場(chǎng)，引起研究者們廣泛關(guān)注[5]。目前國(guó)內(nèi)CO2麻醉技術(shù)主要應(yīng)用在水產(chǎn)品?；?，楊豐等[6]發(fā)現(xiàn)，羅氏沼蝦（）在生態(tài)冰溫結(jié)合CO2麻醉技術(shù)下保活時(shí)間更長(zhǎng)，可達(dá)到48 h，存活率高于90%，雖對(duì)蝦體肝臟和心肌造成損傷，但在一定時(shí)間內(nèi)能保證蝦體正常生存；周翠平等[7]發(fā)現(xiàn)，用CO2麻醉羅非魚(yú)（）的無(wú)水組ATP降解速度比有水組快，得出有水?；畋葻o(wú)水?；顧C(jī)體體能消耗小的結(jié)果。而國(guó)外CO2麻醉主要應(yīng)用在宰殺前和安裝魚(yú)類(lèi)遙測(cè)發(fā)射器前，Erikson等[8]將CO2麻醉技術(shù)應(yīng)用在宰殺大西洋鮭（）上，發(fā)現(xiàn)麻醉宰殺后的大西洋鮭魚(yú)在冷凍貯藏1 ～ 2周后其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與剛捕撈上來(lái)的鮭魚(yú)沒(méi)有差異；Christopher等[9]將CO2麻醉應(yīng)用在梭鱸（）植入手術(shù)，將魚(yú)類(lèi)遙測(cè)發(fā)射器植入魚(yú)體內(nèi)以監(jiān)測(cè)魚(yú)的生長(zhǎng)變化參數(shù)，可見(jiàn)CO2在水產(chǎn)品麻醉上具有較好效果。目前，CO2結(jié)合低溫有水?；盥研析K鲹的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

基于此，本研究采用CO2麻醉卵形鯧鲹后進(jìn)行低溫有水保活，探究在CO2麻醉卵形鯧鲹的較佳麻醉液濃度、麻醉時(shí)間、麻醉液溫度等?；顥l件下，保活復(fù)蘇后卵形鯧鲹的生理生化指標(biāo)、氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化情況，探明其對(duì)卵形鯧鲹的?；钸\(yùn)輸?shù)挠绊懀云跒槁研析K鲹的?；钸\(yùn)輸提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

卵形鯧鲹，購(gòu)自湛江市東風(fēng)市場(chǎng)，體質(zhì)量（490±30）g，挑選無(wú)外傷、鱗片完整、體長(zhǎng)相近的魚(yú)體于塑料桶中停食暫養(yǎng)，暫養(yǎng)密度26.7 g/L，海水鹽度20 ～ 25，水溫24 ～ 26 ℃，采用砂濾循環(huán)海水（650 L/h），25 L/min空氣泵充氧，保證水體溶解氧質(zhì)量濃度為6 ～ 8 mg/L，暫養(yǎng)6 h后用于試驗(yàn)。

尿素氮BUN測(cè)定試劑盒（貨號(hào) C013-2-1）、葡萄糖GLU測(cè)定試劑盒（貨號(hào)A154-1-1）、甘油三酯TG測(cè)定試劑盒（貨號(hào) A110-1-1）、谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT測(cè)定試劑盒（貨號(hào) C010-2-1）、過(guò)氧化氫酶CAT測(cè)定試劑盒（A007-2-1）、丙二醛MDA測(cè)定試劑盒（貨號(hào)A003-1-1）、乳酸脫氫酶LDH測(cè)定試劑盒（貨號(hào)A020-2-2）均購(gòu)于南京建成生物工程研究所；皮質(zhì)醇測(cè)定試劑盒（貨號(hào)ml-E4005）購(gòu)于上海酶聯(lián)生物科技有限公司；糖原測(cè)定試劑盒（貨號(hào)BC0345）、乳酸測(cè)定試劑盒（貨號(hào)BC2235）均購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司。

1.2 主要儀器與設(shè)備

TP688便攜式溫度計(jì)，溫州市德福智能科技有限公司；Varioskan全自動(dòng)酶標(biāo)儀，美國(guó)Thermo Fisher 公司；雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京譜析通用儀器有限責(zé)任公司；CO2麻醉設(shè)備由CO2鋼瓶、氧氣鋼瓶、玻璃魚(yú)缸等相關(guān)部件構(gòu)成。

1.3 二氧化碳協(xié)同低溫有水?；盥研析K鲹的條件優(yōu)化

1.3.1 卵形鯧鲹麻醉及復(fù)蘇行為特征評(píng)估 參考范興[10]的魚(yú)類(lèi)麻醉和復(fù)蘇的判定標(biāo)準(zhǔn)，并根據(jù)卵形鯧鲹的表形和生物特性做相應(yīng)修改，具體見(jiàn)表1。魚(yú)死亡的判定是通過(guò)魚(yú)尾部的敲打無(wú)反應(yīng)或魚(yú)眼的反射。

表1 卵形鯧鲹在不同麻醉和復(fù)蘇階段的行為表現(xiàn)

1.3.2 CO2常溫麻醉?xiàng)l件優(yōu)化

1.3.2.1 CO2麻醉濃度的確定 選取健康的卵形鯧鲹在水溫（25±1）℃，海水鹽度20 ～ 25，暫養(yǎng)24 h；同時(shí)將CO2氣瓶連接氣石（氧泵供氧量為6 mg/L）放入魚(yú)缸中，對(duì)卵形鯧鲹（每次放入1尾）進(jìn)行麻醉，在麻醉液溫度為25 ℃條件下，將卵形鯧鲹（每次1尾）分別放入質(zhì)量濃度為70、100、165 mg/L（pH值分別為5.9、5.7、5.5）的CO2水溶液中進(jìn)行麻醉至A3級(jí)；每個(gè)麻醉濃度選取6尾魚(yú)重復(fù)3次以上實(shí)驗(yàn)，觀察實(shí)驗(yàn)卵形鯧鲹的行為特征，記錄卵形鯧鲹所需的麻醉時(shí)間及在海水中的復(fù)蘇時(shí)間。

1.3.2.2 CO2麻醉時(shí)間的確定 暫養(yǎng)條件同1.3.2.1節(jié)。在25 ℃水溫下，將卵形鯧鲹放入100 mg/L CO2溶液中分別浸浴1、3、5、7 min后放入清水中復(fù)蘇至R4級(jí)，記錄復(fù)蘇率。以上4組實(shí)驗(yàn)皆同時(shí)通入相同速率的O2供給魚(yú)體呼吸，每個(gè)重復(fù)用魚(yú)6尾。

1.3.3 CO2麻醉溫度對(duì)卵形鯧鲹?；畹挠绊?暫養(yǎng)條件同1.3.2.1節(jié)。根據(jù)不同CO2濃度對(duì)卵形鯧鲹的麻醉效果，選擇質(zhì)量濃度為100 mg/L的CO2溶液，分別在16、19、22和25 ℃的水溫下進(jìn)行麻醉，麻醉后30 min內(nèi)未能復(fù)蘇的魚(yú)記為死亡，記錄該條件下卵形鯧鲹所需麻醉時(shí)間和復(fù)蘇時(shí)間。另分別在16、19、22和25 ℃的溫度下用100 mg/L的CO2溶液麻醉卵形鯧鲹，裝袋充氧后于15 ℃生化培養(yǎng)箱進(jìn)行無(wú)水?；頪10]，每組各取6尾魚(yú)，觀察不同麻醉液溫度下相同?；顪囟鹊穆研析K鲹?；顣r(shí)間。

1.3.4 魚(yú)水質(zhì)量比對(duì)卵形鯧鲹?；畹挠绊?暫養(yǎng)條件同1.3.2.1節(jié)。由?；盥樽頊囟葘?shí)驗(yàn)的保活時(shí)間，選取16 ℃為麻醉溫度，采用0.5 ～ 1.0 ℃/h梯度降溫到達(dá)16 ℃后，將卵形鯧鲹投入到質(zhì)量濃度為100 mg/L的CO2水溶液中，同時(shí)通入O2，麻醉后將卵形鯧鲹放置在魚(yú)水質(zhì)量比分別為1∶0、

2∶1、1∶1、1∶2的袋中充氧打包后，放進(jìn)15 ℃的生化培養(yǎng)箱進(jìn)行無(wú)水保活，各取6尾魚(yú)，觀察不同魚(yú)水比下卵形鯧鲹的?；顣r(shí)間。

1.4 CO2協(xié)同低溫有水?；顚?duì)卵形鯧鲹的影響

1.4.1 卵形鯧鲹有水保活處理 卵形鯧鲹按照1.3.2.1節(jié)條件暫養(yǎng)6 h后，使用碎冰以2 ℃/h梯度使水溫降至20 ℃，再以0.5 ～ 1.0 ℃/h梯度降溫到16 ℃，最后以1 L/min的流量向水中通入CO2至水溶液中CO2質(zhì)量濃度為100 mg/L待其完全進(jìn)入麻醉后，取出裝入袋中，使魚(yú)水質(zhì)量比保持2∶1。充入純O2，每袋裝入1尾魚(yú)，置于15 ℃培養(yǎng)箱中?；睿S機(jī)從桶里取出3尾取樣測(cè)定肌肝指標(biāo)、血清指標(biāo)，作為新鮮組（CK）。將剩余卵形鯧鲹分為4組，每組6尾，第1組為CO2麻醉后的魚(yú)未進(jìn)行保活，即保活0 h，作為麻醉對(duì)照組；第2組為CO2麻醉后的魚(yú)?；? h組，第3組為?；? h組，第4組為?；? h后的復(fù)蘇6 h組。每組隨機(jī)取3尾測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。卵形鯧鲹尾部靜脈取血，將血液注入10 mL離心管中，4 ℃靜置2 ～ 3 h，3500 r/min下離心20 min，取上血清，置于4 ℃冰箱備用，并取背部肌肉與肝臟，液氮處理后放-80 ℃冷凍備用。

1.4.2 指標(biāo)測(cè)定 血清中BUN、Glu、TG、GOT含量、CAT活性和MDA含量，均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定。Cortisol含量用酶聯(lián)免疫法測(cè)定（= 0.783 6- 0.038 9，2= 0.993 9）；Gly、LD含量和LDH活性，使用Gly試劑盒、LD試劑盒和LDH試劑盒，采用試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)肝臟與肌肉樣品進(jìn)行制備與檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS 26.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間差異比較采用單因素方差分析，對(duì)于復(fù)蘇率非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用平方根反正弦變換后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩兩比較方差齊時(shí)采用 LSD 檢驗(yàn)法，方差不齊時(shí)采用 Dunnett’s T3 進(jìn)行比較。0.05表示有顯著差異，圖表的繪制采用Origin 2017軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 卵形鯧鲹CO2麻醉協(xié)同低溫有水保活條件的確定

2.1.1 CO2常溫麻醉?xiàng)l件的優(yōu)化

2.1.1.1 CO2麻醉濃度對(duì)麻醉時(shí)間及復(fù)蘇時(shí)間的影響 圖1中隨CO2水溶液的麻醉濃度上升，卵形鯧鲹麻醉時(shí)間呈增加趨勢(shì)，且變化顯著（＜0.05），而對(duì)應(yīng)的復(fù)蘇時(shí)間有所下降。MARKING等[11]發(fā)現(xiàn)，控制麻醉時(shí)間在3 min以?xún)?nèi)，復(fù)蘇時(shí)間在5 min以?xún)?nèi)時(shí)麻醉液濃度最佳。CO2質(zhì)量濃度為70 mg/L時(shí)麻醉時(shí)間比CO2質(zhì)量濃度為100 mg/L時(shí)長(zhǎng)89 s， CO2質(zhì)量濃度為165 mg/L時(shí)復(fù)蘇時(shí)間比CO2質(zhì)量濃度為100 mg/L時(shí)長(zhǎng)100 s，均導(dǎo)致機(jī)體耗能大。CO2水溶液質(zhì)量濃度為100 mg/L進(jìn)行麻醉魚(yú)處理時(shí)，麻醉時(shí)間為（321±5）s，復(fù)蘇時(shí)間為（279±8）s，綜合認(rèn)為，100 mg/L為較佳的CO2麻醉質(zhì)量濃度。

凡含一個(gè)相同字母表示同一指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05）

2.1.1.2 CO2麻醉時(shí)間對(duì)復(fù)蘇時(shí)間及復(fù)蘇率的影響 在圖2(A、B)中顯示，在麻醉時(shí)間3 min時(shí)，復(fù)蘇時(shí)間最短，為（305±21）s，復(fù)蘇率100%。即3 min為最佳麻醉時(shí)間。麻醉5 min的復(fù)蘇時(shí)間比麻醉1 min長(zhǎng)258 s，這可能是因?yàn)轸~(yú)體長(zhǎng)時(shí)間浸泡于麻醉液時(shí)，會(huì)導(dǎo)致魚(yú)體呼吸和血管舒縮中樞被麻醉液麻醉[12]。但其中麻醉1 min的復(fù)蘇時(shí)間比麻醉3 min的復(fù)蘇時(shí)間長(zhǎng)91 s，這是因?yàn)榇藭r(shí)魚(yú)麻醉深度不足，魚(yú)腦中的修復(fù)基因未來(lái)得及修復(fù)，導(dǎo)致細(xì)胞受損，復(fù)蘇階段需要更長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間。

凡含一個(gè)相同字母表示差異不顯著（P＞0.05）

2.1.2 麻醉溫度對(duì)魚(yú)體?；顣r(shí)間的影響 圖3(A、B)可看出，CO2麻醉液溫度16 ℃時(shí)麻醉時(shí)間為（158±2）s，比19 ℃時(shí)卵形鯧鲹的麻醉時(shí)間縮短1.13倍；復(fù)蘇時(shí)間為（1 004±9）s，復(fù)蘇時(shí)間較19 ℃長(zhǎng)12.25%；保活時(shí)間為（111±7）min，比19 ℃長(zhǎng)30.59%?？赡苁且?yàn)?6 ℃接近卵形鯧鲹的生態(tài)冰溫的溫度，使其更容易進(jìn)入休眠狀態(tài)，所以麻醉時(shí)間短。雖然25℃麻醉時(shí)間和復(fù)蘇時(shí)間符合MARKING等[11]發(fā)現(xiàn)，但相對(duì)于16 ℃，25 ℃對(duì)魚(yú)體的耗能大，保活時(shí)間為（37±5）min不利于?；钸\(yùn)輸；且16 ℃時(shí)麻醉時(shí)間在3 min以?xún)?nèi)，復(fù)蘇時(shí)間較長(zhǎng)方便魚(yú)的?；铑A(yù)處理，因此16 ℃為較佳的麻醉溫度。但16 ℃無(wú)水?；顣r(shí)間為（111±7）min，無(wú)水?；顣r(shí)長(zhǎng)不到2 h，因此卵形鯧鲹運(yùn)輸過(guò)程中需要通過(guò)一定的魚(yú)水質(zhì)量比延長(zhǎng)其?；顣r(shí)間。

2.1.3 不同魚(yú)水質(zhì)量比對(duì)?；顣r(shí)間的影響 由圖4可看出，魚(yú)水質(zhì)量比1∶0時(shí)（即無(wú)水?；睿?，卵形鯧鲹保活時(shí)間為（111±3）min；魚(yú)水質(zhì)量比為2∶1時(shí)，卵形鯧鲹?；顣r(shí)間為（359±2）min，比1∶0時(shí)?；顣r(shí)間多2.23倍?？赡苁且?yàn)榕c對(duì)含氧量要求較低的鲆鰈類(lèi)等相比，卵形鯧鲹等需氧量較大的洄游性魚(yú)類(lèi)，較難實(shí)現(xiàn)無(wú)水?；钸\(yùn)輸[13]。完全無(wú)水不符合卵形鯧鲹的生存環(huán)境，?；畲械乃苁蛊漩w和皮膚濕潤(rùn)，減少魚(yú)腮上的表皮黏液，更好地進(jìn)行有氧呼吸；且魚(yú)水質(zhì)量比2∶1比例下，實(shí)際操作更方便，能夠節(jié)約用水成本和運(yùn)輸成本。

凡含一個(gè)相同字母表示同一指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05）

凡含一個(gè)相同字母表示差異不顯著（P＞0.05）

2.2 CO2協(xié)同低溫有水保活對(duì)卵形鯧鲹血清生化指標(biāo)的影響

圖5(A)中，卵形鯧鲹經(jīng)CO2麻醉后血糖濃度顯著下降（< 0.05），而在復(fù)蘇6 h時(shí)恢復(fù)到初始水平。其中?；? h的血糖含量比0 h少50.94%，?；? h時(shí)比0 h少54.72%。麻醉后血糖下降是因?yàn)楸；钸^(guò)程中卵形鯧鲹因應(yīng)激供能需要加快糖酵解，導(dǎo)致血糖下降。卵形鯧鲹復(fù)蘇6 h時(shí)血糖濃度比新鮮組上升4.15%。

圖5(B)中，血清中皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度?；钸^(guò)程中無(wú)顯著差異，復(fù)蘇6 h后也無(wú)顯著差異（> 0.05）。皮質(zhì)醇在?；铋_(kāi)始時(shí)上升，在?；罱Y(jié)束復(fù)蘇6 h后下降。其中皮質(zhì)醇上升可能是因?yàn)?∶1的魚(yú)水比改變魚(yú)的生活環(huán)境，造成一定的應(yīng)激，復(fù)蘇時(shí)下降是因?yàn)榛氐秸５纳姝h(huán)境，但皮質(zhì)醇激素水平顯著高于新鮮組水平（< 0.05）。

凡含一個(gè)相同字母表示差異不顯著（P＞0.05）

谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT活性的變化間接反映肝臟受損程度。圖6(A)中，卵形鯧鲹經(jīng)二氧化碳結(jié)合低溫有水保活后血清中的GOT活性顯著上升（＜0.05），復(fù)蘇后下降。這是因?yàn)楫?dāng)卵形鯧鲹受到刺激時(shí)，肝臟中GOT會(huì)釋放到血清中，導(dǎo)致血清中的GOT活性上升。表明經(jīng)CO2和低溫協(xié)同?；詈螅S著?；顣r(shí)間的延長(zhǎng)，肝臟損傷會(huì)加重。

圖6(B)中，保活后卵形鯧鲹血清中的甘油三酯TG濃度顯著升高（＜0.05），?；? h和6 h分別是0 h的1.09倍和1.60倍；復(fù)蘇6 h時(shí)下降，是新鮮組的1.39倍。

尿素氮BUN含量的變化可以反映腎臟功能的代謝狀況。圖6(C)中，保活后卵形鯧鲹血清中的尿素氮濃度顯著升高（＜0.05）。復(fù)蘇6 h時(shí)尿素氮濃度基本恢復(fù)至新鮮組水平。

凡含一個(gè)相同字母表示差異不顯著（P＞0.05）

2.3 CO2協(xié)同低溫有水?；顚?duì)卵形鯧鲹糖原與乳酸含量、乳酸脫氫酶活性的影響

圖7(A)卵形鯧鲹?；钪懈翁窃|(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著下降（＜0.05）。?；? h比0 h少5.92%，?；? h比0 h少18.09%；復(fù)蘇6 h后仍顯著低于新鮮組（＜0.05），少14.72%，說(shuō)明肝糖原在復(fù)蘇后尚未得到完全恢復(fù)。肌肉糖元被分解而肝糖原在?；钸^(guò)程中變化不顯著，肌糖原復(fù)蘇6 h比新鮮組多6.48%，可能是因?yàn)榇藭r(shí)魚(yú)處于饑餓狀態(tài)，血液中葡萄糖無(wú)法滿(mǎn)足魚(yú)體的需要。

圖7(B)中，肌肉與肝臟的乳酸LD質(zhì)量摩爾濃度在保活和復(fù)蘇整個(gè)過(guò)程中均呈先上升后下降的趨勢(shì)，肌肉中LD質(zhì)量摩爾濃度在?；詈蛷?fù)蘇過(guò)程中變化不顯著（> 0.05），復(fù)蘇6 h比新鮮組多22.22%。肝臟LD質(zhì)量摩爾濃度?；顣r(shí)顯著高于新鮮組樣品（＜0.05），復(fù)蘇6 h比新鮮組多28.57%。說(shuō)明肝臟受損比肌肉受損嚴(yán)重，這可能也是隨著?；顣r(shí)間延長(zhǎng)卵形鯧鲹復(fù)蘇率下降的重要原因之一。

圖7(C)中，在卵形鯧鲹?；顝?fù)蘇過(guò)程中，肌肉乳酸脫氫酶LDH活性先下降后上升。肌肉LDH活性?；? h為0 h的1.28倍，?；? h為0 h的1.39倍，復(fù)蘇6 h為新鮮組的1.31倍。肝臟LDH的活性呈先上升后下降的變化，在整個(gè)?；詈蛷?fù)蘇過(guò)程中差異不顯著（> 0.05）。?；? h的肝臟LDH活性最高，保活3 h比0 h下降27.91%，?；? h比0 h下降19.15%，復(fù)蘇6 h時(shí)為新鮮組的2.59倍，說(shuō)明肝臟受損程度在復(fù)蘇后并未得到完全恢復(fù)。

凡含一個(gè)相同字母表示同一組織差異不顯著（P＞0.05）

圖7（續(xù)）

Fig. 7（Continued）

2.4 CO2協(xié)同低溫有水?；盥研析K鲹?；钸^(guò)程對(duì)CAT活性及MDA含量的影響

圖8(A)中，卵形鯧鲹在保活復(fù)蘇過(guò)程中肌肉過(guò)氧化氫酶CAT活性呈先下降后上升趨勢(shì)。與?；? h相比，?；? h活性減少61.42%，保活6 h活性減少75.82%，復(fù)蘇組比新鮮組少62.43%。肝臟CAT活性在?；顝?fù)蘇過(guò)程中呈先上升后下降的趨勢(shì)，與?；? h相比，?；? h活性升高1.62倍，保活6 h升高2.91倍，復(fù)蘇6 h是新鮮組的2.68倍。這可能是因?yàn)楸；钸^(guò)程中卵形鯧鲹的肝臟出現(xiàn)氧化應(yīng)激的反應(yīng)，需要補(bǔ)充CAT對(duì)其進(jìn)行消除。

丙二醛MDA含量作為評(píng)價(jià)脂質(zhì)過(guò)氧化的指標(biāo)。圖8(B)中，卵形鯧鲹在?；顝?fù)蘇過(guò)程肌肉與肝臟MDA質(zhì)量摩爾濃度均下降后上升，且整個(gè)過(guò)程均顯著低于新鮮組（＜0.05）?？赡苁且?yàn)樵贑AT等的作用下，卵形鯧鲹脂質(zhì)過(guò)氧化水平有所降低。

凡含一個(gè)相同字母表示同一指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05）

3 討論

3.1 CO2質(zhì)量濃度、麻醉時(shí)間、水溫及魚(yú)水比對(duì)卵形鯧鲹麻醉效果及保活效果的影響

3.1.1 CO2質(zhì)量濃度、麻醉時(shí)間對(duì)卵形鯧鲹麻醉效果影響 卵形鯧鲹在CO2質(zhì)量濃度為165 mg/L麻醉時(shí)，比100 mg/L的復(fù)蘇時(shí)間增加24.37%。這可能是魚(yú)浸泡于高麻醉液時(shí)，會(huì)導(dǎo)致的神經(jīng)中樞處于深度麻醉，導(dǎo)致魚(yú)體復(fù)蘇時(shí)間延長(zhǎng)，甚至死亡[12]。當(dāng)CO2麻醉質(zhì)量濃度為100 mg/L時(shí)，卵形鯧鲹的復(fù)蘇時(shí)間隨著麻醉時(shí)間的升高而降低，麻醉時(shí)間越高，復(fù)蘇率越低。其中麻醉1 min比麻醉3 min的復(fù)蘇時(shí)間長(zhǎng)，主要是因?yàn)樵谌毖醐h(huán)境中，（基因）可以激活抗氧化酶活性使神經(jīng)元再生等方式保護(hù)腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞[14 -15]，麻醉1 min時(shí)魚(yú)腦中的基因未能及時(shí)反應(yīng)，細(xì)胞受損導(dǎo)致復(fù)蘇時(shí)間延長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CO2麻醉質(zhì)量濃度為100 mg/L時(shí)，卵形鯧鲹產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)較??；當(dāng)CO2麻醉質(zhì)量濃度為165 mg/L時(shí)，卵形鯧鲹在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)激烈撞擊麻醉缸、跳躍現(xiàn)象，表明魚(yú)體對(duì)高濃度麻醉液產(chǎn)生激烈的應(yīng)激反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)得出，CO2麻醉卵形鯧鲹的較佳質(zhì)量濃度為100 mg/L，這與CO2麻醉鳊（）（90 mg/L）[16]所得的質(zhì)量濃度相近，與CO2麻醉鰱（）（155±15）mg/L[17]和大口黑鱸()（200 mg/L）[18]研究結(jié)果差別較大。這可能是因?yàn)椴煌N類(lèi)的魚(yú)有不同的代謝速率，由于魚(yú)種類(lèi)差異，相同的麻醉劑對(duì)不同魚(yú)的麻醉效果和適宜麻醉濃度具有一定差異[19]。綜合考慮，在25 ℃常溫下100 mg/L的CO2麻醉液麻醉3 min為卵形鯧鲹的最佳麻醉?xiàng)l件。

3.1.2 CO2麻醉水溫及魚(yú)水比對(duì)卵形鯧鲹?；钚Ч挠绊?一般情況下，水體溫度越高，魚(yú)類(lèi)的代謝強(qiáng)度越強(qiáng)，氧氣消耗量越大，相對(duì)?；顣r(shí)間下降。吳云輝等[20]研究在不同溫度環(huán)境下半滑舌鰨（）的存活率發(fā)現(xiàn)，3 ℃時(shí)半滑舌鰨存活率最高。水溫的降低可以減緩魚(yú)的代謝速率，降低氧氣消耗，是減少水中氨的產(chǎn)生的主要條件之一，減少溶氧的消耗，從而提高?；钸\(yùn)輸時(shí)間。本研究發(fā)現(xiàn)，16 ℃為卵形鯧鲹?；铑A(yù)處理最佳麻醉溫度。

降低魚(yú)水比是?；钸\(yùn)輸中重點(diǎn)考慮的經(jīng)濟(jì)成本，無(wú)水?；顬樽罴褷顟B(tài)。但由于水產(chǎn)動(dòng)物的生物學(xué)特性，在?；钸^(guò)程中不同魚(yú)的最大魚(yú)水比不同。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，選擇魚(yú)水質(zhì)量比2∶1的保活條件對(duì)卵形鯧鲹?；钸\(yùn)輸時(shí)間有積極影響。

3.2 CO2麻醉協(xié)同低溫有水保活過(guò)程中對(duì)卵形鯧鲹血清生化指標(biāo)、肌肉及肝臟指標(biāo)變化的影響

卵形鯧鲹經(jīng)暫養(yǎng)一段時(shí)間后運(yùn)輸時(shí)，魚(yú)處于肌餓狀態(tài)，血液葡萄糖不能及時(shí)提供魚(yú)體消耗的能量，魚(yú)體進(jìn)行無(wú)氧代謝，分解肌糖原，糖原產(chǎn)生乳酸。與丁亞濤等[16]發(fā)現(xiàn)CO2麻醉?；钸\(yùn)輸鳊過(guò)程中肌糖原與肌肉LD上升的變化趨勢(shì)一致。肝臟與肌肉組織中的LD上升與糖元分解產(chǎn)生乳酸有關(guān)，因魚(yú)類(lèi)利用肝糖元的能力差，主要分解肌糖元[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，卵形鯧鲹在保活運(yùn)輸過(guò)程中肝臟受損比肌肉受損程度大，這可能也是隨著?；顣r(shí)間的延長(zhǎng)復(fù)蘇率下降的重要原因之一。

魚(yú)類(lèi)的應(yīng)激、代謝和行為受到下丘腦-垂體-腎間軸(HPI) 的調(diào)控[22]。皮質(zhì)醇作為魚(yú)體應(yīng)激指標(biāo)，可以快速反映魚(yú)體激素水平。本研究中與新鮮組相比，麻醉后的卵形鯧鲹血清皮質(zhì)醇含量升高，與Mohammad等[23]研究一致。而卵形鯧鲹經(jīng)CO2麻醉后在?；钸^(guò)程中皮質(zhì)醇的變化不顯著，表明CO2麻醉對(duì)卵形鯧鲹的?；顟?yīng)激有一定的安撫作用。

血液尿素氮含量的變化能夠反映腎功能的代謝情況。?；? h時(shí)卵形鯧鲹血液中尿素氮含量上升，可能是因?yàn)楸；钸^(guò)程中低溫脅迫應(yīng)激導(dǎo)致其腎功能失常。保活中卵形鯧鲹血清的TG含量隨著?；顣r(shí)間的延長(zhǎng)而增加，可能是因?yàn)楸；钸^(guò)程中魚(yú)活性變?nèi)?，脂質(zhì)利用率降低，未能起到供能作用。王美垚[24]也發(fā)現(xiàn)，吉富羅非魚(yú)（）在低溫脅迫下無(wú)氧代謝增強(qiáng)，有氧與脂代謝受限，血清中TG上升。GOT是反應(yīng)魚(yú)體應(yīng)激響應(yīng)的重要指標(biāo)，是肝臟連接糖、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)代謝中重要的酶。研究發(fā)現(xiàn)，保活0 h ～ 6 h組GOT酶活性顯著升高（＜0.05），這可能是因?yàn)轸~(yú)體受到刺激響應(yīng)，供能不足，需要分解糖等能量物質(zhì)或其肝臟受到了一定損傷，這也是卵形鯧鲹比鳊[16-18]等?；顣r(shí)間短的原因之一。

LDH主要存在于心肌細(xì)胞和腎臟中，其活性增強(qiáng)能反映心肌細(xì)胞和腎臟的受損程度[25]。與新鮮組相比，保活0 h組的肝臟LDH活性顯著上升（＜0.05），表明CO2麻醉會(huì)對(duì)卵形鯧鲹造成肝臟損傷。

?；? h組肌肉與肝臟CAT活性均增強(qiáng)，表明CO2麻醉對(duì)魚(yú)體造成一定的應(yīng)激，在保活0 h ～ 3 h組肌肉中的CAT顯著下降（＜0.05），可能是因?yàn)樵诒；畲腥苎跸陆掉~(yú)體受到低氧脅迫損傷[26]。而?；? h ～ 3 h組中肝臟CAT的活性上升，可能是由于氧化應(yīng)激的損傷，故肝臟會(huì)通過(guò)CAT等酶來(lái)對(duì)其進(jìn)行消除。與周文等[27]發(fā)現(xiàn)史氏鱘（）在低溫?；钸\(yùn)輸中CAT活性變化一致。與新鮮組相比，?；? ～ 6 h組肌肉與臟中MDA均呈下降趨勢(shì)，可能是因?yàn)楸；顣r(shí)間的延長(zhǎng)及在CAT等的作用下脂質(zhì)過(guò)氧化水平降低，與低溫休眠?；钫渲辇埬懯唪~(yú)（）的結(jié)果[28]一致。

4 結(jié)論

本研究采用綠色安全的CO2在16 ℃下麻醉質(zhì)量濃度為100 mg/L CO2水溶液中對(duì)卵形鯧鲹麻醉3 min后，其麻醉效果最佳，在低溫下進(jìn)行有水?；?，魚(yú)水質(zhì)量比為2∶1，存活時(shí)間最長(zhǎng)，為（359±2）min，此條件下復(fù)蘇率達(dá)100%。CO2麻醉協(xié)同低溫有水?；盥研析K鲹過(guò)程中，血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性、尿素氮和甘油三酯含量上升，血糖含量下降；肌肉中的乳酸脫氫酶活性、糖原和乳酸含量上升，過(guò)氧化氫酶活性、丙二醛含量下降；肝臟中的乳酸脫氫酶活性、過(guò)氧化氫酶活性、乳酸含量上升，糖原和丙二醛含量下降?？梢?jiàn)CO2協(xié)同低溫有水?；顚?duì)卵形鯧鲹的應(yīng)激響應(yīng)主要在能量代謝和氧化應(yīng)激方面，提示在實(shí)際?；钸\(yùn)輸中可加入一定劑量綠色安全的抗應(yīng)激劑，減緩?；钸^(guò)程中低溫脅迫的損傷。

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Synergistic Effect of CO2and Low Water Temperature on the Anesthesia and Survival of

DU Huan, QIN Xiao-ming, FAN Xiu-ping, ZHANG Jia-sheng, LI Sheng-ji

（,//////,524088,）

【Objective】 In order to prolong the survival time ofand explore the effect of carbon dioxide ( CO2) anesthesia combined with low temperature on the water survival of. 【Methods】 Effects of CO2concentration, anesthesia time, anesthesia temperature and fish-water mass ratio on survival time ofwere studied. Under the optimal survival conditions, the serum biochemical indexes, oxidative stress indexes and metabolic indexes of muscle and liver were determined. 【Results】was anesthetized in 100 mg/L CO2aqueous solution at 16 ℃ for 3 min, and the anesthetic effect was the best. The fish was kept alive with water at 15 ℃, and the fish-water ratio was 2∶1. The longest survival time was (359±2) min, and the recovery rate was 100%. After preservation, the serum GOT activity increased significantly (< 0.05), BUN and TG content increased, and blood glucose content decreased. LDH activity in muscle increased significantly (< 0.05), LD content increased, CAT activity, glycogen and MDA content decreased ; lDH activity in liver increased significantly (< 0.05), CAT activity, glycogen and LD content increased, MDA content decreased.【Conclusion】Synergistic effect of CO2and low water temperature has good anesthetic effect on, which is helpful to keep alive and transport. In the survival process,responds to environmental stress by improving energy metabolism and antioxidant capacity, which affects the survival time of.

; carbon dioxide anesthesia; low temperature；water preservation; serum biochemistry; Oxidative stress; metabolism

TS254.1

A

1673-9159（2022）01-0035-09

10.3969/j.issn.1673-9159.2022.01.006

杜歡，秦小明，范秀萍，等. CO2麻醉協(xié)同低溫有水?；顚?duì)卵形鯧鲹麻醉?；钚Ч挠绊慬J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，42（1）：35-43.

2021-10-10

“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“藍(lán)色糧倉(cāng)科技創(chuàng)新”重點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)（2019YFD0901601）

杜歡（1996―），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槁研析K鲹生態(tài)冰溫?；钸\(yùn)輸技術(shù)。E-mail：1027428913@qq.com

秦小明（1964―），男，博士，教授，研究方向?yàn)樗a(chǎn)品加工與?；盍魍ā-mail：xiaoming0502@21cns.com

（責(zé)任編輯：劉朏）