神經(jīng)病理性疼痛 (neuropathic pain, NP) 是一種慢性疼痛，國際疼痛學會 (IASP) 在ICD-11 中將NP定義為由軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)的病變或疾病引起的慢性疼痛，其表現(xiàn)為自發(fā)疼痛、痛覺過敏及異常疼痛等

。NP 發(fā)病機理復(fù)雜，是一種難治性疾病，影響許多病人的生活質(zhì)量，到目前為止，還沒有一種好的方法來有效緩解NP

。因此確定新的潛在藥物靶點以開發(fā)新型藥物制劑尤為重要。

細胞自噬 (autophagy) 是一種細胞內(nèi)高度保守的選擇性降解的過程，主要通過溶酶體途徑降解損壞的細胞器或細胞內(nèi)的病原體。在正常情況下可以清除細胞內(nèi)有害和過剩的細胞器及病原體，作為一種防御機制來抵御應(yīng)激刺激（如寒冷、饑餓、缺血、缺氧等）對細胞造成的損傷，又稱為保護性自噬。自噬的研究多數(shù)集中于腫瘤，后來也有學者研究證實自噬在神經(jīng)退行性變、神經(jīng)系統(tǒng)疾病中扮演著重要的角色。除了神經(jīng)元外，星形膠質(zhì)細胞在氧-糖缺乏的環(huán)境下也被證實存在保護性自噬

。近年來研究發(fā)現(xiàn)，脊神經(jīng)結(jié)扎模型 (spinal nerve ligation,SNL) 可以導致星形膠質(zhì)細胞自噬流受阻

，此外，利多卡因、鉤吻素子等均可以通過激活星形膠質(zhì)細胞自噬來緩解NP

。

18kDa 轉(zhuǎn)運蛋白 (translocator protein, TSPO) 是一種高度保守的、包含169 個氨基酸的疏水性蛋白，主要定位于線粒體外膜，在類固醇甾體合成相關(guān)的腺體組織中表達較高。我們既往的實驗研究發(fā)現(xiàn)，脊髓背角星形膠質(zhì)細胞中的TSPO 在NP 發(fā)病機制中有重要意義，在脊髓背角主要分布在星形膠質(zhì)細胞，外源性給予TSPO 受體激動劑能產(chǎn)生強效的鎮(zhèn)痛作用，減輕痛覺超敏，縮短機體康復(fù)時間

。其中一條可能的機制是TSPO 激動劑能增強機體內(nèi)源性抗應(yīng)激保護機制，但具體情況仍不甚明了?？紤]到自噬本身就是一種特殊的抗應(yīng)激防御反應(yīng)，并且星形膠質(zhì)細胞的自噬在NP 中研究較少，因此，我們猜想TSPO 受體激動劑可能通過激活星形膠質(zhì)細胞自噬來緩解NP。本研究擬采用大鼠L

SNL 模型觀察術(shù)后脊髓背角星形膠質(zhì)細胞自噬相關(guān)指標的變化，以及鞘內(nèi)注射TSPO 受體激動劑后對其的影響。

方 法

1.實驗動物及分組

成年雄性SD 大鼠，體重180～200 g，由上海交通大學醫(yī)學院附屬新華醫(yī)院動物房提供（動物倫理審批號：XHEC-F-2021-009）。該實驗分為兩部分，第一部分將大鼠按隨機數(shù)字表法分為三組（每組12 只），假手術(shù)組（Sham 組）：暴露神經(jīng)但不結(jié)扎；對照組（SNL 組）：結(jié)扎L

脊神經(jīng)；TSPO 受體激動劑Ro5-4864 處理組（Ro 組）：結(jié)扎L

脊神經(jīng)后第3 天（D3）開始鞘內(nèi)注射Ro5-4864 連續(xù)3 天。第二部分將SNL術(shù)后大鼠隨機分為兩組（每組9只），TSPO 受體激動劑Ro5-4864 處理組（Ro 組）：結(jié)扎L

脊神經(jīng)后第3 天(D3)開始鞘內(nèi)注射Ro5-4864連續(xù)3 天；自噬誘導劑Rapamycin 處理組（Rap 組）：結(jié)扎L

脊神經(jīng)后第3 天開始鞘內(nèi)注射Rapamycin連續(xù)3 天。

第一部分實驗選取雄性SD 大鼠共36 只隨機分為三組，其中行為學觀察總長14 天（每組6 只），分別于術(shù)后D7和D14兩個時間點處死動物并取材（其中每個時間點3 只用于蛋白印跡檢測，3 只用于免疫熒光檢測）。第二部分實驗選取SNL 術(shù)后雄性SD 大鼠共18 只隨機分為兩組，其中行為學觀察總長14 天（每組6 只），分別于術(shù)后D7 和D14 兩個時間點處死動物并取材進行蛋白印跡檢測（每個時間點每組各3 只，其中D14 為測完行為學后隨機取材3 只）。

2.主要試劑

TSPO 受體激動劑Ro5-4864、自噬誘導劑Rapamycin（分子式C51H79NO13，分子量914.17，已用DMSO 溶解）和二甲基亞砜 (DMSO) 均購自Sigma-Aldrich 公司。Ro5-4864 溶于8%DMSO 中，術(shù)后第3 天開始連續(xù)鞘內(nèi)給藥3 天，每日2 μg（濃度0.2 μg/μl，體積10 μl）；Rapamycin 溶于8.72%DMSO 中，術(shù)后第3 天開始連續(xù)鞘內(nèi)給藥3 天，每日4 μg（濃度0.4 μg/μl，體積10 μl）；假手術(shù)組和SNL 組給同等劑量的8.72%DMSO。

3. SNL 模型的建立

夏冰從書房退出來，穿過旁邊那道門，左拐進入后花園。月季的香味兒混在夜霧里，浮在空氣中。只有在寂靜的夜里，花的香味兒才如此純凈，如此濃郁。夏冰有一些陶醉了，但很快想起自己并不是來賞花的。他打算明天晚上再來。穿過后花園，有一道小門，通往河邊。他準備從小門翻出去。

2%戊巴比妥鈉40 mg/kg 腹腔注射麻醉（注射前應(yīng)進行回抽，無血液回流即可注入麻醉藥，角膜反射消失為麻醉滿意標準），取俯臥位，固定四肢和頭部于手術(shù)臺上，用剃毛機對手術(shù)部位進行備皮，用碘伏消毒皮膚，在平大鼠髂棘（L

棘突間隙）背部正中偏左切開皮膚，大約2～3 cm，鈍性分離腰椎左側(cè)的椎旁肌肉，分離肌肉后暴露L

橫突，用彎剪剪掉L

橫突（注意剪刀開口緊貼橫突，防止剪斷神經(jīng)），繼續(xù)鈍性分離，充分暴露L

，用5-0絲線行L

脊神經(jīng)結(jié)扎，sham 組僅暴露神經(jīng)即可，然后逐層縫合肌肉和皮膚。手術(shù)過程均保持在無菌條件下進行，手術(shù)時間約20～30 min。

4.鞘內(nèi)注射

2%戊巴比妥鈉40 mg/kg 腹腔注射麻醉，取俯臥位，為了使椎間隙盡量分開以便穿刺給藥，在大鼠腹部墊支撐物。在平大鼠髂棘L

間隙用10 μl 尖頭微量進樣器進行椎管穿刺，大鼠出現(xiàn)突然地側(cè)向甩尾說明穿刺成功，注射藥物后暫停幾秒拔出微量進樣器。Ro 組給予Ro5-4864 2 μg/10 μl (DMSO 濃度8%)，Rap 組給予RAPA 4 μg/10 μl（DMSO 濃度8.72%），假手術(shù)組和SNL 手術(shù)組給予相同體積相同濃度的DMSO。

5.行為學分析

（1）一般行為變化：實驗過程中，在每個時間點觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、皮毛光澤程度、鼻腔是否出血、飲食情況、大小便情況。SNL 模型后觀察傷口愈合情況，有無傷口裂開、化膿、感染等情況。重點觀察術(shù)前和術(shù)后大鼠姿勢、步態(tài)，走路協(xié)調(diào)情況，左側(cè)后爪是否畸形、外翻，是否拖足，是否有舔、咬、劇烈抖動左側(cè)后爪等現(xiàn)象。

（2）50%機械縮足反射閾值 (50% mechanical withdrawal threshold, 50% MWT）測定

采用的Up-Down 方法測量并計算50% MWT。測量時間為術(shù)前(D0)、術(shù)后第1 天(D1)、術(shù)后第3天(D3)、術(shù)后第7 天(D7)、術(shù)后第14 天(D14)。將確認好組別、編號的大鼠放置于金屬網(wǎng)上的盒中，等待15～30 min，直到大鼠對陌生的環(huán)境保持安靜（不對籠子進行探索，不自我舔舐），采用不同折力的

Frey 作用于大鼠左側(cè)掌跖部無毛處，

Frey 呈“S”型或“C”型，作用時間為6～8 s（參考文獻有的2～3 s，有的6～8 s，如果出現(xiàn)陽性快速抬足只需2～3 s，但陰性或出現(xiàn)舔足需要保持時間稍微長一點），相鄰間隔至少7 s，出現(xiàn)快速抬足或者舔足記為陽性反應(yīng)。首先用2.0 g 的纖維絲開始刺激，若為陰性則選用刺激強度遞增的相鄰纖維絲刺激；若為陽性則選用刺激強度遞減的相鄰纖維絲刺激，反復(fù)測量，根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果確定測量最大纖維絲為26 g，最小為0.4 g，采用的Up-Down 方法推算閾值并計算50% MWT。

收入：丈夫每月能掙28美元。婆婆每月從前述賣房資金中獲得8美元。丈夫在賣房的資金中也分得一份，但是他把錢用于支付與前妻的婚禮和前妻的葬禮，以及用于與現(xiàn)任妻子的婚禮等費用。

6. Western Blot 檢測

為進一步觀察自噬蛋白含量變化，進行了Western Blot 檢測，結(jié)果顯示：與Sham 組相比，SNL 組Beclin1、LC3II 及LC3-II/LC3-I 在D7、D14顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（

＜ 0.01，見圖3A, B），SNL 組p62 在D7、D14 升高（

＜ 0.01，見圖3C）。與SNL 組相比，Ro 組Beclin1、LC3-II、LC3-II/LC3-I在D7 顯著升高（

＜ 0.01，見圖3A, B），Ro 組Beclin1 在D14 升高（

＜ 0.05，見圖3A），Ro 組LC3-II 在D14 升高（

＜ 0.01，見圖3B）；Ro 組p62在D14 顯著降低（

＜ 0.01，見圖3C）。

7.免疫熒光

TSPO 廣泛存在于體內(nèi)各種組織中，在與類固醇合成相關(guān)的腺體分泌組織中表達水平較高（如腎上腺，性腺，腦細胞），并介導膽固醇從線粒體外轉(zhuǎn)運到線粒體內(nèi)，這是類固醇及神經(jīng)甾體合成的限速步驟

。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，正常生理狀態(tài)下TSPO 的含量很少，主要分布在神經(jīng)膠質(zhì)細胞（星形膠質(zhì)細胞與小膠質(zhì)細胞）和少量神經(jīng)元中。我們既往的實驗也證明TSPO 參與了神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)控，在脊髓背角主要分布于星形膠質(zhì)細胞，鞘內(nèi)單次注射TSPO 受體激動劑Ro5-4864 即可明顯減輕痛覺超敏，可能的機制包括增加類固醇激素的合成

、減輕損傷信號從星形膠質(zhì)細胞到神經(jīng)元的傳導以及激活機體的內(nèi)源性保護機制

等，但具體機制還有待繼續(xù)研究。有研究證實神經(jīng)甾體類激素可以激活星形膠質(zhì)細胞的自噬

。此外，有研究表明TSPO 結(jié)構(gòu)中包含了與自噬相關(guān)的基因ATG8（即LC3）的結(jié)構(gòu)域

。因此，我們猜測TSPO 可能通過激活自噬來緩解神經(jīng)病理性疼痛。因此在本實驗中，我們選取了LC3、Beclin1 和p62 作為檢測自噬的主要指標，LC3 又分為LC3I 和LC3II，LC3II 在自噬的發(fā)生中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，被認為是檢測自噬的最重要指標。本實驗結(jié)果顯示， SNL 造模后D7、D14 兩個時間點，SNL 組在D7、D14 脊髓Beclin1、LC3 Ⅱ表達增加，p62 表達增加，表明SNL 本身作為一種損傷刺激會激發(fā)自噬現(xiàn)象，但p62 的增加提示自噬降解過程抑制，自噬流受阻。這與先前的許多實驗結(jié)果類似，Chen 等

發(fā)現(xiàn)CCI 模型會導致自噬流受阻；Liu 等

在綜述中總結(jié)了不同模型導致的NP 中發(fā)生的自噬障礙。而鞘內(nèi)注射Ro5-4864 后SNL 大鼠在D14 脊髓Beclin1、LC3II 增加并大于D7，p62 明顯降低，提示脊髓自噬明顯增加，自噬流過程順暢。LC3 在脊髓背角的免疫熒光強度與蛋白印跡結(jié)果一致。此外，LC3 與星形膠質(zhì)細胞標志蛋白GFAP 共染顯示，SNL 模型脊髓背角星形膠質(zhì)細胞自噬增強，鞘內(nèi)給藥Ro5-4864 后脊髓背角星形膠質(zhì)細胞自噬更強，以上結(jié)果與我們猜測一致，TSPO 可能通過激活脊髓背角星形膠質(zhì)細胞自噬來緩解神經(jīng)病理性疼痛。

8.統(tǒng)計學分析

本研究發(fā)現(xiàn)SNL 可以引起大鼠發(fā)生神經(jīng)病理性疼痛的同時誘發(fā)脊髓背角星形膠質(zhì)細胞自噬激活，鞘內(nèi)注射TSPO 受體激動劑Ro5-4864 可以降低大鼠痛覺超敏，脊髓背角星形膠質(zhì)細胞的保護性自噬增加強化，其中機制可能與激活線粒體PGC-1α相關(guān)通路有關(guān)。

為了進一步觀察TSPO 受體激動劑Ro5-4864的作用，采用了經(jīng)典的自噬誘導劑Rapamycin 與Ro5-4864 進行對比，試圖比較兩者在鎮(zhèn)痛和對自噬蛋白表達影響上是否作用相當。SNL 術(shù)后第3 天對大鼠連續(xù)鞘內(nèi)注射TSPO 受體激動劑（每日2 μg，連續(xù)3 天）或Rapamycin（每日4 μg，連續(xù)3 天）。與Ro 組相比，Rap 組50% MWT 在D7 低于Ro 組，差異有統(tǒng)計學意義（

＜ 0.01，見圖5A）。Western Blot 檢測自噬蛋白顯示，與Ro 組相比，Rap 組Beclin1 在D7 差異無統(tǒng)計學意義(

= 0.338)，D14降低差異有統(tǒng)計學意義（

＜ 0.01，見圖5B）；Rap組LC3-II 及LC3-II/LC3-I 在D7、D14 均降低（

＜0.01，見圖5C）。

結(jié) 果

1.一般行為學變化

SNL 術(shù)后大鼠精神狀態(tài)尚可，皮毛逐漸變黃及愈發(fā)無光澤，術(shù)后1 天部分大鼠出現(xiàn)鼻腔出血（術(shù)后1天大鼠可能出現(xiàn)打架、舔咬傷口等情況，會出現(xiàn)鼻子有血的情況，但之后會恢復(fù)正常，如未恢復(fù)正常，則需要剔除）之后恢復(fù)正常，體重增長減慢，飲食飲水減少，大小便正常。術(shù)后3 天左右大鼠自行咬掉縫線，傷口無裂開、化膿、感染等情況。術(shù)后大鼠左側(cè)后足自發(fā)性抬起，后爪足趾并攏外翻，避免患肢著地，無拖足現(xiàn)象，有時出現(xiàn)舔、咬、劇烈抖動患肢的現(xiàn)象。隨著時間延長，術(shù)后大鼠狀態(tài)有所改善。

2.第一部分實驗結(jié)果

（1）鞘內(nèi)注射TSPO 受體激動劑Ro5-4864對SNL 大鼠機械痛閾的影響：SNL 組從術(shù)后第1天開始，直到本實驗觀察結(jié)束（即術(shù)后第14 天）50% MWT 顯著降低，術(shù)后第7 天降到最低，與Sham組相比差異有統(tǒng)計學意義（

＜ 0.01，見圖1）。SNL 術(shù)后第3 天開始連續(xù)鞘內(nèi)注射TSPO 受體激動劑Ro5-4864 每日2 μg，共3 天。Ro 組在術(shù)后第7 天、術(shù)后第14 天50% MWT 顯著升高，與SNL 組相比差異有統(tǒng)計學意義（

＜ 0.01，見圖1）。

社會工作者用于給予病人的金錢猶如藥物對于醫(yī)生一樣——是治療中頗具價值的援助措施。如果沒有社會工作者來管理金錢和提供其他方式的幫助，或者是沒有醫(yī)生開具的處方藥物和提供的其他治療，單純是藥物或是金錢本身，情況要遠比不足夠更加糟糕。社會工作者最主要的訓練需求是發(fā)現(xiàn)、識別、研究和處理問題。

（2）鞘內(nèi)注射TSPO 受體激動劑 Ro5-4864 對SNL 大鼠脊髓自噬相關(guān)蛋白的影響：首先采用免疫熒光的方法對脊髓背角LC3 熒光強度的時像變化進行了觀察，結(jié)果顯示：相比Sham 組，SNL 組D7、D14 增強；相比SNL 組，Ro 組D7、D14 增強（見圖2A）。為了進一步觀察脊髓背角星形膠質(zhì)細胞發(fā)生自噬的情況，我們采用LC3 與星形膠質(zhì)細胞標記物GFAP 共染的方法，結(jié)果顯示：與Sham 組相比，SNL組星形膠質(zhì)細胞和LC3 共染增多；與SNL 組相比，Ro 組星形膠質(zhì)細胞和LC3 共染增多（見圖2B）。

2%戊巴比妥鈉40 mg/kg 腹腔注射麻醉，放血處死大鼠，咬骨鉗分離椎板，迅速取出L

、L

脊髓，液氮速凍后放入-80℃冰箱保存。各樣本稱取等量組織標本，按比例加入裂解液和蛋白酶抑制劑，然后組織碾磨，12,000 r/min、4℃離心10 min，取上清液，BCA 法測定蛋白濃度。將20 μg/well 總蛋白加入SDS 上樣緩沖液，100℃變性10 min。采用 12.5%十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate -poly-acrylamide gel electrop horesis, SDS-PAGE)，蛋白轉(zhuǎn)至0.45 μm PVDF 膜，轉(zhuǎn)膜時恒流 300 mA，轉(zhuǎn)膜時間根據(jù)所需蛋白來定（LC3 25 min，其他蛋白60 min）?？焖俜忾]液封閉15 min，抗LC3A/B 抗體（兔源，1:1000，Cell Signaling Technology, 美國）、抗Beclin1 抗體（兔源，1:1000，Cell Signaling Technology, 美國）、抗p62抗體（兔源，1:1000，Cell Signaling Technology, 美國）、抗actin 抗體（兔源，1:1000，Cell Signaling Technology, 美國）、抗PGC-1α 抗體（兔源，1:1000，abcam），4℃搖床孵育過夜。TBST 沖洗10 min×3 次，辣根過氧化物酶標記二抗（1:1000，碧云天，中國），室溫孵育1 h，TBST 沖洗10 min×3 次，ECL 顯色曝光。結(jié)果用目的蛋白與內(nèi)參的灰度比值代表目的蛋白的相對表達量。

（3）鞘內(nèi)注射TSPO 受體激動劑 Ro5-4864 對SNL 大鼠脊髓PGC-1α 蛋白的影響：PGC-1α 及其下游的多種轉(zhuǎn)錄因子被證實是線粒體動態(tài)調(diào)節(jié)的關(guān)鍵要素，并在細胞自噬和線粒體自噬中都起著重要作用。結(jié)果顯示，與Sham 組相比，SNL 組D7、D14 PGC-1α 蛋白降低，Ro 組D7、D14 PGC-1α 蛋白升高，差異有統(tǒng)計學意義（

＜ 0.01, 見圖4）；與SNL 組相比，Ro 組在D7、D14 PGC-1α 蛋白升高（

＜ 0.01，見圖4）。

3. 第二部分實驗結(jié)果

教學的意義在于使學生擁有終身發(fā)展，并且適應(yīng)社會的知識儲備以及能力。利用網(wǎng)絡(luò)的發(fā)展與高中物理教學相結(jié)合，能夠有效提升學生對于社會科技發(fā)展的敏感度，這對于學生個人未來發(fā)展具有重要意義。同時，多樣化的網(wǎng)絡(luò)技術(shù)也產(chǎn)生了各具風格和內(nèi)涵軟件平臺，可以有效改善一些現(xiàn)實的限制，諸如試驗的設(shè)備等，也可以增強教師與學生和家長的聯(lián)系，使教學活動范圍從局限于學校，到建立真正的學校家庭學習體系，更重要的是教師可以從新利用這些平臺，實現(xiàn)對學生多方面能力的綜合培養(yǎng)。

討 論

第一部分各組動物分別在D7、D14 取材，麻醉之后開胸經(jīng)左心室先灌注生理鹽水，再灌注4%多聚甲醛進行全身固定，取出L

、L

脊髓放入4%多聚甲醛進行后固定，石蠟包埋制作切片。石蠟切片進行脫蠟，脫蠟后放入pH = 6.0 的檸檬酸抗原修復(fù)液中進行抗原修復(fù)，在圈內(nèi)滴加BSA 孵育30 min。在切片上滴加PBS 稀釋好的一抗（Sham、SNL、Ro 組單染D7、D14 只加入LC3 抗體，Sham、SNL、Ro組雙染D14 天加入LC3 與GFAP 的混合抗體），4℃孵育過夜。pH = 7.4 的PBS 洗滌5 min × 3 次，加入相應(yīng)種屬的二抗，避光室溫孵育50 min。pH = 7.4 的PBS 洗滌5 min×3 次，圈內(nèi)加入熒光淬滅劑5 min，流水沖洗20 min。封片，使用熒光顯微鏡掃描拍照。

巖鷹有啄食巖石的習慣。據(jù)說，它們的喙像鋼鉤一樣堅硬，并且能夠不停地生長，為了讓喙保持在一個合適的長度，它們每天都會啄食堅硬的石體。食進去的巖石，經(jīng)它們的胃腐蝕消化，再與其他排泄物一并排除，便成了“石蛻”。這是制作桑料的關(guān)鍵材料，有了它們的加入，即使在最狂烈的山風下，桑煙也不偏不搖，直直向上，將云浮人的信愿準確地傳達給神明。

過氧化物酶體增殖活化受體γ 輔助活化因子1α(α subunit of peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1, PGC-1α) 是PGC-1 家族的成員之一，是與能量代謝關(guān)系密切的轉(zhuǎn)錄輔助活化因子。PGC-1α 及其下游的多種轉(zhuǎn)錄因子被證實是線粒體動態(tài)調(diào)節(jié)的關(guān)鍵要素，并在細胞自噬和線粒體自噬中都有重要作用

。既往的研究表明，激活PGC-1α對亨廷頓舞蹈癥小鼠和糖尿病外周神經(jīng)病變大鼠有神經(jīng)保護作用

。本研究發(fā)現(xiàn)，SNL 會降低大鼠脊髓背角PGC-1α 的表達，這與神經(jīng)病理性疼痛可以導致PGC-1α 蛋白降低一致

。相比SNL 組同一時間點，Ro 組PGC-1α 在D7 和D14 活化，提示鞘內(nèi)注射Ro5-4864 可能通過激活PGC-1α 相關(guān)通路來激活自噬和緩解NP。TSPO 激動劑是否可以通過激活PGC-1α 來上調(diào)多種下游的核轉(zhuǎn)錄因子來調(diào)控自噬的發(fā)生，需要我們后期進一步研究證實。

為了再次驗證TSPO 受體激動劑的作用，在第二部分實驗中采用了經(jīng)典的自噬誘導劑Rapamycin與之進行了比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Rapamycin 也有類似的鎮(zhèn)痛作用但是效果不如Ro5-4864, Beclin1 和LC3 的變化趨勢與Ro5-4864 接近，但效果也比Ro 略差。導致兩者差異的其中原因尚不完全明確，推測可能的一個原因在于TSPO 受體激動劑的治療效果是多重機制的，因此激活星形膠質(zhì)細胞保護性自噬只是眾多機制之一。近年來，許多研究都關(guān)注于TSPO在NP 中是如何發(fā)揮作用的。有研究認為，TSPO 配體可以促進類固醇的合成

，此外，蘇穎等

研究結(jié)果顯示，孕酮通過調(diào)節(jié)DRG、SDH 與生殖內(nèi)分泌靶器官睪丸和疼痛相關(guān)區(qū)域腺苷信號通路的上游信號和下游信號來緩解大鼠NP，初步認為TSPO可能通過增加類固醇的合成來緩解NP。NP 發(fā)生與線粒體有一定的關(guān)系，有研究認為TSPO 可以調(diào)節(jié)線粒體功能

，那么TSPO 可能通過調(diào)節(jié)線粒體功能來緩解NP。NP 的發(fā)生也可能與神經(jīng)炎癥反應(yīng)有關(guān)，TSPO 被廣泛用于PET/SPECT 成像作為神經(jīng)發(fā)炎的標志

，TSPO 受體激動劑Ro5-4864 可以降低TNF-α 水平，一定程度緩解炎癥因子的升高

。近年來TSPO 配體作為示蹤劑可以通過PET-CT來檢測神經(jīng)系統(tǒng)中TSPO 的表達，并且已經(jīng)進入臨床試驗階段，為神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷、治療提供依據(jù)

。其他更為詳細的機制還需要后期進一步的研究去發(fā)現(xiàn)和證實。

查爾森合并癥指數(shù)是一種簡單、快捷評價患者基礎(chǔ)疾病嚴重程度的評分系統(tǒng)，由查爾森于1987年提出，包含19種常見基礎(chǔ)疾病，每種疾病的危險程度以分數(shù)的形式進行量化，使用方便，可在患者入院詢問病史后快速得出，也可直接從病歷資料中計算得出[11]。目前許多研究已表明，合并癥對癌癥患者生存率及預(yù)后有明顯影響，盡管國外已有多篇文獻報道應(yīng)用CCI對前列腺癌手術(shù)預(yù)后進行預(yù)測[14-15]，但國內(nèi)應(yīng)用CCI預(yù)測前列腺癌根治術(shù)后患者預(yù)后的研究還較少。

從教育屬性看，“教育具有上層建筑與生產(chǎn)力的雙重屬性與雙重職能” [8]81-86。對高職院校來說，人才培養(yǎng)的思想性和技術(shù)技能的應(yīng)用性至關(guān)重要。要把握辦學定位，遵循高職辦學規(guī)律，“踐行以學生為主體、以實踐為主線、以提高實踐能力為目的的職業(yè)教育辦學宗旨”[9]。

綜上所述，本研究證實在SNL 大鼠急性期給予TSPO 受體激動劑Ro5-4864 可能通過上調(diào)PGC-1α相關(guān)通路來激活脊髓背角星形膠質(zhì)細胞的保護性自噬，從而緩解NP。TSPO 在NP 中發(fā)揮著重要作用，作為NP 診斷和治療的潛在靶蛋白，為NP 的診斷和治療提供了新的思路。

利益沖突聲明：作者聲明本文無利益沖突。

[1] Treede RD, Rief W, Barke A,

. Chronic pain as a symptom or a disease: the IASP classification of chronic pain for the international classification of diseases (ICD-11)[J]. Pain, 2019, 160(1):19-27.

[2] Cavalli E, Mammana S, Nicoletti F,

. The neuropathic pain: an overview of the current treatment and future therapeutic approaches[J]. Int J Immunopathol Pharmacol,2019, 33: 2058738419838383.

[3] Gabryel B, Kost A, Kasprowska D,

. AMP-activated protein kinase is involved in induction of protective autophagy in astrocytes exposed to oxygen-glucose deprivation[J]. Cell Biol Int, 2017, 41(8):928-931.

[4] 李建. 星形膠質(zhì)細胞自噬在神經(jīng)病理性疼痛中的作用及機制研究[D]. 上海:第二軍醫(yī)大學, 2017.

[5] 金桂林, 何賽娣, 洪麗綿, 等. 鉤吻素子抗大鼠神經(jīng)病理性疼痛及對星形膠質(zhì)細胞活化和自噬的作用[J].中國藥理學與毒理學雜志, 2018, 32(9):719.

[6] Yuan J, Fei Y. Lidocaine activates autophagy of astrocytes and ameliorates chronic constriction injury induced neuropathic pain[J]. J Biochem, 2021, 170(1):25-31.

[7] Liu X, Liu H, Xu S,

. Spinal translocator protein alleviates chronic neuropathic pain behavior and modulates spinal astrocyte-neuronal function in rats with L

spinal nerve ligation model[J]. Pain, 2016, 157(1):103-116.

[8] Pspsdopoulos V, Baraldi M, Guilarte TR,

. Translocator protein (18kDa): new nomenclature for the peripheral-type benzodiazepine receptor based on its structure and molecular function[J]. Trends Pharmacol Sci, 2006, 27(8): 402-409.

[9] Pozzo ED, Tremolanti C, Costa B,

. Microglial pro-inflammatory and anti-inflammatory phenotypes are modulated by translocator protein activation[J]. Int J Mol Sci, 2019, 20(18):4467.

[10] Zhang M, Liu J, Zhou MM,

. Elevated neurosteroids in the lateral thalamus relieve neuropathic pain in rats with spared nerve injury[J]. Neurosci Bull, 2016,32(4): 311-322.

[11] Hong Y, Liu Y, Zhang G,

. Progesterone suppresses Aβ (42)-induced neuroinflammation by enhancing autophagy in astrocytes[J] . Int Immunopharmacol, 2018,54:336-343.

[12] Shoshan-barmatz V, Pittala S, Mizrachi D. VDAC1 and the TSPO: expression, Interactions, and associated functions in health and disease states[J]. Int J Mol Sci,2019, 20(13):3348.

[13] Chen JY, Huang Z, Xiao PY,

. Local uncoordinated gene 5H2 contributes to nerve injury-induced mechanical allodynia associated to its role in autophagy[J]. Clin Exp Pharmacol Physiol, 2021, 48(3):361-369.

[14] Liu X, Zhu M, Ju Y,

. Autophagy dysfunction in neuropathic pain[J]. Neuropeptides, 2019, 75:41-48.

[15] Scarpulla RC, Vega RB, Kelly DP. Transcriptional integration of mitochondrial biogenesis[J]. Trends Endocrinol Metab, 2012, 23(9): 459-466.

[16] Jin J, Albertz J, Guo Z,

. Neuroprotective effects of PPAR-γ agonist rosiglitazone in N171-82Q mouse model of Huntington's disease[J]. J Neurochem, 2013,125(3): 410-419.

[17] Zhang Q, Song W, Zhao B,

. Quercetin attenuates diabetic peripheral neuropathy by correcting mitochondrial abnormality via activation of AMPK/PGC-1α pathway in vivo and in vitro[J]. Front Neurosci, 2021,15:636172.

[18] Chung JY, Chen H, Papadopoulos V,

. Cholesterol accumulation, lipid droplet formation, and steroid production in Leydig cells: role of translocator protein(18-kDa)[J]. Andrology, 2020, 8(3): 719-730.

[19] 蘇穎, 胡志妍, 賈改麗, 等. 孕酮調(diào)節(jié)腺苷信號通路緩解大鼠神經(jīng)病理性疼痛[J]. 中國疼痛醫(yī)學雜志,2020, 26(4):256-264.

[20] Fu Y, Wang D, Wang H,

. TSPO deficiency induces mitochondrial dysfunction, leading to hypoxia, angiogenesis, and a growth-promoting metabolic shift toward glycolysis in glioblastoma[J]. Neuro Oncol, 2020,22(2): 240-252.

[21] Betlazar C, Middleton RJ, Banati R,

. The translocator protein (TSPO) in mitochondrial bioenergetics and immune processes[J]. Cells, 2020, 9(2):512.

[22] Tournier BB, Tsartsalis S, Ceyzériat K,

. In vivo TSPO signal and neuroinflammation in alzheimer's disease[J]. Cells, 2020, 9(9):1941.

[23] 周牮. 轉(zhuǎn)運蛋白配體Ro5-4864 對蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中炎癥反應(yīng)的影響[D]. 四川:西南醫(yī)科大學, 2019.

[24] Dimitrova-shumkovska J, Krstanoski L, Veenman L.Diagnostic and therapeutic potential of TSPO studies regarding neurodegenerative diseases, Psychiatric disorders, Alcohol use disorders, Traumatic brain injury,and Stroke: an update[J]. Cells, 2020, 9(4): 870.

[25] Sridharan S, Raffel J, Nandoskar A,

. Confirmation of specific binding of the 18-kDa translocator protein(TSPO) radioligand [(18)F] GE-180: a blocking study using XBD173 in multiple sclerosis normal appearing white and grey matter[J]. Mol Imaging Biol, 2019,21(5):935-944.