王 衡，林惠瑩，孫倩倩，馬玉芳，李 健*

(1.福建農(nóng)林大學(xué) 福建省獸醫(yī)中藥與動(dòng)物保健重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002；2.中西獸醫(yī)結(jié)合與動(dòng)物保健福建省高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002)

蛋雞進(jìn)入產(chǎn)蛋后期，組織器官及生理機(jī)能逐漸衰退，機(jī)體處于亞健康狀態(tài)，極大地影響著蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，使得養(yǎng)殖效益低下。因此，如何延長(zhǎng)集約化養(yǎng)殖條件下蛋雞的產(chǎn)蛋時(shí)間并且提高蛋品質(zhì)，值得深入研究。產(chǎn)蛋后期的蛋雞，一方面生殖器官衰退，特別是卵巢功能減弱導(dǎo)致等級(jí)卵泡形成數(shù)目減少[1]；另一方面，經(jīng)歷了高強(qiáng)度的產(chǎn)蛋高峰，蛋雞脂質(zhì)代謝紊亂，容易在肝臟蓄積，造成肥胖、胰島素抵抗、肝脂肪變性等損害，引起卵黃合成和沉積能力降低[2]，降低產(chǎn)蛋率和蛋品質(zhì)。而生殖系統(tǒng)或肝臟的炎癥、損傷等病變，多數(shù)與中醫(yī)的“下焦?jié)駸嶙C”高度相關(guān)[3-6]。

梔子(GardeniajasminoidesEllis)是我國(guó)第1批藥食同源中藥，既能清解下焦?jié)駸?，同時(shí)也是優(yōu)質(zhì)的天然黃色素來源[7]，兼具抑制生殖系統(tǒng)炎癥[8]和改善蛋品質(zhì)[9]兩方面的潛力。本試驗(yàn)通過在飼料中添加不同水平的梔子，研究其對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞在血清生殖激素、肝臟和卵巢相關(guān)基因表達(dá)等方面的影響，探究梔子對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響及其機(jī)制，為進(jìn)一步開發(fā)利用梔子及延長(zhǎng)有效產(chǎn)蛋時(shí)間、提高蛋品質(zhì)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料梔子粉購自百納生物科技(漳州)有限公司，由梔子(GardeniajasminoidesEllis)干燥成熟果實(shí)粉碎制得；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為360日齡健康海蘭褐蛋雞，購自福州閩侯江洋蛋雞場(chǎng)。

1.2 梔子粉中梔子苷含量測(cè)定對(duì)照品溶液：精密稱定梔子苷對(duì)照品7.0 mg，置于50 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，制成質(zhì)量濃度為0.14 g/L的梔子苷溶液。

供試品溶液：分別取梔子粉1.435 3，1.575 3和1.433 0 mg(過四號(hào)篩)，置于25 mL容量瓶中，加入適量甲醇超聲處理30 min，室溫放置至冷卻后定容搖勻，吸取10 mL過濾即可。

色譜條件：Waters 1525-2707半制備液相色譜儀，Waters C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm，柱溫30℃，流動(dòng)相為乙腈∶0.2%磷酸溶液(15∶85)，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。

線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置于10.0 mL容量瓶中，用甲醇定容搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.07，0.14，0.28，0.42，0.56，0.70 g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件測(cè)定，以梔子苷質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算梔子苷峰面積的RSD值。

加樣回收試驗(yàn)：取供試品溶液，分別加入適量梔子苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。

樣品含量測(cè)定：取同一批次不同包裝內(nèi)的梔子粉，按照上述方法制成供試品溶液，進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算梔子苷含量。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及飼養(yǎng)管理選取產(chǎn)蛋后期(360日齡)健康海蘭褐蛋雞144只，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只，對(duì)照組(negative control group，N組)飼喂基礎(chǔ)飼糧(組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1)，3個(gè)試驗(yàn)組(low-dose group、medium-dose group和high-dose group，L、M和H組)分別在基礎(chǔ)飼糧中添加1.0%，1.5%和2.0%的梔子粉。采用3層籠養(yǎng)，每個(gè)重復(fù)由相鄰2籠組成(70 cm×70 cm×40 cm)，每籠6只雞。每天飼喂3次(8:00，14:00和19:00)，自由采食，自由飲水(乳頭式飲水器)，撿蛋2次。機(jī)械通風(fēng)，舍內(nèi)溫度為(22±3)℃，相對(duì)濕度為(60±5)%，自然光照和人工光照相結(jié)合，每日光照16 h(5:00—21:00)。常規(guī)飼養(yǎng)管理及免疫，預(yù)飼2周，試驗(yàn)期8周。

1.4 樣品采集與測(cè)定生產(chǎn)性能測(cè)定：試驗(yàn)期間，每天填寫蛋雞生產(chǎn)記錄表，以重復(fù)為單位，記錄蛋雞的實(shí)存欄數(shù)、產(chǎn)蛋數(shù)，稱量雞蛋總質(zhì)量；記錄每周蛋雞的耗料量；計(jì)算平均產(chǎn)蛋率、平均蛋質(zhì)量和平均日采食量。

平均產(chǎn)蛋率=每天產(chǎn)蛋個(gè)數(shù)/雞存欄數(shù)×100%；平均蛋質(zhì)量=產(chǎn)蛋總質(zhì)量/產(chǎn)蛋數(shù)×100%。

蛋品質(zhì)測(cè)定：在試驗(yàn)第2，4，6，8周末每組選取12個(gè)蛋，將每組取得的蛋樣用游標(biāo)卡尺測(cè)量縱徑與最大橫徑，測(cè)定其蛋形指數(shù)；2人1組于光線充足處觀察蛋殼表面暗斑，依主觀判斷分為4級(jí)：1級(jí)(基本無暗斑)、2級(jí)(暗斑數(shù)量少、直徑小)、3級(jí)(暗斑數(shù)量較多、直徑較大)和4級(jí)(暗斑數(shù)量多、直徑大)，記錄每一級(jí)別蛋數(shù)，重復(fù)上述操作2次；蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀(日本Robot公司)測(cè)定蛋殼強(qiáng)度；蛋品質(zhì)測(cè)定儀(日本Robot公司)檢測(cè)蛋黃顏色、哈夫單位和蛋白高度。

蛋形指數(shù)=縱徑/橫徑；蛋黃比率=蛋黃質(zhì)量/蛋總質(zhì)量×100%。

采血：分別于試驗(yàn)第0，4，8周，早晨飼喂結(jié)束后(9：00—10：00)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取3只雞，用10 mL 注射器翅下靜脈采血，室溫靜置后3 000 r/min離心10 min，將離心管上層血清分裝于1.5 mL的EP管中，-20℃保存，待測(cè)。

采集組織樣品：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，早晨飼喂結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取3只雞常規(guī)處死，采集肝臟和卵巢組織，分為3部分：第1部分經(jīng)液氮速凍后移至-80℃ 保存，第2部分進(jìn)行組織勻漿，第3部分以4%多聚甲醛固定。

血清雌激素水平：由北京華英生物技術(shù)研究所檢測(cè)。

qPCR檢測(cè)：根據(jù)GenBank登錄號(hào)查詢各待測(cè)基因序列，引物由福州白鯨生物科技有限公司合成(經(jīng)PCR擴(kuò)增、瓊脂糖凝膠電泳證實(shí)可用)。引物序列見表2。常規(guī)方法提取RNA，D260/D280及瓊脂糖凝膠電泳證實(shí)其純度和完整性良好。按照HiScript Ⅲ RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)說明書，反轉(zhuǎn)錄cDNA，反轉(zhuǎn)錄體系見表3。每20 μL cDNA模板中加入30～50 μL ddH2O稀釋，用于qPCR反應(yīng)，以SYBR Green Ⅰ為染料對(duì)基因進(jìn)行相對(duì)定量分析(美國(guó)ABI 7500 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀)，qPCR反應(yīng)體系見表4，反應(yīng)條件見表5，結(jié)果以2-ΔΔCt表示。

2 結(jié)果

2.1 梔子粉中梔子苷含量按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，分離度與拖尾因子均達(dá)到要求，對(duì)照品和供試品色譜圖見圖1a、b。梔子苷對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1c，計(jì)算得回歸方程為：y=1E+07x-11 008(R2=0.999)，表明梔子苷在0.07～0.70 g/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。梔子苷峰面積RSD為1.32%，表明檢測(cè)方法精密度較高。加樣回收率均值為98.3%(圖1d)。梔子苷含量平均值為7.405%(圖1e)，符合2020版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定(梔子苷≥1.8%)。

表2 引物序列

表3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系

表4 熒光定量PCR反應(yīng)體系

表5 熒光定量PCR反應(yīng)條件

a.梔子苷對(duì)照品；b.供試品；c.梔子苷對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線；d.梔子苷加樣回收率；e.梔子苷含量

2.2 梔子對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響梔子對(duì)產(chǎn)蛋率的影響結(jié)果見表6。組間日采食量均無顯著性差異(P>0.05)；2.0%梔子組產(chǎn)蛋率提高5.9%，與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)，另外2個(gè)梔子處理組的差異則不顯著(P>0.05)；2.0%梔子組平均蛋質(zhì)量比對(duì)照組提高1.78 g，差異顯著(P<0.05)，另外2個(gè)梔子處理組與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。

表6 梔子對(duì)生產(chǎn)性能的影響

2.3 梔子對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的影響梔子對(duì)蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度和蛋殼質(zhì)量等指標(biāo)的影響，組間無顯著性差異(P>0.05)(圖2a～c)。但是，梔子能顯著減少蛋殼表面暗斑，具體表現(xiàn)在第6，8周時(shí)，梔子處理組中1級(jí)暗斑(基本無暗斑)和2級(jí)暗斑(暗斑數(shù)量少、直徑小)數(shù)量顯著增加(P<0.05 或P<0.01)(圖2d、e)，而3級(jí)暗斑(暗斑數(shù)量較多、直徑較大)和4級(jí)暗斑(暗斑數(shù)量多、直徑大)數(shù)量顯著減少(P<0.05或P<0.01)(圖2f、g)。梔子對(duì)哈夫單位和黏蛋白高度的影響，組間基本沒有顯著性差異，只在第8周時(shí)，2.0%梔子組比空白組有顯著升高(P<0.05)(圖3a、b)。蛋黃比率方面，第4，8周時(shí)，2.0%梔子組較空白組顯著升高(P<0.05)(圖3c)。而梔子對(duì)蛋黃顏色的影響則十分明顯，與空白組相比，1.0%梔子組第6，8周蛋黃顏色顯著增加(P<0.05)；1.5%梔子組第2，4，6周均顯著增加(P<0.05)，第8周時(shí)極顯著增加(P<0.01)；2.0%梔子組第2，4周時(shí)顯著增加(P<0.05)，第6，8周時(shí)極顯著增加(P<0.01)(圖3d)。

a.蛋形指數(shù)；b.蛋殼強(qiáng)度；c.蛋殼質(zhì)量；d.一級(jí)蛋殼暗斑；e.二級(jí)蛋殼暗斑；f.三級(jí)蛋殼暗斑；g.四級(jí)蛋殼暗斑；*.P<0.05，**.P<0.01。下同

2.4 梔子對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清生殖激素的影響第4周時(shí)，空白組E2、FSH、LH水平較0周顯著升高(P<0.05或P<0.01)(圖4a、c、d)，空白組和梔子處理組P4水平無顯著性變化(圖4b)；1.0%梔子組E2、FSH、LH顯著升高(P<0.05或P<0.01)；2.0%梔子組中FSH和LH極顯著升高(P<0.01)。8周時(shí)，空白組E2、P4、LH水平較0周顯著升高(P<0.05或P<0.01)；梔子組血清中E2、P4、FSH和LH水平整體呈升高趨勢(shì)，各梔子組內(nèi)E2、P4、FSH、LH均顯著升高(P<0.05或P<0.01)；其中，E2和FSH水平在1.0%梔子組最高，P4和LH水平在1.5%梔子組較好。

a.雌二醇；b.孕酮；c.促卵泡刺激素；d.促黃體激素

2.5 梔子對(duì)肝臟組織及肝臟中卵黃合成/沉積相關(guān)基因的影響肝臟組織切片顯示，空白組肝臟細(xì)胞排列較為紊亂、間隙不明顯，可見少量壞死區(qū)域；梔子處理對(duì)肝臟組織能起不同程度的保護(hù)作用，其中，1.0% 梔子組細(xì)胞間隙較空白組有輕微改善，但仍有少許空泡變性；1.5%和2.0%梔子組肝臟細(xì)胞排列整齊，未見壞死區(qū)(圖5a)。與空白組相比，1.0%梔子組ApoVLDLⅡ表達(dá)顯著升高(P<0.05)，其他劑量梔子組差異不顯著(P>0.05)，但也表現(xiàn)出升高趨勢(shì)；2.0%梔子組PPARγ和ApoB表達(dá)量顯著升高(P<0.05)；FAS、ACC和SREBP-1c在1.0%和1.5%梔子組中表達(dá)顯著升高(P<0.05或P<0.01)，其中以1.0%梔子組表達(dá)最高；各梔子組中VTGH的表達(dá)較對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果表明梔子能上調(diào)蛋雞肝臟中部分基因的表達(dá)，促進(jìn)脂質(zhì)的合成及轉(zhuǎn)運(yùn)，加快卵黃合成與沉積(圖5d～h)。

a.肝臟組織切片(×100)；b～h.卵黃合成/沉積相關(guān)基因

2.6 梔子對(duì)卵巢組織及卵巢中卵泡發(fā)育相關(guān)基因的影響卵巢組織切片顯示，空白組皮質(zhì)和髓質(zhì)分界不清楚，初級(jí)卵泡和閉鎖卵泡較多；1.0%梔子組次級(jí)卵泡數(shù)量少，且細(xì)胞形態(tài)較扁、??；1.5%和2.0% 梔子組初級(jí)卵泡數(shù)量多，次級(jí)卵泡數(shù)量少，但個(gè)體較大，有多個(gè)明顯的核仁，閉鎖卵泡少(圖6a)。相比空白組，AR基因在1.0%，2.0%梔子組表達(dá)顯著升高(P<0.05)，以2.0%梔子組最高；CYP17、CYP19、ESR2、FSHR、LHR在2.0%梔子組中表達(dá)量顯著升高(P<0.05或P<0.01)，在其余劑量梔子組中也表現(xiàn)出升高趨勢(shì)；各梔子組中ESR1表達(dá)較對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果表明梔子能上調(diào)蛋雞卵巢中部分基因的表達(dá)，調(diào)節(jié)生殖激素的分泌，促進(jìn)卵泡生長(zhǎng)和發(fā)育(圖6b～h)。

a.卵巢組織切片(×100)；b～h.卵泡發(fā)育相關(guān)基因

3 討論

蛋雞進(jìn)入產(chǎn)蛋后期，隨著日齡增加，產(chǎn)蛋率和蛋品質(zhì)均明顯下降，尤其是480日齡以后，產(chǎn)蛋率急劇降低[10]。為緩解這種下降趨勢(shì)，延長(zhǎng)蛋雞有效生產(chǎn)時(shí)間，就需要蛋雞的卵泡發(fā)育和排卵功能維持在正常水平，而卵泡發(fā)育和排卵直接受到生殖相關(guān)激素及其受體表達(dá)水平的調(diào)控[11]。禽類卵泡內(nèi)，孕酮(P4)在卵泡內(nèi)膜層由CYP17催化為雄激素，雄激素再通過旁分泌形式轉(zhuǎn)移至卵泡外膜層，由CYP19催化為雌激素[12]。3種激素互相影響，不斷作用于顆粒層、卵泡內(nèi)膜層和外膜層，促進(jìn)其生長(zhǎng)分化，進(jìn)而調(diào)控卵泡的發(fā)育[13]。另外，家禽超過95%的卵泡會(huì)發(fā)生閉鎖，無法發(fā)育至排卵前卵泡[14]。閉鎖卵泡與正常卵泡相比，促卵泡激素受體(FSHR)和促黃體生成素受體(LHR)基因表達(dá)量極顯著上調(diào)，這對(duì)于閉鎖初期的卵泡而言，可能有助于延緩卵泡閉鎖的進(jìn)程。

應(yīng)用中藥調(diào)控蛋雞生殖相關(guān)激素或其受體表達(dá)的研究，已有一定數(shù)量的報(bào)道，所選用的中藥多屬補(bǔ)益類，這符合傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)“氣血充盈、胞宮得養(yǎng)”的理論。例如，王改琴等[15]應(yīng)用含益母草、甘草、黃芪等的精油植生素治療患輸卵管炎的蛋雞，發(fā)現(xiàn)精油植生素能夠不同程度地提高患輸卵管炎蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，調(diào)節(jié)血清中細(xì)胞因子和E2水平；GUO等[16]研究表明，淫羊藿總黃酮(TFE)能促進(jìn)卵泡顆粒細(xì)胞增殖分化，促進(jìn)激素分泌和卵泡發(fā)育，尤其是可以促進(jìn)分層前和排卵前顆粒細(xì)胞分泌孕酮；張金漢等[17]研究了女貞子、巴戟天、菟絲子等16種補(bǔ)肝益腎類中藥對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、抗氧化指標(biāo)和繁殖激素分泌的影響，發(fā)現(xiàn)這些藥物能不同程度地提高蛋雞生產(chǎn)性能、增強(qiáng)肝腎抗氧化能力、促進(jìn)繁殖激素分泌。

值得注意的是，近期的一些研究發(fā)現(xiàn)，先前認(rèn)為與補(bǔ)益氣血、調(diào)控生殖關(guān)系不大的清熱類中藥或其有效成分，也表現(xiàn)出對(duì)蛋雞卵巢、輸卵管等的保健作用，進(jìn)而發(fā)揮促進(jìn)或維持蛋雞生殖相關(guān)激素或受體表達(dá)的功效，其藥理作用機(jī)制主要涉及抗氧化、抗炎、抗應(yīng)激等。例如，MA等[18]研究表明，表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯能夠通過Keap1-Nrf2-sMaf通路緩解釩誘導(dǎo)的蛋雞肝臟、腎臟和卵巢抗氧化能力降低；姬曉琪等[19]發(fā)現(xiàn)血根堿對(duì)蛋雞輸卵管炎具有預(yù)防和治療作用，可能的機(jī)理是下調(diào)炎性因子IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ的表達(dá)。同樣屬于清熱類中藥的梔子，對(duì)產(chǎn)蛋率的影響，僅見王庭林等[20]報(bào)道飼糧中添加黃梔子對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率有積極作用，但未開展相關(guān)機(jī)制研究。但是，劉興廷等[11]報(bào)道，酚類成分原花青素(GSPE)通過提高卵巢組織抗氧化酶的活性、上調(diào)抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄水平緩解D-gal誘導(dǎo)衰老和自然衰老蛋雞卵巢組織的氧化應(yīng)激，類胡蘿卜素類成分番茄紅素通過激活衰老卵巢組織中Nrf2/HO-1信號(hào)通路，提高衰老蛋雞卵巢組織抗氧化能力，發(fā)揮促進(jìn)增殖和抑制凋亡的作用，從而延緩蛋雞卵巢衰退。而梔子同時(shí)富含酚類成分(3,4-二香草?；臍溥秽?、對(duì)羥基肉桂酸、異阿魏酸等)[21]和類胡蘿卜素類成分[22]，由此推測(cè)，梔子亦可能是通過緩解產(chǎn)蛋后期蛋雞卵巢衰老、減少卵巢氧化應(yīng)激而發(fā)揮本研究觀察到的上調(diào)卵巢AR、CYP17、CYP19、ESR2、FSHR、LHR基因表達(dá)、從而提升血清中E2、P4、FSH、LH等激素水平的作用。具體的作用機(jī)制，值得進(jìn)一步深入研究。

蛋雞自身不能合成類胡蘿卜素，必須從體外獲得，因此蛋黃顏色在很大程度上受飼料成分的影響。與人工合成色素相比，具有著色功能的中藥成分相對(duì)更加安全且具備多元化的保健功效，因此成為這一領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。劉寧等[23]報(bào)道，長(zhǎng)順綠殼蛋雞飼糧添加400 mg/kg的茶多酚(TP)，可顯著提高第4和8周雞蛋的哈夫單位和蛋黃顏色；白建等[24]報(bào)道，海藻粉和蒲公英粉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、免疫功能和蛋品質(zhì)的影響存在協(xié)同效應(yīng)，單獨(dú)添加或協(xié)同添加均能提高海蘭褐蛋雞產(chǎn)蛋率和蛋黃顏色；陳祥宇等[25]報(bào)道，太行雞飼糧中添加100，200和300 mg/kg萬壽菊提取物均可顯著增加蛋黃顏色，添加200和300 mg/kg萬壽菊提取物可顯著提高蛋黃中葉黃素含量。

梔子富含梔子黃色素(gardenia yellow pigment，GYP)[26]，是一種少見的水溶性類胡蘿卜素，易吸收，可作為營(yíng)養(yǎng)型著色劑[27]，其主要化學(xué)成分為藏紅花素(crocin)和藏紅花酸(crocetin)，兩者在水溶液中呈鮮艷的黃色，是產(chǎn)生黃色的有效成分[28]。王先敏等[29]以聚酰胺為梔子黃色素的純化劑，工藝優(yōu)化前后樣品中西紅花苷-Ⅰ，Ⅱ總含量由1.83%提升至25.96%；何國(guó)振等[30]研究了不同成熟期梔子果實(shí)的有效成分積累，發(fā)現(xiàn)西紅花苷-Ⅰ的含量在全青期和全黃期最高；王莉等[31]研究了梔子最佳采收期及聯(lián)合干燥對(duì)其黃色素含量的影響，發(fā)現(xiàn)梔子黃色素含量在結(jié)果后的第20周出現(xiàn)高峰，果殼、果仁、整果中的梔子黃色素吸光值分別達(dá)1.122，1.987，1.738。梔子黃色素在工業(yè)領(lǐng)域的研究和應(yīng)用起步較早[32-33]，而在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用尚處于起步階段。郭振環(huán)等[34]發(fā)現(xiàn)，由梔子和山楂等組成的中藥復(fù)方，能增加蛋黃顏色，效果優(yōu)于化學(xué)色素，還可以提高產(chǎn)蛋率和降低蛋黃粗脂肪含量；范良志[9]用黃梔子為主要成分的中藥復(fù)方添加劑飼喂蛋雞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)哈夫值和蛋黃顏色顯著提高，而蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度等差異不顯著。本試驗(yàn)結(jié)果與之類似，1.5%和2.0%梔子組的蛋黃顏色在試驗(yàn)全程均顯著加深，表明梔子對(duì)蛋黃具有較為可靠的染色效果。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，高劑量梔子組的平均蛋質(zhì)量和哈夫單位均較對(duì)照組顯著提高，但蛋形指數(shù)、蛋殼質(zhì)量等指征蛋殼質(zhì)量的指標(biāo)組間無顯著性差異，可以推知平均蛋質(zhì)量的增加主要是由蛋內(nèi)容物的增加引起的。蛋內(nèi)容物主要由蛋清和蛋黃構(gòu)成。蛋清約占雞蛋質(zhì)量的60%，蛋白質(zhì)約占蛋清的12%[35]。黏蛋白高度和哈夫單位是衡量雞蛋清品質(zhì)的關(guān)鍵指標(biāo)，蛋白越黏稠，蛋白高度和哈夫單位的數(shù)值越大，蛋清品質(zhì)越好[36]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)第8周時(shí)，2.0%梔子組的哈夫單位和黏蛋白高度均顯著高于對(duì)照組，表明飼糧中添加梔子對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞所產(chǎn)雞蛋的蛋清品質(zhì)有提升效果。王曉翠等[35]報(bào)道，綠茶多酚(GTP)能夠顯著改善雞蛋清品質(zhì)，作用機(jī)制為GTP提高輸卵管蛋白分泌部抗氧化功能，增強(qiáng)蛋清高豐度蛋白合成、分泌。而梔子也含有多種抗氧化成分[37-38]，其提升蛋清品質(zhì)的作用機(jī)制是否與GTP類似，值得進(jìn)一步研究。

蛋黃前體物質(zhì)主要在肝臟合成，蛋禽肝臟合成的脂肪大部分以極低密度脂蛋白(VLDL)形式轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外，作為卵黃前體物質(zhì)沉積到卵泡中，在VLDL組裝和釋放的過程中，載脂蛋白B100(Apo-B100)和微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MTP)起主導(dǎo)作用，而apoVLDL-Ⅱ是VLDL的脫輔基蛋白[39]。這一過程主要受PPARs和SREBP-1c的調(diào)控，其中，PPARs的活化會(huì)影響與高密度脂蛋白(HDL)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過程[40]；而SREBP-1c主要調(diào)控脂肪酸和甘油三酯合成，過度表達(dá)將導(dǎo)致非脂肪組織脂質(zhì)沉積聚合，引起組織病變[41]，SREBP-1c的靶基因包括乙酰輔酶A 羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(FAS)等脂肪合成和葡萄糖代謝相關(guān)基因[42]。NAGMELDIN等[43]發(fā)現(xiàn)日糧添加甜菜堿(BET)顯著提高母雞產(chǎn)蛋率，并伴隨肝臟脂質(zhì)合成與轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因ApoVLDL、ApoB、SREBP-1、FAS和ACC的表達(dá)顯著上調(diào)。類似地，本研究發(fā)現(xiàn)飼糧中添加2.0%梔子，一方面顯著提高蛋質(zhì)量和蛋黃比率，另一方面顯著上調(diào)ApoVLDL、ApoB、PPARγ、SREBP-1c、FAS和ACC等肝臟中卵黃合成與沉積相關(guān)基因的表達(dá)，因此推測(cè)這兩方面可能存在因果關(guān)系，從而在增加脂質(zhì)合成的同時(shí)促進(jìn)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，加快卵黃沉積。