張名凱，嚴(yán)華祥，鄒曉庭，顏 瑤，衛(wèi)曉峰，邵剛剛，徐志剛

（1上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，國家家禽工程技術(shù)研究中心，上海201106；2浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，農(nóng)業(yè)部動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)試驗(yàn)室，杭州310058；3上海家禽育種有限公司，上海201419）

雞蛋是人民生活中常見的食物，隨著消費(fèi)者生活水平的提高，對(duì)雞蛋品質(zhì)提出了越來越多的需求，高硒蛋、高碘蛋、高鋅蛋、富維生素蛋、富不飽和脂肪酸蛋等功能性蛋受到消費(fèi)者的普遍歡迎。評(píng)價(jià)雞蛋品質(zhì)的指標(biāo)一般有蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼顏色、蛋黃顏色、蛋黃指數(shù)、蛋白高度和哈氏單位等。近年來，雞蛋暗斑率成為新的雞蛋品質(zhì)指標(biāo)，越來越多的消費(fèi)者開始關(guān)注品牌雞蛋上的暗斑狀態(tài)。

暗斑于1932年由Holst［1］定義，是一種發(fā)生在雞蛋局部或者布滿整個(gè)雞蛋表面的一種淺褐色斑點(diǎn)。暗斑影響雞蛋的美觀，會(huì)使消費(fèi)者產(chǎn)生消費(fèi)顧慮。張銘容等［2］認(rèn)為雞蛋殼暗斑的形成的原因在于：暗斑位置的殼下膜厚度較薄，有更大的網(wǎng)孔，石灰質(zhì)硬蛋殼中的空隙被蛋內(nèi)水分所填充，在宏觀上表現(xiàn)為暗斑的形式；Solomon等［3］認(rèn)為蛋殼乳突層的變異是形成暗斑蛋的根本原因；Wang等［4］的研究表明，矮腳褐殼蛋雞的暗斑蛋的蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、有效層厚度、蛋殼膜厚度極顯著的高于正常雞蛋，而白來航雞純系的暗斑雞蛋和正常雞蛋并沒有顯著性差異；劉繼承等［5］的研究表明，蛋雞輸卵管狹部疾病、應(yīng)激等生理狀態(tài)改變會(huì)促使暗斑的發(fā)生率增加；大腸桿菌和沙門氏菌廣泛存在于雞蛋殼表面［6-7］，暗斑能夠提高蛋殼表面微生物進(jìn)入蛋殼內(nèi)的幾率；Chousalkar等［8］的研究表明暗斑蛋的嚴(yán)重程度與沙門氏菌和大腸桿菌對(duì)蛋殼的滲透作用顯著相關(guān)。

以往的研究多集中在暗斑雞蛋的發(fā)生機(jī)理上，而對(duì)如何避免暗斑雞蛋發(fā)生沒有給出一套詳細(xì)可行的方案。本研究以新楊黑羽蛋雞配套系各品系為材料，通過遺傳背景、營養(yǎng)狀況、儲(chǔ)存條件等途徑調(diào)控雞蛋暗斑的產(chǎn)生，以期降低生產(chǎn)中雞蛋暗斑的發(fā)生率。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選取30周齡、產(chǎn)蛋率相近、體重相近，分布于同一棚舍的新楊黑羽蛋雞配套系的純系、父母代母雞及其商品代，飼養(yǎng)于上海家禽育種公司的華青基地?；A(chǔ)日糧配方見表1，復(fù)合維生素為帝斯曼維生素（上海）有限公司（DSM）生產(chǎn)。全部密閉雞舍飼養(yǎng)，3層階梯式，機(jī)械通風(fēng)，人工照明，自由采食，自由飲水。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Com position and nutrient levels of the basal diet（air-dry basis）

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 不同品種蛋雞的雞蛋暗斑發(fā)生差異

抽樣新楊黑羽蛋雞純系雞和父母代雞35—40周齡雞蛋各180個(gè)，所有母雞采食相同飼料，抽樣雞蛋采自同一天上午8：00—10：30，收集雞蛋后按上海家禽育種有限公司種蛋消毒程序處置后，種蛋庫保存，種蛋庫溫度18℃—20℃，相對(duì)濕度50%—80%。連續(xù)觀察雞蛋暗斑5 d。抽樣測(cè)定2周，每周采集雞蛋1次。

1.2.2 母雞飼喂復(fù)合維生素對(duì)雞蛋暗斑的影響

對(duì)照組飼喂標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別添加250 mg/kg、500 mg/kg、750 mg/kg的復(fù)合維生素。每個(gè)處理組設(shè)5個(gè)重復(fù)，位于棚舍的不同位置，每個(gè)重復(fù)200—292只，總共試驗(yàn)雞數(shù)為5 620只。每天隨機(jī)選取144枚雞蛋進(jìn)行暗斑觀察，預(yù)試期1周，正試期2周。按暗斑蛋的嚴(yán)重程度從低到高分為1、2、3、4、5共五個(gè)等級(jí)，其中1級(jí)表示無暗斑。破蛋、臟蛋不計(jì)入暗斑蛋的觀察數(shù)據(jù)樣本。

1.2.3 雞蛋在不同溫度儲(chǔ)存對(duì)雞蛋暗斑的影響

選取同一批次的新楊黑羽配套系父本貴妃雞的雞蛋275枚，分別儲(chǔ)存于4℃和23℃，相對(duì)濕度為72%的條件下，于4 d后觀察雞蛋暗斑情況。

1.2.4 雞蛋在不同溫度和濕度儲(chǔ)存時(shí)對(duì)雞蛋暗斑的影響

選取同一批次的雞蛋，分別存放于密閉的恒溫恒濕培養(yǎng)箱內(nèi)。溫度分別設(shè)為25℃和21℃，選取相對(duì)濕度60%、75%、90%三個(gè)梯度，時(shí)間設(shè)定為96 h。將儲(chǔ)藏于25℃的恒溫箱外濕度變化的雞蛋作為對(duì)照（即25℃變濕組）。4 d后觀察雞蛋暗斑情況，并記錄恒溫恒濕箱內(nèi)的濕度和溫度。

1.3 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)處理采用Excel 2016軟件，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 24.0軟件，多重比較采用Duncan氏法進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 雞蛋暗斑的等級(jí)評(píng)價(jià)

雞蛋表面出現(xiàn)的暗斑在白光照射時(shí)表現(xiàn)為在暗斑位置出現(xiàn)透光亮點(diǎn)。暗斑點(diǎn)越多，透光亮點(diǎn)越多，暗斑區(qū)域面積越大，透光亮點(diǎn)面積越大。通過白光照射雞蛋進(jìn)行暗斑等級(jí)評(píng)價(jià)，根據(jù)暗斑點(diǎn)的數(shù)量和暗斑點(diǎn)面積大小定義雞蛋暗斑不同的等級(jí)。圖1顯示，1級(jí)雞蛋幾乎沒有透光點(diǎn)，2級(jí)雞蛋的透光點(diǎn)很少，定義1級(jí)為非暗斑雞蛋，2—5級(jí)為暗斑蛋。剛產(chǎn)下的雞蛋沒有透光點(diǎn)，類似圖中1級(jí)蛋。雞蛋在室溫放置一段時(shí)間后，雞蛋與外界發(fā)生氣體交換，隨著時(shí)間延長，部分氣孔直徑增大，但并不顯示明顯的暗斑。

圖1 暗斑等級(jí)評(píng)價(jià)Fig.1 Translucent egg rank evaluation

2.2 暗斑產(chǎn)生時(shí)間分布

60周齡的貴妃雞雞蛋暗斑產(chǎn)生最短時(shí)間是產(chǎn)蛋后2 h，最長是產(chǎn)蛋后96 h，16—24 h為高峰期，暗斑雞蛋主要發(fā)生在產(chǎn)蛋后24 h內(nèi)，96 h后不再有新的暗斑蛋產(chǎn)生。

圖2 貴妃雞暗斑發(fā)生時(shí)間分布Fig.2 Translucent egg occur time distribution of loyal chicken

2.3 蛋雞品種品系對(duì)雞蛋暗斑的影響

由表2可知，同一配套系的不同品系暗斑發(fā)生率存在顯著性差異，貴妃雞蛋的暗斑率最高，達(dá)80%以上，新楊黑羽配套系父母代母雞蛋的暗斑率最低，均不超過50%，新楊黑羽商品代母雞蛋的暗斑發(fā)生率處于父系的貴妃蛋雞和母系的洛島紅雞之間，而洛島紅的A系和B系兩個(gè)純系之間的暗斑發(fā)生率差異不大。

表2 新楊黑羽蛋雞配套系各代次暗斑率調(diào)查Table 2 Survey of translucent eggs ratio of Xinyang black feather layer packages

2.4 復(fù)合維生素對(duì)雞蛋暗斑的影響

由表3可知，飼料中添加250 mg/kg、500 mg/kg和750 mg/kg復(fù)合維生素相比不額外添加復(fù)合維生素（0 mg/kg），雞蛋暗斑發(fā)生率均有下降，分別降低了10.54%、36.32%、29.95%，并且500 mg/kg的復(fù)合維生素為降低雞蛋暗斑的最佳添加量。

表3 復(fù)合維生素對(duì)新楊黑羽蛋雞暗斑的影響Table 3 Effects ofmultivitam in to translucent eggs of Xinyang black feather layer

2.5 不同儲(chǔ)存條件對(duì)雞蛋暗斑的影響

不同儲(chǔ)存條件對(duì)暗斑等級(jí)的分布有不同的影響（圖3），高濕低溫有利于降低暗斑率。溫度恒定，濕度越高其暗斑發(fā)生率越低；并且隨著濕度增加暗斑等級(jí)也有顯著改善，濕度越高，暗斑的等級(jí)越低，暗斑表現(xiàn)的越輕微。

圖3 儲(chǔ)存條件對(duì)暗斑影響Fig.3 The affection of egg storage condition to translucent egg

2.5.1 不同溫度對(duì)雞蛋暗斑的影響

雞蛋儲(chǔ)存于23℃時(shí)，暗斑蛋數(shù)高于保存于4℃時(shí)的暗斑蛋數(shù)。當(dāng)溫度為23℃時(shí)，雞蛋的暗斑率達(dá)到74.28%，當(dāng)雞蛋儲(chǔ)存在4℃時(shí)，雞蛋暗斑發(fā)生率僅為8.40%，兩者差異極顯著（P＜0.01）。

2.5.2 不同濕度對(duì)雞蛋暗斑的影響

相對(duì)濕度較高的條件下，雞蛋暗斑發(fā)生率低于相對(duì)濕度較低的雞蛋暗斑發(fā)生率：相對(duì)濕度為60%、75%、90%的條件下，雞蛋暗斑的發(fā)生率分別為48.15%、28.85%、4.28%?？ǚ綑z驗(yàn)結(jié)果表示濕度對(duì)暗斑蛋個(gè)數(shù)的影響達(dá)極顯著水平（P＜0.01）。

3 討論

3.1 品系對(duì)雞蛋形成暗斑的影響

王德賀等［9］研究表明，暗斑雞蛋更容易在東鄉(xiāng)綠殼蛋雞和農(nóng)大褐殼蛋雞中產(chǎn)生。商品代母雞的暗斑發(fā)生率介于母本和父本之間，表明暗斑在一定程度上受遺傳因素的影響。本試驗(yàn)表明同一蛋雞配套系各品系之間的暗斑發(fā)生率不同，各品系之間存在顯著性差異。不同的品種品系遺傳背景不同，相同的遺傳背景也會(huì)有蛋白質(zhì)不同程度的表達(dá)，因此不同品種品系蛋雞的暗斑發(fā)生率也會(huì)有差異。而控制雞蛋暗斑的分子機(jī)制還需要更多的試驗(yàn)和數(shù)據(jù)來驗(yàn)證。

3.2 營養(yǎng)因素對(duì)雞蛋形成暗斑的影響

聶偉［8］、姜明君［9］研究表明，0.4%非植酸磷日糧可降低雞蛋暗斑的發(fā)生率，日糧中添加地頂孢霉培養(yǎng)物也可以顯著降低暗斑蛋的等級(jí)。本試驗(yàn)表明，蛋雞日糧中添加500mg/kg、750 mg/kg的復(fù)合維生素顯著降低雞蛋暗斑。復(fù)合液體維生素能夠有效促進(jìn)鈣、磷吸收，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提升抗應(yīng)激能力，降低發(fā)病率［10-11］。適宜的維生素濃度能夠增強(qiáng)蛋雞的免疫能力和抗應(yīng)激能力，但是高濃度的維生素并不能改善蛋雞的生理狀態(tài)［12-14］。因此，添加復(fù)合維生素對(duì)于降低雞蛋暗斑的發(fā)生可能與維生素提高蛋雞免疫能力和抗應(yīng)激能力相關(guān)。而蛋雞的免疫力和抗應(yīng)激能力是否與雞蛋暗斑相關(guān)還需進(jìn)一步的研究。

3.3 儲(chǔ)存條件對(duì)雞蛋形成暗斑的影響

研究表明，儲(chǔ)存條件影響雞蛋的品質(zhì)［15-18］。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，4℃條件下保存雞蛋能降低雞蛋暗斑的發(fā)生率，與Chousalkar等［19］的研究結(jié)果一致。水分的改變能夠?qū)е挛矬w的透光度改變，雞蛋暗斑表觀上呈現(xiàn)為蛋殼表面各部分的透光度不同。暗斑蛋內(nèi)容物水分的蒸發(fā)作用在低溫條件下受到抑制，宏觀上表現(xiàn)為暗斑發(fā)生率降低。本研究中，濕度對(duì)于暗斑的影響與Talbot等［20］的研究結(jié)果相反，這可能是由于雞蛋儲(chǔ)存于密閉的容器內(nèi)，氣體流通效率低導(dǎo)致雞蛋水分的蒸發(fā)速率下降，宏觀上表現(xiàn)為雞蛋暗斑的發(fā)生率降低。但是雞蛋內(nèi)容物的水分蒸發(fā)是否與雞蛋暗斑相關(guān)，還需要更多的試驗(yàn)推證。

綜上，降低暗斑的方法主要有：一是生產(chǎn)中可以選擇暗斑蛋產(chǎn)生率較低的配套系飼養(yǎng)，新楊黑羽的暗斑率較其他蛋雞配套系的暗斑率較低，可以作為小型蛋雞的品種選擇。二是配套系內(nèi)各品系進(jìn)行家系選擇，培育出暗斑率更低的品種品系。三是平衡蛋雞的營養(yǎng)，比如添加足量的維生素和微量元素。四是降低雞蛋的儲(chǔ)存溫度。五是提高雞蛋的儲(chǔ)存濕度等。