顧振東

（靖遠(yuǎn)縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測管理站，甘肅 白銀 730600）

雛鴨是整個(gè)養(yǎng)鴨過程的關(guān)鍵，關(guān)系后期鴨生長發(fā)育和生產(chǎn)性能的正常發(fā)揮。由于剛出生的雛鴨體質(zhì)較弱，絨毛少，管理不當(dāng)容易導(dǎo)致雛鴨感染病毒，危害其健康。鴨病毒性肝炎(Duck Virus Hepatitis，DVH)是由鴨肝炎病毒（DHV）引起雛鴨的一種常見傳染病，具有傳播速度快、病程較短、致死率高等特點(diǎn)。該病主要發(fā)生于3周齡以下雛鴨，潛伏期通常為1~2 d，死亡多在發(fā)病后的3~4 d。臨床表現(xiàn)精神沉郁、抽搐、轉(zhuǎn)圈以及角弓反張、全身性痙攣等神經(jīng)癥狀，剖解有肝臟出血、腫脹、膽汁顏色較淡等病理變化。鴨肝炎分布范圍比較廣，在上世紀(jì)50年代有人用雞胚分離出鴨肝炎病毒后，在世界各國逐漸蔓延開來。近年來，鴨肝炎呈大面積流行，部分毒株的毒性大幅增強(qiáng)，抗原性也逐漸發(fā)生變異，發(fā)病率和死亡率明顯提高，嚴(yán)重危害了養(yǎng)鴨業(yè)的健康發(fā)展。因此，探究雛鴨病毒性肝炎有效的具體診斷與治療方法，對防治該疾病具有重要的意義。

1 發(fā)病情況

2021年3 月本縣養(yǎng)殖戶李某從外地購買500羽1周齡的雛鴨，放入提前清掃消毒好的育雛室（用氫氧化鈉2%～3%的水溶液內(nèi)外環(huán)境消毒2次）進(jìn)行飼養(yǎng)。雛鴨到場后用谷殼做墊料，并用4盞遠(yuǎn)紅外線燈保溫，飼喂全價(jià)配合飼料，自由采食。飼養(yǎng)到9日齡時(shí)，發(fā)現(xiàn)部分雛鴨精神萎靡、采食量減少，個(gè)別雛鴨不食、行動(dòng)緩慢，有的出現(xiàn)腹瀉，短短3 d已死亡55羽，另有35余羽患鴨病情嚴(yán)重，眼半閉呈昏迷狀。

2 臨床癥狀

發(fā)病突然，病程短促。病鴨初期主要表現(xiàn)精神萎靡、行動(dòng)遲緩、閉眼蹲伏等癥狀，且走幾步便俯臥在地上，食欲明顯下降。發(fā)病12~24 h，出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)失衡、全身抽搐、倒地、雙腿痙攣、呼吸困難等一系列癥狀，有的患鴨側(cè)頭原地轉(zhuǎn)圈，并在10 min后慢慢死亡；有的病鴨有腹瀉癥狀，排白色或灰綠色稀糞便。

3 病理變化

病理變化主要發(fā)生在肝臟，患鴨肝臟腫大，色暗發(fā)黃，肝表面有不同大小的出血斑點(diǎn)，肝細(xì)胞變性及壞死，同時(shí)肝細(xì)胞脂肪變性。此外，大部分患鴨的腎臟出血、腫脹。

4 診斷

4.1 臨床診斷

該病感染對象主要是雛鴨，尤其是3周齡以下的雛鴨；成年鴨不發(fā)病。雛鴨突然發(fā)病，逐漸精神萎靡，且無法跟群活動(dòng)，大部分病鴨眼睛呈半閉狀態(tài)，嗜睡癥狀明顯。在上述癥狀出現(xiàn)后的1~3 h，病鴨表現(xiàn)運(yùn)動(dòng)失調(diào)，身體會(huì)不由自主的倒向一側(cè)，雙腿出現(xiàn)痙攣性運(yùn)動(dòng)，呈角弓反張。根據(jù)臨床表現(xiàn)結(jié)合肝臟剖解病變，初步診斷為鴨病毒性肝炎。

4.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

既有病毒分離、中和試驗(yàn)等常規(guī)方法，也有瓊脂免疫擴(kuò)散、ELISA方法、膠體金免疫電鏡等免疫學(xué)方法，還有近幾年得到推廣和應(yīng)用的PCR方法，養(yǎng)殖場可以根據(jù)自己的情況選擇合適的診斷方法。

4.2.1 病毒分離 這是實(shí)驗(yàn)室比較常用的方法。可無菌取雛鴨肝臟加適量生理鹽水和青、鏈霉素各500 U研磨制成組織懸液，離心取上清液，經(jīng)尿囊腔接種8~10日齡鴨胚，每胚0.2 mL，繼續(xù)孵育，密切觀察胚體病變和死亡狀況，大約2周內(nèi)接種鴨胚全部死亡，死胚主要表現(xiàn)為皮膚出血、水腫，肝臟腫脹、顏色變暗綠、表面有針尖大的出血斑點(diǎn)[1]；對照組存活。同時(shí)收集上述死亡鴨胚的尿囊液接種10日齡健康雛鴨，24 h內(nèi)雛鴨出現(xiàn)DVH典型癥狀，并能從24~48 h后死亡雛鴨中分離出該病毒。

4.2.2 中和試驗(yàn) 該方法特異性高，是診斷鴨肝炎病毒的經(jīng)典方法。鴨病毒性肝炎病毒可在雞胚上進(jìn)行血清中和試驗(yàn)，雖然該方法復(fù)雜、繁瑣、費(fèi)時(shí)，但在診斷鴨病毒性肝炎的流行病學(xué)調(diào)查和抗體監(jiān)測中仍有切實(shí)的應(yīng)用價(jià)值。王作友等[2]通過雞胚中和試驗(yàn)進(jìn)行鴨病毒性肝炎的抗體水平檢測，試驗(yàn)結(jié)果表明選擇合適的雞胚適應(yīng)毒株對雞胚中和試驗(yàn)非常關(guān)鍵和重要，是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果真實(shí)可靠的基礎(chǔ)。雛鴨中和試驗(yàn)是以易感雛鴨為試驗(yàn)對象，雛鴨感染后的發(fā)病癥狀和病變對確診該病有很大說服力。該方法靈敏度高，判斷準(zhǔn)確，與雞胚中和試驗(yàn)相比，所需周期短，操作相對簡單，但由于鴨個(gè)體之間的差異，對病毒的抵抗力不同，所以重復(fù)性較差。

4.2.3 瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID試驗(yàn)） 該方法敏感性不高，但對試驗(yàn)要求較低，在基層易于推廣，對本病的診斷還是有一定的應(yīng)用價(jià)值。早在1998年，孫泉云等[3]就建立了一種檢測鴨肝炎病毒抗原的AGID方法，該方法不僅能夠在臨床上對本病與鴨黃曲霉毒素中毒、沙門氏菌病等進(jìn)行鑒別診斷，而且具有試驗(yàn)特異性；此外，試驗(yàn)中對病毒抗原的處理方式（病毒材料經(jīng)過氯仿、PEG透析和硫酸銨等方法處理）既避免了雜蛋白干擾又提高了病毒純度，提高了試驗(yàn)的靈敏度，有助于病毒的檢出。

4.2.4 膠體金標(biāo)記免疫電鏡技術(shù) 該技術(shù)是目前應(yīng)用最廣的免疫電鏡技術(shù)是用膠體金顆粒帶負(fù)電的特性吸附抗體，從而將抗體標(biāo)記，再利用其與許多生物大分子共價(jià)結(jié)合作為二抗，用于免疫電鏡負(fù)染技術(shù)檢測相應(yīng)抗原。與直接電鏡觀察相比，膠體金免疫電鏡下的背景雜質(zhì)很少，視野中附著金顆粒的病毒量多且清晰可見，易于辨認(rèn)，定位比酶反應(yīng)物更精確，大大提高了病毒快速診斷的敏感性和特異性。程安春等[4]建立的膠體金免疫電鏡技術(shù)檢測鴨肝炎病毒的效果很理想，具有簡便、快速、靈敏、直觀等特點(diǎn)，可以作為DHV的常規(guī)檢測方法。

4.2.5 SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)（SPA-CoA） SPA（葡萄球菌A蛋白）是金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁上的一種表面蛋白，能與特異性抗體IgG的Fc片段結(jié)合，而不影響Fab片段的活性，所以以SPA作為抗體致敏的載體與相應(yīng)抗原接觸，即出現(xiàn)反向間接凝集反應(yīng)，使結(jié)果更易于觀察。王銘書等[5]用富含A蛋白的金黃色葡萄球菌1800株致敏兔抗DHV IgG，建立了檢測鴨肝炎病毒（DHV）的SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)，試驗(yàn)表明最佳的檢測部位為肝臟（檢出率100%），檢出抗原的最低含量為0.4 mg/mL，雖比Dot-ELISA檢測DHV最低抗原量（0.04453 mg/mL）的敏感性低，但用于臨床及基層獸醫(yī)診斷其敏感性已經(jīng)足夠，此方法簡便、快速、便于推廣應(yīng)用。

4.2.6 ELISA方法 ELISA原理是采用抗原與抗體的特異結(jié)合將被測物質(zhì)與酶標(biāo)抗體進(jìn)行直接或間接結(jié)合，然后通過標(biāo)記酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)進(jìn)行定性和定量分析。但在實(shí)際應(yīng)用中需要根據(jù)抗體抗原的特性設(shè)計(jì)不同的檢測法，如雙抗夾心法、單抗捕捉ELISA法、酶標(biāo)Dot-ELISA[6]、間接ELISA[7]等，這些檢測方法靈敏度比較高、操作便捷、特異性也更強(qiáng)，能夠用于鴨病毒性肝炎臨床病料和抗體的特異性檢測。

4.2.7 PCR 方法 PCR方法具有高度敏感、快速、特異、操作簡單、易標(biāo)準(zhǔn)化等技術(shù)優(yōu)勢，且可以檢測病原體中特異性的核苷酸序列，比常規(guī)診斷方法更能在生產(chǎn)中得到廣泛的推廣和應(yīng)用。目前為了對鴨病毒性肝炎進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的診斷，建立了各種PCR方法，如常規(guī)RT-PCR方法[8]、多重PCR方法[9]、鑒別RT-PCR方法[10]、熒光定量PCR方法[11]等，非常適用于Ⅰ型鴨肝炎病毒（DHV-Ⅰ）臨床大量樣品的快速診斷、鑒別診斷和分子流行病學(xué)的調(diào)查研究。

5 防治措施

5.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

該病的治療目前尚無有效藥物，重在日常預(yù)防。發(fā)病后第一時(shí)間隔離病鴨，與健康鴨分開飼養(yǎng)。處死無治療價(jià)值的病鴨，病死鴨及其污染物一起進(jìn)行無害化處理；對鴨舍內(nèi)外環(huán)境、飼養(yǎng)工具等用3%苛性鈉溶液或0.2%過氧乙酸徹底消毒。保持鴨舍干燥衛(wèi)生、通風(fēng)良好以及溫濕度適宜、飼養(yǎng)密度合理等，更換無污染的新墊料，禁止外來人員隨意進(jìn)入鴨場，盡量減少應(yīng)激因素；同時(shí)給鴨群提供營養(yǎng)豐富的全價(jià)配合飼料和清潔飲水，并在飲水中添加葡萄糖和復(fù)合維生素供其自由飲用。

5.2 主動(dòng)免疫

5.2.1 弱毒疫苗 種鴨：一般在產(chǎn)蛋前1個(gè)月皮下注射1 mL雞胚傳代致弱后制成的DHV疫苗，獲得免疫的種鴨所產(chǎn)種蛋孵出的雛鴨能夠獲取母源抗體保護(hù)，保護(hù)期在2周左右；在10日齡時(shí)對雛鴨加強(qiáng)免疫1次，可取得不錯(cuò)的免疫效果。對沒有母源抗體的雛鴨或母源抗體不明的引入鴨群，可在1日齡接種弱毒疫苗，3~7 d即可產(chǎn)生免疫力，后期根據(jù)實(shí)際情況檢測抗體水平，確定第二次免疫時(shí)間。當(dāng)在某些地區(qū)出現(xiàn)DHV-I變異株，使用標(biāo)準(zhǔn)DHV-I型弱毒疫苗進(jìn)行免疫會(huì)發(fā)現(xiàn)免疫效果并不好，這是因?yàn)椴《咀儺惡笤谘鍖W(xué)上可能存在某些差異，無交叉免疫性。

5.2.2 滅活疫苗 分為雞胚組織滅活苗和鴨胚組織滅活苗。有研究表明，鴨胚滅活苗的免疫效果要明顯好于雞胚滅活苗，但如果鴨沒有進(jìn)行弱毒苗基礎(chǔ)免疫，只免疫了滅活苗，則鴨體內(nèi)的抗體水平會(huì)很低。由于母源抗體的存在會(huì)影響免疫效果，因此沒有母源抗體的雛鴨才可以進(jìn)行免疫；對引入的雛鴨在母源抗體情況不明時(shí)可通過肌肉注射高免血清獲取保護(hù)力。有試驗(yàn)使用鴨漿膜炎、鴨病毒性肝炎二聯(lián)滅活疫苗免疫2周齡雛鴨，結(jié)果顯示該二聯(lián)疫苗對2 周后鴨病毒性肝炎保護(hù)力達(dá)78以上，免疫保護(hù)期可達(dá)12 周以上。

5.3 被動(dòng)免疫

生產(chǎn)上一般是將鴨DVH病毒油乳劑滅活苗接種于雞來獲取特異性卵黃抗體。出殼鴨苗在24~28 h內(nèi)皮下注射鴨病毒性肝炎高免卵黃液或康復(fù)鴨血清（當(dāng)中含有能夠有效中和病毒的抗體），用于治療病鴨或進(jìn)行被動(dòng)免疫，效果良好。有試驗(yàn)報(bào)道，給1日齡雛鴨皮下注射抗鴨病毒性肝炎二價(jià)（Ⅰ＋Ⅲ型）高免抗體，可有效預(yù)防Ⅰ型和Ⅲ型鴨病毒性肝炎。

5.4 中草藥 使用荊防敗毒散（荊介、防風(fēng)、羌活、獨(dú)活、銀花、連召、柴胡、枳 殼、川芎、竹葉、甘草等組成）拌料輔助治療3 d，可獲得很好的治療效果，鴨群死亡停止，病情逐漸好轉(zhuǎn)；或?qū)⒁痍?、龍膽草、黃芩、黃柏、金銀花、板藍(lán)根、梔子、柴胡、防風(fēng)、鉤藤、神曲、荊芥、甘草等13味中藥按比例煎煮兩次，兩次煎液合并濃縮至含生藥0.5 g/L治療鴨病毒性肝炎，其效果與高免卵黃抗體相當(dāng)，而且不易復(fù)發(fā)。

6 體會(huì)

雛鴨病毒性肝炎是一種急性傳染疾病，主要是通過呼吸道以及消化道傳染，可經(jīng)過病鴨的分泌物、被污染的水、飼料用具等進(jìn)行傳播，飼養(yǎng)管理不當(dāng)、鴨群缺乏維生素以及礦物質(zhì)、飼養(yǎng)密度太大、鴨舍環(huán)境潮濕、衛(wèi)生條件比較差等誘發(fā)或加重病情。流行初期，應(yīng)當(dāng)及時(shí)注射高免卵黃液或康復(fù)鴨血清，同時(shí)輔以疏肝理氣、調(diào)整氣血、清熱解毒的中草藥治療，這樣能夠有效預(yù)防感染，并且明顯減少死亡。