權(quán)丹妮，徐 玥，曲 卓，許維恒，張萬年,，莊春林（.寧夏醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,寧夏 銀川 750004；.海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系,上海 00433）

苦豆子（Sophora alopecuroides）為豆科（Leguminosae）槐屬的草本植物，廣泛生長于我國西北地區(qū)。在寧夏境內(nèi)，苦豆子分布面積約為25 余萬公頃，其中，在鹽池縣分布14 萬公頃，占寧夏境內(nèi)苦豆子總分布面積的56%，是寧夏特有的區(qū)域性藥用植物[1]?？喽棺泳哂星鍩峤舛?、抗菌消炎的藥理作用，臨床上用于治療痢疾、外傷化膿、頑癬等疾病[2]。近年來，隨著對苦豆子主要活性成分生物堿的廣泛研究，發(fā)現(xiàn)其具有緩解肝損傷、抗肝纖維化和抑制肝癌等作用[3]。本文主要對苦豆子活性成分及其防治肝臟疾病的研究進展進行綜述，為苦豆子活性成分治療肝臟疾病的進一步研究提供參考。

1 寧夏苦豆子的主要活性成分

苦豆子的化學(xué)成分豐富且復(fù)雜，目前從苦豆子中分離得出的活性成分主要有生物堿、黃酮、揮發(fā)油、甾體、多糖、游離脂肪酸等[4]。

1.1 生物堿類

苦豆子主要活性成分中生物堿含量最高。目前，分離鑒定出的生物堿多達數(shù)十種（表1），主要為喹諾里西啶類生物堿，可分為苦參堿型和苦豆堿型。前者主要包含苦參堿（matrine，MT）、氧化苦參堿（oxymatrine，OMT）、槐果堿（sophocarpine，SCA）、槐定堿（sophoridine，SRI），后者有苦豆堿（aloperine，ALO）[5]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。藥理學(xué)研究表明苦參堿型生物堿具有抗腫瘤[6]、抗炎[7]、抗病毒[8]、抗心律失常[9]等作用。

圖1 苦豆子生物堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)

表1 部分已分離得出的苦豆子生物堿

1.2 黃酮類

黃酮是苦豆子另一主要活性成分。李敏等[14]從新疆苦豆子中分離鑒定出3′，4′-二羥基異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、7，3′-二羥基二氫黃酮-4′-Oβ-D-吡喃葡萄糖苷及蘆丁3 種成分。卞海濤等[15]從苦豆子中首次分離得到5，6-二羥基-3，7，3′，4′-四甲氧基黃酮、β-胡蘿卜苷、3′-甲氧基木犀草素3 種成分?？喽棺狱S酮類成分具有抗炎[14]、降血糖[16]、抗病毒和抗菌[17]等藥理作用。

1.3 其他類成分

馬別厚等[18]采用GC-MS 研究苦豆子豆籽油化學(xué)成分，分離得到了豆甾醇、麥角甾醇等5 種甾體化合物；張建華等[19]從苦豆子中檢測出谷氨酸、精氨酸、蘇氨酸、胱氨酸等16 種氨基酸。并且苦豆子中谷氨酸可以促進人體內(nèi)消化液的分泌，具有預(yù)防貧血和解毒的作用。除此之外，還有脂肪酸、揮發(fā)油、多糖等化學(xué)成分，其中，多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗炎、抗腫瘤等生物活性[20-21]。

2 寧夏苦豆子治療肝臟疾病活性成分的研究

2.1 病毒性肝炎

病毒性肝炎是由多種肝炎病毒引起的以肝臟病變?yōu)橹鞯膫魅静。渲?，慢性乙型肝炎（CHB）感染是一個非常嚴峻的世界公共衛(wèi)生問題，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。目前，拉米夫定等臨床常用藥物非但不能徹底清除乙肝病毒（HBV），而且長期使用還會產(chǎn)生明顯的耐藥問題，難以取得令人滿意的治療效果。近年來，越來越多的研究表明，傳統(tǒng)中藥苦豆子在抗乙肝藥物研究中具有獨特優(yōu)勢，從中藥寶庫中尋找天然抗病毒活性部位或活性成分，已成為發(fā)掘新藥的重要途徑之一。

趙義勇等[17]利用苦豆子總黃酮提取物對鴨乙型肝炎進行治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該提取物在體外能夠劑量依賴地抑制細胞內(nèi)HBV-DNA 的表達，表現(xiàn)出較強的體外抗病毒活性；在體內(nèi)實驗中，該提取物可明顯降低鴨血清中DHBV-DNA 的水平，提示苦豆子總黃酮對鴨乙型肝炎有很好的治療作用。除此之外，王浩等[22]研究發(fā)現(xiàn)，采取拉米夫定聯(lián)合氧化苦參堿對慢性乙型肝炎患者進行治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者外周血單核細胞中Toll 樣受體9（TLR9）信號通路關(guān)鍵分子的mRNA 和蛋白表達增加，血清抗病毒細胞因子水平顯著升高。該研究提示拉米夫定聯(lián)合氧化苦參堿能夠發(fā)揮有效的抗HBV 作用，其機制與激活TLR9 信號通路、誘導(dǎo)抗病毒細胞因子釋放有關(guān)。不僅如此，王青等[23]研究還發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿和阿德福韋酯均可抑制HepG2.2.15 細胞HBV-DNA 的分泌，抑制乙肝表面抗體HBeAg、HBsAg 表達；而氧化苦參堿亦可顯著降低HepG2.2.15細胞內(nèi)HBV rcDNA 以及cccDNA 的水平，引起pgRNA 水平的增加，這些結(jié)果提示氧化苦參堿的抗HBV 的作用環(huán)節(jié)可能位于cccDNA 轉(zhuǎn)錄形成pgRNA 之后至子代病毒形成之前，有必要對HBV的復(fù)制包裝過程進行詳細分解做進一步研究。

2.2 非酒精性脂肪性肝病

非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）是指除酒精和其他明確的損肝因素外所致的以肝細胞內(nèi)脂肪過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征。近年來隨著對其發(fā)病機制的深入了解，抗NAFLD 新藥不斷發(fā)現(xiàn)，科學(xué)家從苦豆子中提取的生物堿、黃酮類、酚類等中藥成分具有較明確的抗氧化作用，具有毒副作用小等多種獨特優(yōu)勢，成為治療NAFLD 的研究熱點之一。

宋春艷等[24]利用槐果堿對非酒精性脂肪性肝炎小鼠進行干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)槐果堿可顯著抑制小鼠體內(nèi)白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）的表達，緩解小鼠非酒精性脂肪性肝炎。該研究提示槐果堿可能通過抑制炎癥細胞因子的合成來減輕肝細胞內(nèi)線粒體的損傷，從而減輕肝細胞的毒性損傷。此外，史麗娟等[25-26]實驗研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿可抑制脂質(zhì)從頭合成途徑，同時降低了NAFLD 大鼠的固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子1（Srebf1）的mRNA 表達，增加過氧化物酶體增殖物激活受體α（Pparα）的mRNA 表達。提示氧化苦參堿對NAFLD 大鼠肝臟脂肪變性的治療作用可能與下調(diào)Srebf1 和上調(diào)Pparα 介導(dǎo)的代謝途徑相關(guān)。除了氧化苦參堿，唐彬等[27]通過實驗發(fā)現(xiàn)苦參堿對NAFLD 大鼠同樣具有顯著療效，其能夠降低高脂飲食大鼠肝組織中三酰甘油、總膽固醇的含量，抑制炎癥損傷，降低肝臟環(huán)氧化物酶（COX-2）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的表達水平。研究結(jié)果提示苦參堿對NAFLD 大鼠的治療作用可能與抑制COX-2、iNOS 表達，阻止炎癥發(fā)生和抗氧化相關(guān)。

2.3 肝纖維化

肝纖維化是各種病因所致慢性肝損傷的修復(fù)反應(yīng)，其主要特征是細胞外基質(zhì)（extra-cellular matrix，ECM）在肝內(nèi)的過度沉積，導(dǎo)致肝臟結(jié)構(gòu)改變和肝功能喪失。目前研究認為，肝星狀細胞（hepatic stellate cell，HSC）活化是肝纖維化的核心事件，而持續(xù)炎癥是HSC 活化的主要誘因。HSC是肝臟中產(chǎn)生膠原纖維的主要細胞，在肝臟受損時激活，分化成為肌成纖維樣細胞，分泌大量細胞因子、趨化因子和生長因子，并產(chǎn)生大量的ECM，從而促進肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。肝纖維化持續(xù)進展會發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，病死率極高，因此，逆轉(zhuǎn)肝纖維化對于預(yù)防肝硬化和肝癌具有重要意義。目前臨床上治療肝纖維化的傳統(tǒng)中藥包括苦參堿和氧化苦參堿類生物堿。

楊增璽等[28]通過研究發(fā)現(xiàn)不同劑量苦參堿作用4 周后可減輕CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠肝臟的纖維化程度，抑制肝細胞變性、壞死和炎性細胞浸潤以及膠原纖維沉積。苦參堿可抑制HSC 的活化和增殖，減少α-平滑肌激動蛋白的表達，保護肝細胞，同時抑制小鼠肝臟中TGF-β1 和血小板衍生生長因子-B（PDGF-B）的表達，從而產(chǎn)生抗肝纖維化作用。此外，閆冰川等[29]研究發(fā)現(xiàn)苦參堿聯(lián)合扁桃苷用藥可以改善CCl4肝纖維化模型小鼠的精神、活動、毛色和飲食狀況，明顯降低小鼠血中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）的水平，表明兩者聯(lián)用可以發(fā)揮改善肝纖維化的效果。臨床研究發(fā)現(xiàn)[30]，171 位肝炎和肝硬化患者通過靜脈注射 400 mg/d苦參素注射液后發(fā)現(xiàn)肝纖維化程度降低，表明氧化苦參堿具有逆轉(zhuǎn)肝纖維化作用。除此之外，另一項研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿可降低TGF-β1和TNF-α 的水平，抑制HSC 的活化，減少ECM 的釋放，同時增加患者血清中IL-10 的水平，進而減輕肝炎癥狀、改善肝功能，預(yù)防肝纖維化[31]。

2.4 肝硬化

肝硬化（liver cirrhosis）是臨床常見的慢性進行性肝病，是由一種或多種病因長期或反復(fù)作用形成的彌漫性肝損害。目前對于肝硬化并沒有特效的治療手段，干擾素α 及核苷和核苷酸類抗病毒藥物存在應(yīng)答率低、藥物難取得、并發(fā)癥風(fēng)險高、耐藥和治療成本高等問題[32]，很難取得良好的治療效果。藥理學(xué)研究表明，苦豆子中的生物堿成分可能會對肝硬化起到治療作用[33]。

毛麗萍等[34]研究發(fā)現(xiàn)，乙肝肝硬化患者在經(jīng)過苦參堿治療1 個月后，其外周血自然殺傷細胞（NK 細胞）表面活化性受體NKG2D 表達水平有所增加，提示具有免疫調(diào)節(jié)作用的苦參堿可以上調(diào)乙肝肝硬化患者NKG2D 的表達水平，從而減少乙肝肝硬化患者發(fā)展至肝癌的概率。

此外，祝爾健等[35]通過研究發(fā)現(xiàn)，肝硬化患者應(yīng)用苦參堿治療8 周后，其患者體內(nèi)ALT、AST、血清總膽紅素（TBil）水平均較單純護肝患者明顯降低；苦參堿治療后患者的HBV-DNA、HBeAg 陰轉(zhuǎn)率均高于單純護肝患者。該研究提示治療肝硬化過程中，有必要在護肝治療的同時聯(lián)用安全、有效的藥物苦參堿。

2.5 肝衰竭

肝衰竭（hepatic failure）是由多種因素引起的嚴重肝損傷，臨床主要表現(xiàn)為黃疸、凝血功能障礙、肝腎綜合征、肝性腦病、腹水等癥狀。目前治療肝衰竭的藥物有核苷類藥物、N-乙酰半胱氨酸、腎上腺皮質(zhì)激素等[36]。但皮質(zhì)激素治療肝衰竭存在不良反應(yīng)多、藥物用量和作用時機難以把握等問題[37]。藥物療效并不理想，因此，肝衰竭治療藥物的研究迫在眉睫，而苦豆子生物堿在肝衰竭防治方面具有開發(fā)前景。

張弦等[38]研究發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿能夠明顯改善脂多糖/D-氨基半乳糖（LPS/D-GalN）誘導(dǎo)的大鼠急性肝衰竭肝臟的病變，降低肝臟轉(zhuǎn)氨酶，并通過抑制急性肝衰竭大鼠肝組織TLR4 的表達，降低TNF-α、IL-1β 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspases-3）的表達水平以及Bax/Bcl-2 的比例，從而產(chǎn)生抑制肝細胞凋亡的作用，保護肝細胞。其另一項研究[39]發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿聯(lián)合復(fù)方茵陳顆粒（FYK）預(yù)處理可減輕急性肝衰竭大鼠的肝損傷程度，同時降低肝衰竭的發(fā)生率。除此之外，向曉星[40]等的研究結(jié)果同樣證實氧化苦參堿對于肝衰竭具有保護作用。

2.6 肝細胞癌

據(jù)2020 年WHO 報道，肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）發(fā)病率居全球第6 位、病死率居全球第3 位。2020 年我國發(fā)病例數(shù)和死亡人數(shù)分別多達41 萬和39 萬，HCC 的發(fā)病率約占全球43%，由此看來，我國HCC 的病情形勢非常嚴峻。臨床上一般采取肝臟切除和移植、局部消融或動脈化療栓塞等方法治療[41]。國內(nèi)外大量研究報道，許多中藥成分及天然產(chǎn)物也具有抗腫瘤的作用，其中，苦豆子的生物堿成分便是其中之一。

楊曉娟等[42]將0～4 mg/ml 的苦參堿加入到HepG2 和BEL-7 404 肝癌細胞中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)苦參堿能夠以時間和濃度依賴性的方式抑制肝癌細胞增殖，并誘導(dǎo)其凋亡。機制研究發(fā)現(xiàn)其可能通過激活p38/JNK 信號通路，下調(diào)抑凋亡基因Bcl-2 和上調(diào)促凋亡基因Bax 及caspases 3 的表達來誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡。此外，Liu 等[43]研究發(fā)現(xiàn)苦豆堿能夠劑量依賴性地抑制Hep3B 和Huh7 肝癌細胞的增殖、誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡和G2/M 細胞周期阻滯。另一項研究報道[44]，0～20 mg/ml 槐定堿可通過增強抑癌基因PTEN 的表達，抑制PI3K/AKT 信號通路的激活，同時增加caspases 3/9）和基質(zhì)金屬蛋白酶3/9（MMP3/9）的蛋白表達，最終抑制HepG2 細胞的增殖、侵襲和遷移，并誘導(dǎo)細胞凋亡。Zhang 等[45]報道1 000 μmol/L 槐果堿能夠顯著抑制HCC-LM3和MHCC-97H 的細胞增殖率，使細胞周期阻滯在G0/G1 期。其作用機制是通過抑制AKT/GSK3β/βcatenin 軸和TGF-β 誘導(dǎo)的肝癌細胞的上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）發(fā)揮治療肝癌的作用。

3 總結(jié)與展望

近年來，隨著新藥研發(fā)和臨床需求的不斷擴大，苦豆子作為傳統(tǒng)中藥，其抗炎、抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等藥理作用不斷被發(fā)現(xiàn)。本文就寧夏苦豆子中的主要成分及其在治療肝臟疾病中的活性作用進行了綜述，發(fā)現(xiàn)苦豆子在治療病毒性肝炎、非酒精性肝病、肝纖維化、肝硬化、肝衰竭、肝細胞癌等疾病中可能發(fā)揮重要作用，其中，苦參堿（斯巴特康）注射液已于臨床用于急、慢性肝炎、肝硬化及其他肝膽疾病的治療。

盡管國內(nèi)外對苦豆子的研究不斷增多，但是關(guān)于苦豆子的藥物研究和開發(fā)仍然存在諸多問題，如黃酮、揮發(fā)油類等研究還較少，對苦參堿（素）類藥物的臨床副反應(yīng)還不明確，藥物和藥物之間可能存在的相互作用尚未清楚，對活性成分在不同組織中的分子靶點和作用機制的研究不夠深入，對苦豆子藥動學(xué)的臨床研究不夠充分等。因此，迫切需要科研力量的投入，系統(tǒng)開展苦豆子基礎(chǔ)研究，建立一套以寧夏苦豆子活性成分為主的肝病防治藥物創(chuàng)新技術(shù)體系和苦豆子產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵技術(shù)體系，為寧夏苦豆子的資源利用和高技術(shù)產(chǎn)品開發(fā)奠定堅實的技術(shù)基礎(chǔ)。