朱小甫，吳旭錦，鄭紅青，尹寶英

(咸陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，咸陽(yáng)市動(dòng)物疫病分子生物學(xué)診斷技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 咸陽(yáng) 712000)

近幾年來(lái)，陜西省豬場(chǎng)仔豬腹瀉問(wèn)題突出，造成的經(jīng)濟(jì)損失較大[1]。其臨床表現(xiàn)以仔豬腹瀉脫水為主，仔豬發(fā)病率和病死率高。研究顯示，引起仔豬腹瀉的病因復(fù)雜，病毒方面主要有豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬德?tīng)査跔畈《?PDcoV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬輪狀病毒(PoRV)和博卡病毒(PBoV)[2～4]。2006年初，我國(guó)PEDV毒株出現(xiàn)變異現(xiàn)象，引發(fā)免疫失敗導(dǎo)致PED暴發(fā)流行，2010年P(guān)EDV毒株再次變異，疫情蔓延全國(guó)[5]。PBoV最早是在患有PMWS仔豬群中被發(fā)現(xiàn)并報(bào)道，但后來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)PBoV在腹瀉豬群中有很高的感染率，被認(rèn)為是一種腹瀉相關(guān)的新型病毒[6]。2021年2月份，陜西省渭南市某豬場(chǎng)出現(xiàn)仔豬腹瀉癥狀，豬場(chǎng)采用抗生素治療以及補(bǔ)水止瀉等對(duì)癥療法，但收效甚微，仔豬死亡較多，損失較大，隨后送檢4頭發(fā)病死亡仔豬到本重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行診斷，現(xiàn)總結(jié)分析以供同行參考。

1 臨床癥狀

豬場(chǎng)母豬存欄530頭，分娩仔豬連續(xù)發(fā)病，從病初至送檢1月時(shí)間，已死淘224頭仔豬。臨床癥狀表現(xiàn):仔豬出生1～3 d突然拉稀，精神迅速變差，不吮乳，初期排黃色稀糞，常見(jiàn)未消化的凝乳塊，迅速演變?yōu)樗畼痈篂a，可見(jiàn)脫落的腸道黏膜。個(gè)別仔豬有嘔吐現(xiàn)象。體溫?zé)o明顯變化。

2 剖檢病變

剖檢4頭送檢死亡仔豬，病變基本一致。仔豬尸體嚴(yán)重脫水，眼窩深陷，肋骨突出。其主要病變集中在消化系統(tǒng)，胃底及幽門(mén)部散布數(shù)量不等的出血斑；部分小腸充盈，壁薄半透明狀，部分小腸漿膜可見(jiàn)出血斑；剖開(kāi)可見(jiàn)小腸黏膜出血，內(nèi)有黃色帶泡沫的液體。腸系膜淋巴結(jié)腫大、充血出血。個(gè)別仔豬肺臟充血，腎臟有小出血點(diǎn)，肝臟淤血。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

根據(jù)臨床癥狀與病理變化，初步判斷為仔豬腹瀉性傳染病。為確診腹瀉病原，采集小腸內(nèi)容物，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱平板上進(jìn)行細(xì)菌劃線分離。采集4份腸道組織，加適量滅菌生理鹽水，剪碎后用組織研磨器研磨為混懸液，凍融3次后12 000 g離心5 min，收集上清液-80℃凍存，用于病毒檢測(cè)。采用本實(shí)驗(yàn)室建立的RT-PCR方法，檢測(cè)PEDV、TGEV、PDcoV、PoRV與PBoV，以上5種病毒陽(yáng)性樣品分別出現(xiàn)412 bp、264 bp、303 bp、621 bp與500 bp特異性條帶。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從腸道內(nèi)容物中未分離到細(xì)菌；病毒檢測(cè)結(jié)果4份腸道組織樣品中PEDV均為陽(yáng)性，3份PBoV陽(yáng)性(見(jiàn)圖1)，TGEV、PDcoV、PoRV均為陰性，最終確診仔豬腹瀉為PEDV和PBoV混合感染引起。

圖1 病毒RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

4 防治措施

由于仔豬病毒性腹瀉發(fā)生后進(jìn)行治療效果不佳，對(duì)嚴(yán)重腹瀉脫水的仔豬淘汰無(wú)害化處理。發(fā)生腹瀉的圈舍采用干粉消毒劑進(jìn)行消毒處理，可有效降低圈舍濕度和殺滅病原。對(duì)輕癥仔豬及時(shí)隔離，人工哺乳或寄養(yǎng)，5%葡萄糖水和生理鹽水按照1∶1比例混合腹腔注射50 mL，肌肉注射頭孢噻呋鈉預(yù)防繼發(fā)性細(xì)菌感染，嚴(yán)格控制人員流動(dòng)，派專(zhuān)人照護(hù)病仔豬。強(qiáng)化母豬產(chǎn)房管理，對(duì)進(jìn)出產(chǎn)房人員工作服和膠鞋嚴(yán)格消毒，保持地面衛(wèi)生，母豬產(chǎn)床勤清理、消毒。維持舒適溫度對(duì)控制腹瀉極為重要，要求產(chǎn)房溫度保持在25℃以上，護(hù)仔箱溫度保持在30℃以上。豬舍附近的通道和場(chǎng)地兩天消毒一次。采集腹瀉仔豬腸道組織制作本場(chǎng)組織滅活苗，給懷孕母豬臨產(chǎn)前1個(gè)月免疫注射5 mL，間隔10 d再次注射5 mL，經(jīng)過(guò)自家苗免疫后的母豬分娩的仔豬再?zèng)]有發(fā)生腹瀉，成功控制了仔豬腹瀉的流行。

5 小結(jié)與體會(huì)

該豬場(chǎng)對(duì)母豬群采用了PEDV與TGEV二聯(lián)滅活疫苗進(jìn)行免疫，但還是發(fā)生了仔豬腹瀉。分析發(fā)病原因，主要是PEDV流行毒株發(fā)生了較為顯著的變異，其毒株與疫苗毒株同源性較低(內(nèi)部資料)，導(dǎo)致疫苗免疫抗體不能完全保護(hù)仔豬抵御流行毒株的感染。其次是由于PBoV的混合感染，PBoV是一種新型的細(xì)小病毒，其感染豬主要引起腹瀉，對(duì)產(chǎn)房哺乳仔豬致病性高，死亡率高達(dá)70%以上[7]。這兩種致病性強(qiáng)的病毒性腹瀉病原混感，更是加重了臨床表現(xiàn)和病死率。在流行病學(xué)調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)，豬場(chǎng)在疫情發(fā)生后，獸醫(yī)曾診斷為仔豬黃痢，反復(fù)使用多種抗生素治療，延誤了確診時(shí)間，耽誤了采取有效措施的時(shí)間，導(dǎo)致豬場(chǎng)損失擴(kuò)大。由于仔豬腹瀉病原多樣，且臨床表現(xiàn)和病理變化多有類(lèi)似，臨床診斷和病理診斷難度大，必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分析才能確診病原[8]。本課題組應(yīng)用自行開(kāi)發(fā)的RT-PCR技術(shù)，直接以病料組織中提取的總RNA為模板，檢測(cè)4種腹瀉相關(guān)病毒核酸片段，短時(shí)間內(nèi)即可確定病原種類(lèi)，針對(duì)病原及時(shí)采取有效應(yīng)對(duì)措施，有助于迅速控制疫情，最大限度降低豬場(chǎng)損失。此外，需要指出的是，由于PEDV毒株變異導(dǎo)致商品苗預(yù)防效果不佳，而PBoV尚無(wú)商品化疫苗可用，制作自家組織滅活疫苗進(jìn)行母豬群免疫，提高母源抗體水平，通過(guò)被動(dòng)免疫保護(hù)仔豬不再感染腹瀉病原，是控制仔豬腹瀉的重要措施。