陳冬冬 楊新霞 樓穎穎

寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院 浙江 寧波 315000

腦創(chuàng)傷介導(dǎo)急性肺損傷（TBI-ALI）是腦創(chuàng)傷常見的并發(fā)癥，其致病率往往高達(dá)25%。本實(shí)驗(yàn)擬通過觀察腦創(chuàng)傷后肺組織中谷氨酸及相關(guān)炎癥因子的表達(dá)，探究電針對(duì)減輕小鼠TBI-ALI發(fā)生的具體機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組：清潔級(jí)C57BL/6（體質(zhì)量21～22g，年齡8周）30只小鼠購買于上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。術(shù)前12小時(shí)禁食，自由飲水。隨機(jī)分為對(duì)照組、造模組、電針組3組。

1.2 儀器與試劑：精密顱腦損傷撞擊器（深圳瑞沃德，68093型號(hào)）；腦立體定位儀（深圳瑞沃德，68025型號(hào)）；紫外分光光度計(jì)(南京科捷，752/752N型號(hào))；谷氨酸檢測(cè)試劑盒（南京建成，A074-1-1）；炎癥因子TNF-α、IL-1β試劑盒（美國Ebioscience）。

1.3 模型制備：待小鼠麻醉，將小鼠仰臥位固定于腦立體定位儀，選擇小鼠前囟和人字縫之間左側(cè)顱骨的位置，剪開皮膚1cm暴露顱骨，隨即打開骨膜，對(duì)小鼠頭部進(jìn)行左側(cè)顱骨鉆孔。選定打擊參數(shù)為：深度2mm，時(shí)間100ms，速度3.5m/s。打擊后，將骨瓣還納于骨窗中，用膠水封閉窗口，最后縫合頭皮。

1.4 干預(yù)方法：對(duì)照組：小鼠僅打開顱骨，不進(jìn)行鉆孔。造模組：本實(shí)驗(yàn)采用控制性皮層沖擊法制備腦創(chuàng)傷模型。電針組：電針組小鼠先行TBI造模，造模后0.5小時(shí)進(jìn)行電針“百會(huì)”“大椎”穴，選用華佗牌電針儀進(jìn)行電刺激，疏密波，頻率2/15Hz，強(qiáng)度1mA，持續(xù)30min，以小鼠肢體輕微抖動(dòng)為度?！鞍贂?huì)”穴位于頂骨正中，“大椎”在第7頸椎與第1胸椎間，背部正中。

1.5 谷氨酸濃度測(cè)定：TBI術(shù)后24小時(shí)處死小鼠。取小鼠左肺組織進(jìn)行勻漿，4℃，12000rpm，10min進(jìn)行離心。取上清液按照谷氨酸檢測(cè)試劑盒添加相應(yīng)試劑，混勻，37℃水浴40min。取出后采用紫外分光光度計(jì)，340nm，1cm光徑，檢測(cè)各樣本吸光度值。根據(jù)吸光度計(jì)算出谷氨酸濃度。

1.6 炎癥因子測(cè)定：取上述肺組織勻漿后上清液，采用ELIAS法進(jìn)行炎癥因子TNF-α、IL-1β檢測(cè)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 13.0軟件分析，數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Turkey檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組間谷氨酸濃度比較：見表1。

表1 3組間谷氨酸濃度比較（±s）

表1 3組間谷氨酸濃度比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與造模組比較，#P＜0.05。

谷氨酸濃度（ng/ml）32.45±7.54 79.88±6.55*46.34±9.34*#組別對(duì)照組造模組電針組例數(shù)10 10 10

2.2 3組間炎癥因子濃度比較：見表2。

表2 3組間炎癥因子TNF-α、IL-1β比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與造模組比較，#P＜0.05。

組別對(duì)照組造模組電針組IL-1β（pg/ml）22.83±3.29 69.72±5.23*44.72±3.75*#例數(shù)10 10 10 TNF-α（pg/ml）18.34±4.33 55.22±3.78*37.65±4.25*#

3 討論

TBI介導(dǎo)ALI發(fā)生的機(jī)制多種多樣。研究發(fā)現(xiàn)，血漿中谷氨酸濃度與TBI-ALI的發(fā)生率密切相關(guān)，其可通過促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)而增加肺損傷的發(fā)生率。因此，有效降低血漿中谷氨酸濃度可有效減輕ALI的致病率。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為TBI為腦部受損，瘀血內(nèi)停，氣機(jī)受阻，阻滯經(jīng)絡(luò)[1]，而針刺“百會(huì)”及“大椎”穴可疏通經(jīng)絡(luò)，健腦補(bǔ)髓，從而達(dá)到腦保護(hù)的作用。本研究發(fā)現(xiàn)小鼠造模后肺組織中谷氨酸及炎癥因子TNF-α、IL-1β濃度較對(duì)照組明顯增加，而給予電針處理后，三者濃度均較TBI組下降，但仍高于對(duì)照組?？梢婋娽樉哂袦p輕TBI-ALI的效果，且其機(jī)制可能為通過降低谷氨酸濃度，從而降低炎癥因子的產(chǎn)生而發(fā)揮作用。