張佳 劉芳 鄭丹

[摘要] 目的 探討內(nèi)皮蛋白C受體（ERCR）在重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的表達(dá)及意義。 方法 選取2017年5月至2020年6月南昌市第一醫(yī)院接收的70例重度子癇前期孕婦（研究組）和70名健康孕婦（健康組）作為本研究對(duì)象，兩組進(jìn)行胎盤組織和血漿ERCR檢測(cè)，比較兩組的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量和胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率;同時(shí)根據(jù)重度子癇前期的類型，比較早發(fā)型和晚發(fā)型孕婦的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量和胎盤組織結(jié)合型ERCR陽(yáng)性表達(dá)率。 結(jié)果 經(jīng)檢測(cè)，研究組的血漿游離ERCR水平明顯高于健康組，其胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于健康組（P<0.001）;同時(shí)，研究組的胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率（58.57%）明顯低于健康組（97.14%）（P<0.001）。在重度子癇前期類型方面，早發(fā)型孕婦的血漿游離ERCR水平明顯高于晚發(fā)型孕婦，其胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于晚發(fā)型孕婦（P<0.001）;且早發(fā)型孕婦胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率（32.44%）也低于晚發(fā)型孕婦（87.87%）（P<0.001）。 結(jié)論 早發(fā)型重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR表達(dá)明顯升高，而晚發(fā)型重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR無(wú)明顯變化，ERCR可作為早發(fā)型重度子癇前期的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 重度子癇前期;孕婦;胎盤組織;血漿;內(nèi)皮蛋白C受體

[中圖分類號(hào)] R714.245? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2022）02-0009-04

Expression and significance of endothelial protein C receptor in placental tissue and plasma of pregnant women with severe preeclampsia

ZHANG Jia? ?LIU Fang? ?ZHENG Dan

Department of Gynecology and Obstetrics， Nanchang First Hospital， Nanchang? ?330000， China

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of endothelial protein C receptor （ERCR） in placental tissue and plasma of pregnant women with severe preeclampsia. Methods A total of 70 pregnant women with severe preeclampsia （study group） and 70 healthy pregnant women （healthy group） who were admitted to Nanchang First Hospital from May 2017 to June 2020 were selected as the research objects， and the placental tissue and plasma ERCRs were detected in the two groups. The plasma free ERCR levels， relative expression levels of binding ERCR mRNA and positive expression rates of binding ERCR protein in the placental tissue were compared between the two groups. Meanwhile， according to the type of severe preeclampsia， the levels of plasma free ERCR， the relative expression levels of placental tissue binding ERCR mRNA and the positive expression rates of placental tissue binding ERCR were compared between the early onset and late onset pregnant women. Results The level of free ERCR in plasma in the study group was significantly higher than that in the healthy group， and the relative expression of placental tissue binding ERCR mRNA in the study group was significantly lower than that in the healthy group （P<0.001）. Meanwhile， the positive expression rate of placental tissue binding ERCR protein in the study group was 58.57%，which was significantly lower than that of 97.14% in the healthy group （P<0.001）. For the type of severe preeclampsia， the plasma free ERCR level of early onset women was significantly higher than that of late onset women， and the relative expression level of placental tissue binding ERCR mRNA of early onset women was significantly lower than that of late onset women （P<0.001）. The positive expression rate of placental tissue binding ERCR protein in early onset pregnant women was 32.44%， which was also lower than that of 87.87% in late onset pregnant women （P<0.001）. Conclusion The expression of ERCR in the placental tissue and plasma of pregnant women with early onset severe preeclampsia significantly increase， while the expression of ERCR in the placental tissue and plasma of pregnant women with late onset severe preeclampsia does not significantly change. ERCR can be used as a predictor of early onset severe preeclampsia.

[Key words] Severe preeclampsia; Pregnant women; Placental tissue; Plasma; Endothelial protein C receptor

重度子癇前期屬于妊娠期高血壓最為嚴(yán)重的一個(gè)階段，極易引起胎盤早剝、胎兒宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)后出血等，對(duì)孕婦及胎兒的生命安全構(gòu)成極大威脅[1-2]。重度子癇前期根據(jù)發(fā)病孕齡可分為早發(fā)型和晚發(fā)型，孕齡<34周發(fā)病為早發(fā)型，孕齡≥34周為晚發(fā)型[3]。有學(xué)者認(rèn)為，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與妊娠期高血壓的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，內(nèi)皮蛋白C受體（endothelial protein C receptor，ERCR）作為蛋白C系統(tǒng)的重要成員之一，其在細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)中起到重要作用，與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展有著一定的聯(lián)系[4-5]。而重度子癇前期的發(fā)生預(yù)示著孕婦血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，這一損傷會(huì)嚴(yán)重影響ERCR功能，但對(duì)于ERCR與該疾病的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系尚未明確定論?；诖耍狙芯窟x取2017年5月至2020年6月南昌市第一醫(yī)院接收的70例重度子癇前期孕婦和70名健康孕婦作為研究對(duì)象，旨在探討重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR表達(dá)及其意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2017年5月至2020年6月南昌市第一醫(yī)院接收的70例重度子癇前期孕婦（研究組）和70名健康孕婦（健康組）作為本研究對(duì)象。健康組年齡22～36歲，平均（29.68±4.28）歲;孕次1～3次，平均（2.01±0.23）次;孕齡32～36周，平均（33.15±0.52）周。研究組年齡23～36歲，平均（26.75±4.32）歲;孕次1～3次，平均（2.03±0.25）次;孕齡32～36周，平均（33.18±0.53）周;早發(fā)型37例[年齡23～34歲，平均（26.53±4.21）歲;孕次1～3次，平均（2.01±0.33）次;孕齡32～35周，平均（33.05±0.48）周]，晚發(fā)型33例[年齡25～36歲，平均（26.57±4.27）歲;孕次1～3次，平均（2.03±0.34）次;孕齡33～36周，平均（33.07±0.49）周]。兩組的年齡、孕次和孕齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性;同時(shí)，早發(fā)型和晚發(fā)型孕婦的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究組孕婦均符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[6]中有關(guān)重度子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn);②均為單胎妊娠者;③具備正常理解溝通交流能力者;④孕婦及其家屬對(duì)本研究均知情，且已簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)[7]：①合并心肝腎功能不全者;②胎兒存在先天性疾病或胎膜早破者;③孕婦和胎兒存在感染者;④存在精神疾病既往史者。本研究已獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)。

1.2 方法

予以兩組胎盤組織和血漿ERCR檢測(cè)，具體方法如下：①采集孕婦晨起空腹靜脈血4 ml，將血液標(biāo)本靜置30 min，由專業(yè)檢驗(yàn)人員進(jìn)行離心處理，離心半徑10 cm，速率3000 r/min，離心15 min分離血漿，采用美國(guó)Beckman Coulter公司生產(chǎn)的全自動(dòng)生化分析儀（型號(hào)為AU5800），通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定孕婦的血漿游離ERCR水平。②待孕婦分娩后，收集胎盤中央部位，去除并底蛻膜層，注意避開(kāi)鈣化壞死部位，于叢密絨毛膜層采集2份胎盤組織，標(biāo)本大小為1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm。使用DEPC溶液徹底沖洗胎盤組織標(biāo)本，置于液氮、-80℃環(huán)境下保存。取1份胎盤組織剪碎并充分研磨，將其加到組織裂解液中充分裂解。隨后由專業(yè)檢驗(yàn)人員進(jìn)行離心處理，半徑為15 cm，速率為3000 r/min，時(shí)間10 min，將上清液分離，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，計(jì)算胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量。③將剩余的1份胎盤組織置于10%的中性甲醛中固定24 h，行石蠟包埋，連續(xù)4 μm厚切片，滴入50 μl兔抗人ERCR多克隆抗體，進(jìn)行常溫孵育，24 h后加入0.1 ml生物素山羊抗大鼠工作液，置于37℃中孵育，時(shí)間為30 min。行二氨基聯(lián)苯胺顯色，襯染、脫水透明均使用蘇木精，行中性樹(shù)膠封片。在400倍鏡下觀察孕婦胎盤組織結(jié)合型ERCR陽(yáng)性表達(dá)率。判斷標(biāo)準(zhǔn)[8]：以評(píng)分方式表示陽(yáng)性細(xì)胞百分比和染色強(qiáng)度，陽(yáng)性細(xì)胞百分比<5%、無(wú)著色分別為0分;陽(yáng)性細(xì)胞百分比為5%～20%、淡黃色分別為1分;陽(yáng)性細(xì)胞百分比>20%～50%、黃色分別為2分;陽(yáng)性細(xì)胞百分比>50%、棕黃色分別為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比值+染色強(qiáng)度值，0～1分即陰性，2分即弱陽(yáng)性，3～4分即中度陽(yáng)性，5～6分即強(qiáng)陽(yáng)性。

1.3觀察指標(biāo)

比較兩組的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量和胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率。同時(shí)，根據(jù)重度子癇前期的類型，比較早發(fā)型和晚發(fā)型孕婦的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量和胎盤組織結(jié)合型ERCR陽(yáng)性表達(dá)率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P<0.001為差異有極其顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 兩組的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

經(jīng)檢測(cè)，研究組的血漿游離ERCR水平明顯高于健康組，其胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量低于健康組（P<0.001）。見(jiàn)表1。

2.2 兩組的胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

研究組的胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于健康組孕婦（P<0.001）。見(jiàn)表2。

2.3 早發(fā)型和晚發(fā)型孕婦的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

早發(fā)型孕婦的血漿游離ERCR水平明顯高于晚發(fā)型孕婦，其胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于晚發(fā)型孕婦（P<0.001）。見(jiàn)表3。

2.4 早發(fā)型和晚發(fā)型孕婦的胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

與晚發(fā)型孕婦相比，早發(fā)型孕婦的胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率更低（P<0.001）。見(jiàn)表4。

3 討論

妊娠期高血壓是妊娠期間特有的疾病，根據(jù)病情的嚴(yán)重程度可分為子癇前期、先兆子癇和子癇期[9-11]。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示[12]，我國(guó)9.4%～10.4%的妊娠婦女合并有高血壓，該孕期并發(fā)癥是導(dǎo)致孕婦和圍產(chǎn)兒不良預(yù)后的主要因素之一。子癇前期主要發(fā)于妊娠20周以后，且胎盤功能趨于成熟，分娩后能在一定程度上緩解孕婦病情，由此得知，胎盤組織與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展存在一定關(guān)系[13-15]。重度子癇前期作為妊娠期高血壓最為嚴(yán)重的階段，如何及時(shí)發(fā)現(xiàn)、干預(yù)是現(xiàn)階段臨床婦產(chǎn)科所關(guān)注的重點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)檢測(cè)，研究組的血漿游離ERCR水平明顯高于健康組，其胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于健康組（P<0.001）;同時(shí)，研究組的胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于健康組（P<0.001），提示與健康孕婦相比，重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR表達(dá)情況出現(xiàn)顯著變化。究其原因?yàn)樽甜B(yǎng)細(xì)胞凋亡、胎盤著床淺、炎癥反應(yīng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷等是引起重度子癇前期的關(guān)鍵因素[16-17]。蛋白C系統(tǒng)作為重要抗凝系統(tǒng)，其能有效抑制細(xì)胞凋亡、內(nèi)皮炎癥反應(yīng)，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞起到重要的保護(hù)作用。ERCR作為蛋白C系統(tǒng)的重要成員，其主要表達(dá)于胎盤、血管內(nèi)皮細(xì)胞表面、肝臟等。而ERCR能激活蛋白C，使其發(fā)揮生物學(xué)作用，且ERCR具有游離ERCR和結(jié)合型ERCR兩種類型，前者可抑制蛋白C活化、抗凝活性產(chǎn)生，后者能調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物[18]。重度子癇前期的發(fā)生則會(huì)影響ERCR功能，使其在孕婦胎盤組織和血漿中的表達(dá)發(fā)生變化。

本研究結(jié)果顯示，早發(fā)型孕婦的血漿游離ERCR水平明顯高于晚發(fā)型孕婦，其胎盤組織結(jié)合型ERCR mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于晚發(fā)型孕婦（P<0.001）;且早發(fā)型孕婦胎盤組織結(jié)合型ERCR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率也低于晚發(fā)型孕婦（P<0.001），提示ERCR在早發(fā)型和晚發(fā)型中的表達(dá)存在較大差異性。結(jié)合型ERCR可與活化蛋白C進(jìn)行結(jié)合，能有效抑制中性粒細(xì)胞活性，減少炎癥因子釋放，進(jìn)而減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷。在胎盤組織中，ERCR的表達(dá)降低則會(huì)減少活化蛋白C生成，使機(jī)體炎癥反應(yīng)激活，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷，引起血管痙攣，進(jìn)而誘發(fā)早發(fā)型重度子癇前期[19-20]。而晚發(fā)型重度子癇前期的ERCR表達(dá)無(wú)明顯變化，這可能與胎盤灌注障礙不是此類型的主要影響因素、病變?yōu)橹苯幽阁w反應(yīng)有關(guān)。同時(shí)，胎盤組織的ERCR表達(dá)減少，會(huì)導(dǎo)致活化蛋白C水平降低，使血管內(nèi)皮損傷加劇，此時(shí)結(jié)合型ERCR會(huì)經(jīng)由胎盤內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入血漿中，此時(shí)血漿游離ERCR水平會(huì)過(guò)度表達(dá)。而血漿游離ERCR水平升高會(huì)加劇機(jī)體炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，抑制蛋白C抗凝活性，并增加血管壁沖擊力、血液張力，引起血壓升高，繼而誘發(fā)早發(fā)型重度子癇前期。

綜上所述，重度子癇前期的發(fā)生、發(fā)展與胎盤組織和血漿中的ERCR表達(dá)存在一定關(guān)系，而早發(fā)型重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR表達(dá)明顯升高，而晚發(fā)型重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR無(wú)明顯變化，ERCR可作為早發(fā)型重度子癇前期的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

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（收稿日期：2021-03-10）