劉 濤，郭 存，鄒宗慶，金立權(quán)，吳 健，文利超，鄧智超，初雨蒙，王凌濤，李 偉，郭永峰

煙草TPP基因家族鑒定及表達(dá)模式分析

劉 濤1,2，郭 存3，鄒宗慶4，金立權(quán)5，吳 健5，文利超1,2，鄧智超1,2，初雨蒙1,2，王凌濤6，李 偉1*，郭永峰1*

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所，煙草行業(yè)基因資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青島 266101；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院，北京 100081；3.云南省煙草公司昆明市公司石林分公司，昆明 650000；4.福建省煙草公司龍巖市公司，福建 龍巖 361000；5.山東臨沂煙草有限公司蘭陵分公司，山東 臨沂 277700；6.湖北省煙草公司十堰市公司竹溪縣營銷部，湖北 十堰 442300）

海藻糖-6-磷酸磷酸酶（TPP）是植物海藻糖代謝過程的關(guān)鍵酶，在植物的生長發(fā)育及非生物脅迫響應(yīng)過程中發(fā)揮著重要的作用。為挖掘參與煙草發(fā)育及抗逆脅迫的TPP基因家族成員，本研究通過生物信息學(xué)的方法，在普通煙草基因組中共鑒定出了15個(gè)基因，其中7個(gè)基因定位在染色體上。系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，新鑒定的煙草TPP成員可分為3個(gè)亞家族，分別為CLASS I、CLASS II和CLASS III。共線性分析表明，有5個(gè)煙草基因分別與7個(gè)擬南芥基因形成同源基因?qū)Α?dòng)子分析發(fā)現(xiàn)，NtTPP成員的啟動(dòng)子上存在多種激素和非生物脅迫響應(yīng)元件。表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn)，基因表達(dá)具有一定的組織特異性，大部分基因在根中的表達(dá)量最高，有12個(gè)基因在干旱脅迫下表達(dá)量上調(diào)，13個(gè)基因能夠被鹽脅迫顯著誘導(dǎo)表達(dá)。這說明NtTPP基因家族成員在煙草非生物脅迫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用。

煙草；海藻糖-6-磷酸磷酸酶（TPP）；干旱脅迫；鹽脅迫；表達(dá)模式

海藻糖是一種非還原性雙糖，由兩分子α-葡萄糖組成，廣泛分布于植物、動(dòng)物以及微生物中[1]。研究發(fā)現(xiàn)海藻糖在植物應(yīng)對各種生物以及非生物脅迫中發(fā)揮重要作用[2]。在極溫、高滲透壓及干燥失水等脅迫條件下，海藻糖能在細(xì)胞表面形成特殊的保護(hù)膜，降低逆境對生物分子結(jié)構(gòu)的損害，維持生命體的生命過程和生物特征[3-4]。

海藻糖在植物中的合成主要包括以下兩個(gè)步驟：第1步，通過海藻糖-6-磷酸合成酶（TPS），尿苷二磷酸-葡萄糖（UDPG）和葡萄糖-6-磷酸葡萄糖（G6P）合成一種磷酸化中間體海藻糖-6-磷酸（T6P）；第2步，海藻糖-6-磷酸（T6P）在海藻糖-6-磷酸磷酸酶（TPP）催化下去磷酸化合成海藻糖[5-6]。TPP是海藻糖合成途徑的限制性酶，在高等植物中廣泛分布，隨著植物全基因組測序的進(jìn)行，TPP基因家族已在多種物種中被鑒定[7-9]，主要特征是它們都含有一個(gè)Trehalose_PPase保守結(jié)構(gòu)域?；蛞驯蛔C實(shí)參與擬南芥[10-11]、水稻[12-14]、玉米[15-16]等多種植物的非生物脅迫響應(yīng)。在煙草中，外源施加海藻糖不僅能夠提高煙苗的抗旱能力，還能鈍化煙草花葉病毒進(jìn)而減輕病毒對煙葉的傷害[17-18]。WANG等[19]從普通煙草中克隆出了基因，發(fā)現(xiàn)熱脅迫可顯著提高基因的轉(zhuǎn)錄水平，同時(shí)NaCl、PEG和低溫脅迫也可輕微誘導(dǎo)其表達(dá)。

煙草是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物，在煙草的生長發(fā)育過程中，干旱、低溫、機(jī)械損傷、病蟲害等非生物和生物脅迫，均會(huì)導(dǎo)致煙葉減產(chǎn)降質(zhì)，造成經(jīng)濟(jì)損失。而海藻糖在植物抗逆過程中發(fā)揮重要作用，TPP作為合成海藻糖的關(guān)鍵酶，在煙草中的基因功能鮮有研究。因此，本研究利用比較基因組學(xué)和生物信息學(xué)手段，對煙草基因組中的TPP基因家族進(jìn)行全面鑒定和分析，包括：系統(tǒng)進(jìn)化分析，基因結(jié)構(gòu)及TPP蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析，共線性分析，啟動(dòng)子順式作用元件分析，組織特異性和非生物脅迫表達(dá)模式分析，為進(jìn)一步明確基因功能和煙草抗逆品種培育奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料、試劑、儀器

材料：普通煙草品種K326，保存于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所。將煙草種子先用75%酒精和過氧化氫消毒后，在超凈工作臺上播種到MS培養(yǎng)基上，轉(zhuǎn)至人工氣候室培養(yǎng)，溫度23 ℃，每天光照16 h，黑暗8 h。待其長出4片真葉后，移到MS液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)（對照），以300 mmol/L甘露醇MS液體培養(yǎng)基模擬干旱處理，以100 mmol/L NaCl MS液體培養(yǎng)基作為鹽脅迫處理，培養(yǎng)0、1、3和6 h后分別取8株。

試劑：康為世紀(jì)RNA提取試劑盒（FFPE DNA/RNA Kit）、康為世紀(jì)反轉(zhuǎn)錄試劑盒（HiFi-MMLV cDNA Kit）。

儀器：ABI公司Veriti96 PCR儀和7500型熒光定量PCR儀。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 煙草TPP家族鑒定及基本特征分析 從TAIR（https://www.arabidopsis.org）數(shù)據(jù)庫中下載擬南芥TPP家族成員的蛋白序列作為種子序列在煙草基因組數(shù)據(jù)庫（ftp://ftp.solgenomics.net/ genomes/Nicotiana_tabacum/）中進(jìn)行同源比對搜索（BLASTP，E值<100）。獲得的序列在Pfam（http://pfam.xfam.org/）數(shù)據(jù)庫中對其保守結(jié)構(gòu)域分析[20]，因?yàn)門PP家族成員都包含Trehalose_PPase結(jié)構(gòu)域（PF02358），因此去除不含Trehalose_PPase結(jié)構(gòu)域的序列。利用在線網(wǎng)站Expasy（http://www. expasy.org/tools/protparam.html）中的ProtParam計(jì)算蛋白長度、分子量和等電點(diǎn)[21]。

1.2.2 系統(tǒng)進(jìn)化分析 在NCBI數(shù)據(jù)庫（https://www. ncbi. nlm.nih.gov/）中下載水稻和小麥的TPP基因家族蛋白質(zhì)序列。使用MEGA X軟件對擬南芥、小麥、水稻和煙草的TPP基因家族蛋白質(zhì)序列進(jìn)行多序列比對（MUSCLE法）和構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（鄰接法，bootstrap設(shè)置為1000）[22]。

1.2.3 煙草TPP家族基因結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)保守結(jié)構(gòu)域分析 在茄科數(shù)據(jù)庫（http://solgenomics.net/）中下載普通煙草K326的CDS和gDNA序列，從中提取TPP基因家族的信息，通過在線網(wǎng)站GSDS（http://gsds.cbi.pku.edu.cn/）分析其基因結(jié)構(gòu)[23]。使用在線工具M(jìn)EME（http://meme.sdsc.edu/meme）分析NtTPP基因家族成員的保守結(jié)構(gòu)域[24]。

1.2.4 啟動(dòng)子和共線性分析 在NCBI中提取煙草TPP基因家族上游2000 bp的啟動(dòng)子序列，利用在線工具PlantCARE（http://bioinformatics.psb. ugent.be/webtools/plantcare/html/）檢測順式作用元件，篩選后用TBtools軟件進(jìn)行可視化。將擬南芥和K326全基因組進(jìn)行比對，對其共線性進(jìn)行分析，建立同源基因?qū)25]。

1.2.5 基因表達(dá)模式分析 從NCBI的GEO數(shù)據(jù)庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gds）中下載EDWARDS等[26]2017年發(fā)布的普通煙草K326轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)（GSE95717），提取不同組織和低溫、干旱脅迫下的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，進(jìn)行分析。

1.2.6 RNA提取和Real-time PCR分析 取對照、干旱和鹽處理0、1、3和6 h共4個(gè)時(shí)間段的煙草幼苗各8株，提取RNA，再反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。根據(jù)基因的CDS序列，使用qPrimerDB-qPCR Primer Database（https://biodb.swu.edu.cn/qprimerdb/）在線數(shù)據(jù)庫設(shè)計(jì)qRT-PCR引物（表1）。將提取的cDNA稀釋20倍作為qRT-PCR的模板。以作為內(nèi)參基因，每個(gè)樣品3次重復(fù)，最終試驗(yàn)結(jié)果采用2-ΔΔCt方法進(jìn)行分析。

表1 qRT-PCR引物信息

2 結(jié) 果

2.1 NtTPP基因家族鑒定和理化性質(zhì)分析

以擬南芥的TPP家族成員的蛋白質(zhì)序列為種子序列，在煙草基因組數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLASTP檢索，獲得候選煙草TPP基因家族成員。利用Pfam數(shù)據(jù)庫對候選成員保守結(jié)構(gòu)域分析后，篩選得到15個(gè)煙草TPP基因家族成員，其中有7個(gè)基因定位在染色體上。通過Prot Param工具分析煙草TPP基因家族成員的理化性質(zhì)，結(jié)果表明其蛋白質(zhì)長度在223～435個(gè)氨基酸之間，分子量在25?705.3～ 48?902.13 Da之間，等電點(diǎn)在6.31～9.68之間（表2）。

2.2 NtTPP基因家族系統(tǒng)進(jìn)化分析

為進(jìn)一步了解煙草TPP家族成員的進(jìn)化關(guān)系，對單子葉植物（水稻、小麥）和雙子葉植物（擬南芥、煙草）的共62條蛋白質(zhì)序列進(jìn)行比對，并構(gòu)建進(jìn)化樹（圖1）。按照之前的文獻(xiàn)報(bào)道[7]，我們將系統(tǒng)進(jìn)化樹分為4個(gè)分支即CLASS Ⅰ、CLASS Ⅱ、CLASS Ⅲ和CLASS Ⅳ。其中CLASS Ⅱ只包含3個(gè)NtTPP基因家族成員，表明這3個(gè)基因與其他幾個(gè)物種的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。NtTPP在亞家族CLASS Ⅰ和CLASS Ⅲ的成員數(shù)目均為6個(gè)，但在亞家族CLASS Ⅳ中并沒有NtTPP家族成員。

表2 普通煙草TPP基因家族鑒定及理化性質(zhì)分析

圖1 普通煙草TPP基因家族的系統(tǒng)進(jìn)化分析

2.3 NtTPP基因結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)保守基序分析

對NtTPP基因家族成員的基因結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)（圖2），外顯子數(shù)目最多的是，包含13個(gè)外顯子，最少的是，僅有6個(gè)外顯子。CLASS Ⅰ亞家族的外顯子數(shù)目為6～10個(gè)，CLASS Ⅱ亞家族8～10個(gè)，CLASS Ⅲ亞家族10～13個(gè)。其中和的外顯子、內(nèi)含子數(shù)目一致，均為11個(gè)，并且其位置和長度非常相似，表明這兩個(gè)基因在進(jìn)化關(guān)系上極其保守。

用MEME軟件對NtTPP基因家族成員的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行分析（圖2），共鑒定出15個(gè)保守基序（Motif 1～15）。CLASS Ⅰ和CLASS Ⅲ亞家族的保守基序均為8～12個(gè)，CLASS Ⅱ亞家族中僅有4個(gè)保守基序，其余兩個(gè)均為8個(gè)。其中Motif 1（TPP結(jié)構(gòu)域）在煙草NtTPP基因家族中高度保守，該結(jié)構(gòu)在海藻糖-6-磷酸磷酸酶（TPP）去磷酸化過程中起著重要的作用。值得注意的是，Motif 11僅存在于CLASS Ⅲ亞家族，Motif 14僅存在于CLASS Ⅰ亞家族，暗示這兩個(gè)亞家族功能可能比較特異。

2.4 NtTPP基因家族啟動(dòng)子分析

分析上游調(diào)控序列有助于解釋基因調(diào)控的機(jī)制，進(jìn)而預(yù)測其潛在功能[27]。使用在線工具PlantCARE，對NtTPP基因家族成員的上游2000 bp序列進(jìn)行順式作用元件分析（圖3）。結(jié)果表明，在12個(gè)基因（、、、、、、、、、、和）的啟動(dòng)子區(qū)域檢測到與干旱響應(yīng)相關(guān)的順式作用元件（MBS）；在13個(gè)基因（、、、、、、、、、、、和）的啟動(dòng)子區(qū)域檢測到與脫落酸響應(yīng)相關(guān)的順式作用元件（ABRE）；在9個(gè)基因（、、、、、、、和）的啟動(dòng)子區(qū)域檢測到與防御和逆境響應(yīng)相關(guān)的順式作用元件（W-box、富含TC重復(fù)序列）。除此之外，NtTPP基因家族的啟動(dòng)子區(qū)域還包含茉莉酸甲酯響應(yīng)元件、赤霉素響應(yīng)元件、生長素響應(yīng)元件、乙烯響應(yīng)元件、機(jī)械傷害響應(yīng)元件、厭氧響應(yīng)元件和低溫響應(yīng)元件。值得注意的是含有5個(gè)脫落酸響應(yīng)元件，含有高達(dá)8個(gè)防御和逆境響應(yīng)的順式作用元件。表明NtTPP基因家族與煙草的抗逆相關(guān)。

圖2 普通煙草TPP基因家族的基因結(jié)構(gòu)及保守基序分析

圖3 普通煙草TPP基因啟動(dòng)子區(qū)順式作用元件分析

2.5 NtTPP基因家族的共線性分析

對煙草基因的潛在生物學(xué)功能進(jìn)行分析，探索新基因與已經(jīng)充分研究的基因的關(guān)系，通過共線性分析建立擬南芥與煙草之間的同源基因?qū)Γ▓D4）。分析結(jié)果表明，普通煙草與擬南芥為同源基因?qū)Γc、和為同源基因?qū)?，與和為同源基因?qū)?，與為同源基因?qū)?，與為同源基因?qū)Α煵葜杏?個(gè)基因與擬南芥的7個(gè)基因形成共線對。

圖4 普通煙草和擬南芥的共線性分析

2.6 NtTPP基因家族表達(dá)模式

利用普通煙草轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)對基因在不同組織的表達(dá)模式分析，結(jié)果表明（圖5），基因在不同組織中的表達(dá)量變化較大。大部分基因在根中的表達(dá)量最高，在莖尖的表達(dá)量最低，包括CLASSⅠ亞家族的、和，CLASS Ⅱ亞家族的、和，CLASS Ⅲ亞家族的和。CLASS Ⅰ亞家族的和在莖中表達(dá)量較高，但在莖尖中表達(dá)量非常低。

對煙草轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中的低溫和干旱數(shù)據(jù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，低溫處理1 d，CLASS Ⅲ亞家族的、和表達(dá)量明顯上調(diào)，但CLASS Ⅰ亞家族的和表達(dá)量出現(xiàn)下調(diào)趨勢。干旱處理1 d時(shí)，和表達(dá)量明顯上調(diào)，表達(dá)量下調(diào)較多。此外，、和表達(dá)量隨著處理時(shí)間的增加逐漸上升，在干旱處理8 d時(shí)達(dá)到最高。

2.7 脅迫處理下煙草NtTPP基因家族表達(dá)模式

為進(jìn)一步探究基因的潛在功能，對15個(gè)基因在干旱和鹽脅迫處理下的表達(dá)模式進(jìn)行分析表明（圖6、7），在干旱處理下，、、、、、、、和的表達(dá)量逐漸升高，并在6 h達(dá)到最高，其中，、和在6 h時(shí)表達(dá)倍數(shù)分別達(dá)到13、12和14倍，在1 h時(shí)表達(dá)量最高，但、和的表達(dá)量出現(xiàn)下降的趨勢。除此之外，表達(dá)量呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢。干旱處理下有12個(gè)基因表達(dá)量呈現(xiàn)不同程度升高。

在鹽脅迫處理下，、、和表達(dá)量均出現(xiàn)先升高再降低再升高的趨勢，和表達(dá)量逐漸升高，并都在6 h時(shí)達(dá)到最高，表達(dá)倍數(shù)分別達(dá)到23和13倍，但和的表達(dá)量卻出現(xiàn)下降的趨勢。、、、、和在鹽脅迫處理1 h時(shí)表達(dá)量最高，其中在1 h時(shí)表達(dá)倍數(shù)達(dá)到12倍，隨后迅速下降。鹽脅迫處理下有13個(gè)基因表達(dá)量呈現(xiàn)不同程度升高。

注：紅色和綠色分別表示基因表達(dá)的上調(diào)和下調(diào)。

圖6 普通煙草TPP基因家族在干旱處理下的表達(dá)模式分析

圖7 普通煙草TPP基因家族在鹽處理下表達(dá)模式分析

3 討 論

本研究在普通煙草基因組中鑒定得到15個(gè)基因，均含有TPP保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化分析將其劃分為3個(gè)亞家族，分別是CLASS Ⅰ、CLASS Ⅱ和CLASS Ⅲ，其中CLASS Ⅱ亞家族的、和與其他物種的TPP基因親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，說明它們在煙草中可能發(fā)揮特有的功能。進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)煙草中沒有亞家族CLASS Ⅳ成員，這與基因在擬南芥、水稻以及小麥中的進(jìn)化不一致，表明CLASS Ⅳ亞家族成員可能在煙草長期的進(jìn)化過程中丟失。對其基因結(jié)構(gòu)和蛋白保守結(jié)構(gòu)域的分析發(fā)現(xiàn)，同一亞家族內(nèi)基因結(jié)構(gòu)非常相似，Motif 1（TPP結(jié)構(gòu)域）在所有的NtTPP基因家族成員中均有，Motif 11僅存在于CLASS Ⅲ亞家族，Motif 14僅存在于CLASS Ⅰ亞家族。對其啟動(dòng)子上的順式作用元件分析表明，NtTPP基因家族成員包含大量與植物激素響應(yīng)以及抗逆響應(yīng)相關(guān)的順式作用元件，進(jìn)一步表明該基因家族在影響煙草生長發(fā)育及抗逆脅迫中扮演著重要的角色。

對煙草NtTPP基因家族轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，NtTPP基因家族的大多數(shù)成員在低溫和干旱脅迫條件下均有響應(yīng)。前人研究發(fā)現(xiàn)過表達(dá)、和分別能提高擬南芥、水稻和玉米的耐旱性[11,14-15]；過表達(dá)基因能提高擬南芥高鹽脅迫耐受性[10]。我們進(jìn)一步利用qRT-PCR對基因的表達(dá)模式進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)除和外，其他煙草NtTPP家族成員在干旱和鹽脅迫誘導(dǎo)下表達(dá)量不同程度增加。其中、和在干旱脅迫下表達(dá)量增加較大，、和在鹽脅迫下表達(dá)量增加較大。另外在干旱脅迫條件下表達(dá)量顯著上調(diào)，該基因是擬南芥在煙草中的同源基因，先前的研究表明，可通過減少氣孔開放和改善根系結(jié)構(gòu)來提高擬南芥的抗旱能力[28]，在干旱條件下表達(dá)量上調(diào)暗示著該基因在煙草中也有相似功能。另外，在鹽脅迫條件下轉(zhuǎn)錄水平也顯著升高，表明該基因在煙草抵御逆境過程中有著重要作用。本研究通過NtTPP基因家族成員在非生物脅迫下的表達(dá)模式分析，初步鑒定一些抗逆基因、、、、、和，為研究其功能差異和提高栽培煙草的耐受性奠定基礎(chǔ)。

4 結(jié) 論

本研究從普通煙草基因組中鑒定到15個(gè)TPP基因，劃分為3個(gè)亞家族，分別為CLASS Ⅰ、CLASS Ⅱ和CLASS Ⅲ，均含有保守的TPP結(jié)構(gòu)域。啟動(dòng)子分析發(fā)現(xiàn)大量與逆境響應(yīng)有關(guān)的順式作用元件存在于NtTPP家族成員的啟動(dòng)子上，并且大部分基因在根中的表達(dá)量較高，同時(shí)對干旱和鹽脅迫均有響應(yīng)，說明基因可能主要利用根部來提高煙草的抗逆能力，具體的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步在煙草中對該基因進(jìn)行敲除以及過表達(dá)等方式來驗(yàn)證。

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Identification and Expression Pattern Analysis of the TPP Gene Family in Tobacco

LIU Tao1,2, GUO Cun3, ZOU Zongqing4, JIN Liquan5, WU Jian5, WEN Lichao1,2, DENG Zhichao1,2, CHU Yumeng1,2, WANG Lingtao6, LI Wei1*, GUO Yongfeng1*

(1. Key Laboratory of Tobacco Gene Resources, Institute of Tobacco Research of CAAS, Qingdao 266101, China; 2. Graduate School of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China; 3. Kunming Branch of Yunnan Provincial Tobacco Company, Kunming 650000, China; 4. Fujian Tobacco Company Longyan City Company, Longyan, Fujian 361000, China; 5. Shandong Linyi Tobacco Co., Ltd., Lanling Branch, Linyi, Shandong 277700, China; 6. Hubei Tobacco Company Shiyan City Company Zhuxi County Marketing Department, Shiyan, Hubei 442300, China)

Trehalose-6-phosphate phosphatase (TPP) is a key enzyme in trehalose metabolism and plays an important role in plant growth and abiotic stress response. In order to excavate members of the TPP gene family involved in tobacco development and stress response, we identified 15genes in the common tobacco genome through bioinformatic methods, with 7 of thegenes located on chromosomes. Phylogenetic analysis revealed that the newly identified tobacco TPP family members could be divided into three subfamilies: CLASS I, CLASS II and CLASS III. Syntenic analysis revealed that there were eight homologous gene pairs between Arabidopsis and tobacco. Sequence analysis showed that the promoters ofgenes contained various hormone- and stress-related elements. Furthermore, the expression ofgenes was studied in different tissues and most of thegenes were expressed at the highest level in roots. The expression pattern analysis showed that 12genes were up-regulated under drought stress, and 13genes could be induced by salt treatments. This indicates that thegene family members play an important role in drought and salt stress responses of tobacco.

tobacco; trehalose-6-phosphate phosphatase(TPP); drought stress; salt stress; expression pattern

10.13496/j.issn.1007-5119.2022.06.001

S572.03

A

1007-5119（2022）06-0001-08

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程（ASTIP-TRIC02）

劉 濤（1998-），男，在讀碩士研究生，研究方向：煙草育種。E-mail：2230928343@qq.com

，E-mail：李 偉，liwei06@caas.cn；郭永峰，guoyongfeng@caas.cn

2022-06-07

2022-09-27