段云鳳，王計宏，婁嘉豪，趙紫艷，賴 祺，尹俊林，曾廣智

云南民族大學民族醫(yī)藥學院 民族藥資源化學國家民委-教育部重點實驗室，昆明 650500

大戟屬(EuphorbiaL.)是大戟科(Euphorbiaceae)植物，該屬植物中多數(shù)種類屬于傳統(tǒng)中藥材[1]。霸王鞭(EuphorbiaroyleanaBoiss.)為大戟科大戟屬植物，有小毒[2]。根據(jù)文獻報道，該植物中含有二萜[3]、三萜[4]、甾體[5]和酚性成分[6]等次生代謝產(chǎn)物。有記載表明霸王鞭具有祛風、消炎、防腐殺菌的功效，其乳膠還可以用來填補爛掉的牙齒和抵抗感染[7]；此外，文獻還報道過霸王鞭的乙酸乙酯提取物有顯著的抗炎[8]、鎮(zhèn)痛和解熱[9]等功效。

目前關于霸王鞭的化學成分研究主要集中在其乳膠上，報道的化合物主要是二萜和三萜類，而藥理活性的研究也相對較少。鹵蟲模型是Meyer等[10]開發(fā)的快速測定樣品毒性和篩選生物活性物質(zhì)的方法，具體方法是將鹵蟲的蟲卵在有光照的條件下，在海水中快速孵化，依照趨光性挑選孵化的鹵蟲幼蟲，放入孔板中并加入不同濃度的待測樣品對剛孵化的鹵蟲進行致死性測試，從而得到半數(shù)致死量(LD50)，該模型被廣泛應用于生物化學的研究，有利于進行大量樣品的初篩。Sasidharan等[11]同樣用鹵蟲模型，對大戟科藥用植物一品紅的甲醇提取物進行了鹵蟲致死活性實驗，實驗結果表明：一品紅的花和根的甲醇粗提物具有生物毒性，并且此研究也發(fā)現(xiàn)了鹵蟲致死率與一品紅甲醇粗提物的濃度呈正相關；Meyer[10]比較了41種大戟科植物種子的乙醇提取物對鹵蟲的作用，發(fā)現(xiàn)14種大戟科植物種子對鹵蟲具有細胞毒活性；Barth等[12]使用鹵蟲模型，對大戟科植物巴豆樹的乙醇提取物進行了生物毒性評價，實驗結果表明巴豆樹的乙醇提取物具有明顯的生物毒性；但霸王鞭的次生代謝產(chǎn)物的鹵蟲致死活性未見報道。為了充分開發(fā)和利用霸王鞭資源，本實驗對霸王鞭全株的化學成分及鹵蟲致死活性進行研究。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

DRX-400共振儀(Bruker，瑞士)；NP7000泵-NU3000制備液相(江蘇漢邦，中國)；BS124S型電子分析天平(Sartorius，德國)；EYELA N-1300自動旋轉蒸發(fā)儀(上海圣科，中國)。

柱色譜用硅膠(100～400目；青島海洋，中國)；Sephadex LH-20(GE Healthcare，美國)；薄層色譜硅膠板GF254(青島海洋，中國)；半制備色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18(9.4 mm× 250 mm，5 μm)；色譜級甲醇(霍尼韋爾，美國)；純凈水(娃哈哈，中國)；其他化學試劑均為分析純(上?？萍?，中國)；顯色劑：5%硫酸-乙醇溶液(105 ℃加熱顯色)、10%磷鉬酸-乙醇溶液和茴香醛顯色劑。

1.2 植物材料

霸王鞭樣品于2019年03月購于云南省昭通市巧家縣白鶴灘鎮(zhèn)巧家營三家村，藥材經(jīng)昆明采智技術有限公司鑒定為霸王鞭(EuphorbiaroyleanaBoiss.)全株。標本保存于云南民族大學民族藥資源化學國家民委-教育部重點實驗室(樣品編號為201903BWB)。

1.3 提取與分離

取干燥的霸王鞭31 kg粉碎后，浸泡在95%甲醇溶液中，每24 h提取1次，共提取3次，合并濃縮后得到浸膏2.8 kg。將浸膏溶解在水相中，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，合并濃縮得到石油醚部分365.5 g，乙酸乙酯部分485 g，正丁醇部分423.7 g。

乙酸乙酯部分用60～100目540 g硅膠拌樣后裝柱，洗脫體系為石油醚-乙酸乙酯(50∶1、25∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1)進行洗脫，經(jīng)TLC檢測后合并，共得到7個組分，記為Fr.A～Fr.G。

Fr.C(47.1 g)用MCI樹脂(甲醇-水，50%→100%)梯度洗脫后，得到6個組分Fr.C-1～Fr.C-6。Fr.C-3(10.52 g)經(jīng)多次硅膠柱分離，洗脫體系為石油醚-乙酸乙酯(50∶1、25∶ 1、15∶1、10∶1、3∶1、0∶1)洗脫，得到4個組分Fr.C-3-1～Fr.C-3-4。Fr.C-3-2(2.3g)經(jīng)Sephadex LH-20分離，洗脫體系為二氯甲烷-甲醇(1∶1)，得到化合物1(6.9 mg)。Fr.C-3-3(3.6 g)硅膠柱層析后，用HPLC(流動相甲醇-水70∶10，流速1.5 mL/min，保留時間分別為35 min和40 min)分離，經(jīng)凝膠、硅膠柱分離純化，得到化合物2(8.2 mg)、3(5.1 mg)。

Fr.D(38.8 g)經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯(50∶1→5∶1)梯度洗脫，得到7個組分Fr.D-1～Fr.D-7。Fr.D-1(8.2 g)經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層層析分離，洗脫體系為二氯甲烷-甲醇(1∶1)，得到化合物4(11.2 mg)，剩余洗脫液再經(jīng)重結晶得到化合物5(20.4 mg)、化合物6(13.4mg)。將組分Fr.D-2(14.5 g)用硅膠進行柱色譜(洗脫體系為石油醚-二氯30∶1→0∶1)分離，經(jīng)TLC檢測合并為得到4個組分(Fr.D-5-1～Fr.D-5-4)。組分Fr.D-5-2(4.2 g)用 Sephadex LH-20(甲醇體系)分離純化，洗脫液合并后經(jīng)反復硅膠柱分離純化，分別得到化合物7(11.3 mg)、化合物8(15.1 mg)。組分Fr.D-3(12.9 g)經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯(35∶1→1∶1)梯度洗脫，TLC檢測合并得到3個組分Fr.D-3-1～Fr.D-3-3。組分Fr.D-3-2(3.3 g)Sephadex LH-20(甲醇體系)分離純化，洗脫液合并后再經(jīng)反復硅膠柱色譜純化得到化合物9(5.4 mg)、化合物10(7.9 mg)和化合物11(6.2 mg)。

Fr.F(81.3 g)部分進行硅膠柱色譜粗分離，依次用流動相為石油醚-乙酸乙酯(50∶1、25∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1)進行梯度洗脫，得到6個組分(Fr.F-1～Fr.F-6)。組分Fr.F-3(32.2 g)經(jīng)用硅膠柱色譜洗脫(洗脫體系為二氯-甲醇100∶1、50∶1、25∶1、10∶1、5∶1、1∶1)分離，TLC檢測合并相同組分，得到5個組分(Fr.F-3-1～Fr.F-3-5)。Fr.F-3-2(15.1 g)經(jīng)反復硅膠柱層析得到化合物12(22.3 mg)、化合物13(37.8 mg)。Fr.F-3-3(4.7 g)經(jīng)反復硅膠柱層析后重結晶(二氯甲烷)，得到化合物14(32.1 mg)，重結晶(甲醇)得到化合物15(17.9 mg)。

1.4 化合物的鹵蟲致死活性研究

取1 000 mg鹵蟲蟲卵于可樂瓶中，再加入500 mL海水于26 ℃光照條件下培養(yǎng)24 h。然后依照其趨光性取10只鹵蟲幼蟲放入96孔板中，96孔板的海水體積為90 μL，樣品初濃度為100 μmol/L稀釋到10 μmol/L，加樣體積為5 μL，將加樣的96孔板放在有光照并且恒溫為24 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，整個實驗過程對于鹵蟲將不再進行飼喂，24 h后，觀察鹵蟲的死亡情況，如果在10 s內(nèi)沒有觀察到鹵蟲有趨光性，則將鹵蟲記為死亡。以4%的二甲基亞砜(DMSO)水溶液為空白組，100 μmol/L的硫酸長春新堿(vincristine sulfate)為陽性對照，每組實驗三次取平均值。對存活數(shù)和總數(shù)(全部殺死后計數(shù))來計算LD50值。LD50值計算方法參考文獻[13]。

2 實驗結果

2.1 結構鑒定

化合物1白色結晶；分子式C30H50O，EI-MS：m/z426 [M]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.83(s，3H，H-25)，0.96(s，3H，H-29)，0.99(s，3H，H-30)，1.03(s，3H，H-27)，1.06(s，3H，H-24)，1.09(s，3H，H-26)，1.13(s，3H，H-23)，1.16(s，3H，H-28)，3.46(br s，1H，H-3)，5.62(d，1H，J=8.7 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：16.2(C-25)，18.2(C-1)，18.4(C-26)，19.6(C-27)，23.6(C-7)，25.4(C-24)，27.8(C-30)，33.1(C-19)，34.5(C-29)，34.6(C-11)，34.8(C-9)，35.0(C-21)，36(C-22)，37.8(C-13)，38.9(C-16)，39.3(C-14)，40.8(C-4)，43(C-18)，47.4(C-8)，49.7(C-10)，76.3(C-3)，122.0(C-6)，141.6(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道一致，確定化合物1為5(6)-gluten-3α-ol，結構見圖1。

圖1 化合物1～15的化學結構Fig.1 Chemical structures of compounds 1-15

化合物2白色結晶；分子式C30H50O，EI-MS：m/z427 [M + H]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.74(s，3H，H-28)，0.76(s，3H，H-23)，0.85(s，3H，H-30)，0.85(s，3H，H-27)，0.87(s，3H，H-24)，0.89(s，3H，H-29)，0.91(s，3H，H-25)，1.03(s，3H，H-26)，3.12(m，1H，H-3)，5.47(dd，J=8.2，3.1 Hz，1H，H-15)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：15.4(C-25)，15.5(C-24)，17.5(C-11)，18.8(C-6)，21.3(C-30)，27.1(C-27)，28.0(C-2)，28.8(C-28)，29.7(C-23)，29.8(C-26)，29.9(C-29)，33.0(C-22)，33.3(C-21)，33.7(C-7)，35.0(C-12)，35.8(C-16)，36.7(C-13)，37.5(C-10)，37.7(C-17)，38.0(C-1)，38.8(C-8)，39.0(C-4)，41.3(C-19)，48.7(C-9)，49.3(C-18)，55.5(C-5)，79.0(C-3)，116.9(C-15)，158.0(C-14)。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道一致，確定化合物2為蒲公英賽醇。

化合物3白色結晶；分子式C30H50O，EI-MS：m/z426 [M]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.82(s，3H，H-28)，0.85(s，3H，H-23)，0.91(s，3H，H-27)，0.91(s，3H，H-30)，0.94(s，3H，H-24)，0.95(s，3H，H-25)，0.95(s，3H，H-29)，1.09(s，3H，H-26)，3.40(t，1H，J=2.6 Hz，H-3)，5.52(dd，1H，J=8.1，3.1 Hz，H-15)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：15.2(C-25)，17.4(C-11)，18.7(C-6)，21.2(C-27)，22.2(C-24)，25.0(C-2)，26.0(C-26)，28.2(C-23)，28.8(C-20)，29.8(C-28)，29.9(C-30)，32.2(C-1)，33.0(C-21)，33.3(C-29)，35.0(C-12)，35.1(C-22)，35.8(C-10)，36.6(C-19)，37.3(C-4)，37.5(C-13)，37.7(C-16)，38.0(C-17)，39.1(C-8)，41.2(C-7)，48.7(C-18)，48.9(C-9)，49.2(C-5)，76.2(C-3)，116.7(C-15)，158.1(C-14)。以上數(shù)據(jù)與文獻[16]報道一致，確定化合物3為異蒲公英賽醇。

化合物4白色結晶；分子式C30H48O3，ESI-MS：m/z456.4 [M]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：0.67(s，3H，H-25)，0.74(s，3H，H-24)，0.80(d，3H，J=6.5 Hz，H-30)，0.86(s，3H，H-26)，0.89(s，3H，H-23)，0.90(d，3H，J=6.5 Hz，H-29)，1.03(s，3H，H-27)，2.98(t，1H，J=5.0 Hz，H-3)，5.12(br s，1H，H-12)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：15.1(C-26)，16.0(C-25)，16.9(C-24)，17.0(C-6)，17.9(C-29)，21.0(C-16)，22.8(C-2)，23.2(C-11，23)，23.8(C-30)，26.9(C-27)，27.5(C-21)，28.2(C-20)，30.1(C-19)，32.7(C-15)，36.3(C-7)，36.5(C-22)，38.2(C-10)，38.4(C-1)，38.4(C-8)，38.5(C-4)，41.6(C-14)，46.8(C-17)，47.0(C-9)，52.3(C-5)，54.7(C-18)，76.8(C-3)，124.5(C-12)，138.1(C-13)，178.3(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻[17]報道一致，確定化合物4為熊果酸。

化合物5白色結晶；分子式C30H48O3，EI-MS：m/z456 [M]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.73(s，3H，H-25)，0.76(s，3H，H-29)，0.77(s，3H，H-24)，0.92(s，3H，H-30)，0.98(s，3H，H-26)，1.08(s，3H，H-23)，1.11(s，3H，H-27)，3.15(dd，J=9.0，7.2 Hz，H-18)，3.21(dd，J=11.4，3.6 Hz，H-3α)，5.28(t，J=5.4 Hz，H-12)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：15.3(C-25)，15.5(C-24)，17.1(C-26)，18.3(C-6)，22.9(C-11)，23.4(C-16)，23.6(C-30)，25.9(C-27)，27.2(C-2)，27.7(C-15)，28(C-23)，30.7(C-20)，32.4(C-22)，32.6(C-7)，33.0(C-29)，33.8(C-21)，37.0(C-10)，38.4(C-1)，38.8(C-8)，39.2(C-4)，40.9(C-14)，41.6(C-18)，45.9(C-19)，46.5(C-17)，47.6(C-9)，55.2(C-5)，79.0(C-3)，122.6(C-12)，143.6(C-13)，183.2(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]報道一致，確定化合物5為齊墩果酸。

化合物6淡黃色結晶；分子式C16H14O6，EI-MS：m/z302 [M]+；1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ：3.86(s，3H，8-OCH3)，3.92(s，3H，7-OCH3)，3.98(s，3H，3-OCH3)，6.25(d，1H，J=2.1 Hz，H-2)，6.30(d，1H，J=2.1 Hz，H-4)，7.13(d，1H，J=8.4 Hz，H-5)，7.34(d，1H，J=8.4 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，C5D5N)δ：55.9(3-OCH3)，56.7(7-OCH3)，61.6(8-OCH3)，92.3(C-4)，97.4(C-2)，104.4(C-8b)，113.1(C-5)，116.0(C-8a)，120.8(C-6)，148.9(C-7)，149.3(C-4b)，151(C-8)，157.5(C-4a)，164.3(C-1)，166.9(C-3)，181.5(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻[19]報道一致，確定化合物6為1-羥基-3，7，8-三甲氧基黃酮。

化合物7淡黃色粉末；分子式C15H12O6，ESI-MS：m/z289 [M + H]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：3.84(s，3H，3-OCH3)，3.89(s，3H，7-OCH3)，6.39(d，1H，J=2.0 Hz，H-2)，6.60(d，1H，J=2.0 Hz，H-4)，6.98(d，1H，J=9.2 Hz，H-5)，7.51(d，1H，J=9.2 Hz，H-6)，11.80(s，1H，8-OH)，11.82(s，1H，1-OH)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：55.9(7-OCH3)，57.0(3-OCH3)，92.9(C-4)，97.2(C-2)，102.4(C-8b)，105.6(C-5)，107.8(C-8a)，120.4(C-6)，142.9(C-7)，149.6(C-8)，150.1(C-4b)，158.0(C-4a)，162.9(C-1)，167.5(C-3)，185.0(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻[20]報道一致，確定化合物7為甲基獐牙菜素。

化合物8黃色結晶；分子式C15H10O7，EI-MS：m/z302 [M]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.19(d，1H，J=2.4 Hz，H-6)，6.41(d，1H，J=2.4 Hz，H-8)，6.89(d，1H，J=8.4 Hz，H-5')，7.55(dd，1H，J=2.4，8.4 Hz，H-6')，7.69(d，1H，J=2.4 Hz，H-2')，12.50(s，1H，5-OH)。13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ：94.4(C-8)，99.3(C-6)，104.5(C-10)，115.9(C-2′)，116.2(C-5′)，121.7(C-6′)，124.1(C-1′)，137.3(C-3)，146.2(C-3′)，147.9(C-2)，148.8(C-4′)，158.2(C-9)，162.5(C-5)，165.7(C-7)，177.3(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻[21]報道一致，確定化合物8為槲皮素。

化合物9白色粉末；分子式C35H60O6，ESI-MS：m/z599.4 [M + Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：0.65(s，3H，H-18)，0.79(d，3H，J=6.9 Hz，H-27)，0.81(d，3H，J=7.0 Hz，H-26 )，0.83(t，3H，J=6.2 Hz，H-29)，0.90(d，3H，J=6.5 Hz，H-21)，0.95(s，3H，H-19)，4.22(d，1H，J=7.8 Hz，H-1')，4.42(t，1H，J=5.8 Hz，H-3)，5.33(s，1H，H-6)。13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：11.7(C-18)，11.8(C-29)，18.6(C-21)，18.9(C-19)，19.0(C-26)，19.7(C-27)，20.6(C-11)，22.6(C-28)，23.8(C-15)，25.4(C-23)，27.8(C-16)，28.6(C-25)，29.2(C-2)，31.4(C-7，8)，33.3(C-22)，35.5(C-20)，36.2(C-10)，36.8(C-1)，38.3(C-4)，41.8(C-13)，45.0(C-24)，49.6(C-9)，55.4(C-17)，56.1(C-14)，61.0(C-6′)，70.0(C-4′)，73.4(C-2′)，76.7(C-3，3′)，76.8(C-5′)，100.7(C-1′)，121.2(C-6)，140.4(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻[22]報道一致，確定化合物9為胡蘿卜苷。

化合物10白色絮狀物；分子式C29H50O，ESI-MS：m/z437.3 [M +Na]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:0.68(s，3H，H-18)，0.81(d，3H，J=6.9 Hz，H-27)，0.83(d，3H，J=7.0 Hz，H-26)，0.84(t，3H，J=7.6 Hz，H-29)，0.92(d，3H，J=6.5 Hz，H-21)，1.00(s，3H，H-19)，3.52(m，1H，H-3α)，5.35(d，1H，J=5.2 Hz，H-6)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：11.9(C-18)，12.0(C-26)，18.8(C-29)，19.0(C-25)，19.4(C-21)，19.8(C-19)，21.0(C-27)，23.0(C-28)，24.3(C-23)，26.0(C-15)，28.3(C-11)，29.1(C-16)，31.7(C-2)，31.9(C-7)，33.9(C-8、C-20)，36.1(C-22)，36.5(C-10)，37.2(C-1)，39.8(C-24)，42.2(C-12)，42.3(C-13)，45.8(C-4)，50.1(C-9)，56.0(C-17)，56.8(C-14)，71.8(C-3)，121.7(C-6)，140.8(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻[23]報道一致，確定化合物10為β-谷甾醇。

化合物11白色結晶；分子式C29H48O，ESI-MS：m/z435 [M + Na]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.79(d，3H，J=5.5 Hz，H-27)，5.36(br d，1H，J=5.0 Hz，H-6)，3.55(m，1H，H-3)，0.69(s，3H，H-18)，0.81(t，3H，J=7.4 Hz，H-29)，0.83(s，3H，H-19)，0.84(d，3H，J=6.3 Hz，H-26)，0.91(d，3H，J=6.0 Hz，H-21)，5.01(dd，1H，J=8.0，15.1 Hz，H-23)，5.13(dd，1H，J=8.0，15.1 Hz，H-22)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：11.9(C-18)，12.0(C-29)，18.8(C-21)，19.0(C-27)，19.1(C-19)，19.4(C-26)，19.8(C-11)，21.1(C-28)，23.1(C-15)，24.3(C-23)，26.1(C-16)，28.3(C-25)，29.1(C-2)，31.6(C-7)，31.9(C-8)，33.9(C-22)，36.2(C-20)，36.5(C-10)，37.3(C-1)，39.8(C-12)，42.2(C-13)，42.3(C-4)，45.8(C-24)，50.1(C-9)，56.1(C-17)，56.8(C-14)，71.7(C-3)，121.7(C-6)，140.8(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻[23]報道一致，確定化合物11為豆甾醇。

化合物12黃色粉末；分子式C8H8O4，ESI-MS:m/z167 [M -H]-；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：3.96(s，3H，3-OCH3)，6.13(s，1H，4-OH)，7.03(d，1H，J=8.4 Hz，H-5)，7.41(d，1H，J=1.8 Hz，H-2)，7.42(dd，1H，J=8.4，1.8 Hz，H-6)，9.81(s，1H，1-CHO)；13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ：56.3(OCH3)，111.2(C-2)，116.4(C-5)，128.0(C-6)，130.6(C-1)，149.8(C-3)，154.9(C-4)，191.9(C=O)。以上數(shù)據(jù)與文獻[24]報道一致，確定化合物12為香草醛。

化合物13白色油狀物；分子式C12H26O，EI-MS：m/z185 [M -H]-；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.88(t，3H，J=6.9Hz，H-12)，1.22～1.39(br s，18H，H3～H11)，1.57(m，2H，H-2)，3.64(t，2H，J=6.6Hz，H-1)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：14.2(C-12)，22.7(C-11)，25.8(C-10)，29.4(C-9)，29.5(C-8)，29.6(C-7)，29.7(C-6)，29.7(C-5)，29.7(C-4)，31.9(C-3)，32.8(C-2)，63.1(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻[25]報道一致，確定化合物13為十二烷醇。

化合物14淡黃色油狀物；分子式C20H40O，EI-MS：m/z296 [M]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.83～0.87(12H，H-16，18，19，20)，1.66(s，3H，H-17)，2.02(m，2H，H-4)，4.15(d，2H，J=7.0 Hz，H-1)，5.41(t，1H，J=7.0 Hz，H-2)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：16.2(C-20)，19.7(C-18)，19.7(C-19)，22.6(C-16)，22.7(C-17)，24.5(C-9)，24.8(C-13)，25.2(C-5)，27.9(C-15)，32.7(C-11)，32.8(C-7)，36.7(C-6)，37.3(C-12)，37.4(C-8)，37.4(C-10)，39.4(C-14)，39.9(C-4)，59.4(C-1)，123.1(C-2)，140.3(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[25]報道一致，確定化合物14為植物醇。

化合物15白色油狀物；分子式C60H108O5，EI-MS：m/z933.1 [M + Na]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(m，9H，3×-CH3)，1.27(m，58H，29×-CH2)，1.61(br s，6H，3×β-CH2)，2.04(m，12H，6×C=C-CH2)，2.30(m，6H，3×α-CH2)，2.77(t，2H，J=5.9Hz，C=C-CH2-C=C)，4.14(dd，2H，J=4.3，11.9Hz，H-3或H-1)，4.31(dd，2H，J=4.3，11.9 Hz，H-1或H-3)，5.27(m，1H，H-2)，5.34(m，8H，4×CH=CH)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：14.1，14.2，22.6，22.7，24.8，24.9，25.6，27.2，27.2，27.2，29.0，29.1，29.1，29.2，29.2，29.2，29.3，29.4，29.4，29.4，29.5，29.6，29.6，29.7，29.7，29.8，31.5，31.9，31.9，34.0，34.0，34.2，62.1(C-1)，68.8(C-2，3)，127.9，129.7，129.7，129.9，130.0，130.0，130.2，172.9，173.3，173.4。以上數(shù)據(jù)與文獻[26]報道一致，確定化合物15為1-[(12E,16E)-12,16-二十碳二烯?；鵠-2-[(E,E)-7,11-十八碳二烯酰基]-3-硬脂?；视?。

2.2 化合物的鹵蟲致死活性研究結果

通過鹵蟲致死活性測試，致死試驗為24 h，使用存活數(shù)和總數(shù)(全部殺死后計數(shù))來計算LD50值。LD50值計算方法參考文獻[13]?；衔?表現(xiàn)出較強的鹵蟲致死活性，其LD50為7.687 μM(見表1)。

表1 化合物1～14的鹵蟲致死活性Table 1 Brine shrimp lethal activity of compounds 1～14

3 討論與結論

該研究對霸王鞭的化學成分及藥理活性進行了研究，從其甲醇提取物的乙酸乙酯萃取部分中分離得到了15個化合物，化合物類型包括三萜(1～5)、黃酮(6～8)、甾體(9～11)、酚類(12)、脂肪醇(13)、鏈狀二萜(14)和脂肪酸(15)。對化合物1～14進行了鹵蟲致死活性研究，實驗結果顯示化合物1～14均具有鹵蟲致死活性，其中化合物4活性較強，LD50為7.687 μM，且化合物8(甾體)、14(鏈狀二萜)的效果要好于化合物3(三萜)。相較于前人只對霸王鞭的乳膠部分進行了化學成分的研究，并且大戟科植物的鹵蟲致死活性也只局限在甲醇或乙醇提取物上，本研究對霸王鞭的其他部分也進行了化學成分的研究，而鹵蟲致死活性也針對單體化合物進行了初步的研究，一定程度上豐富了霸王鞭的化學成分以及大戟科植物的藥理活性研究。為了合理開發(fā)利用該植物資源，有必要對霸王鞭中的活性成分開展進一步的系統(tǒng)研究，深入探討其活性機理及開展其體內(nèi)活性驗證。本研究為后續(xù)關于霸王鞭及大戟屬植物的生物活性研究提供了物質(zhì)及理論支持。