曾獻(xiàn)春，朱雅琴，王明明，李佳雯，劉蔓萩，莊偉偉*

1(成都醫(yī)學(xué)院 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，四川 成都，610500)2(西充縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川 南充，637200) 3(新疆特殊環(huán)境物種保護(hù)與調(diào)控生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，中亞區(qū)域有害生物聯(lián)合控制國際研究中心，干旱區(qū)植物逆境生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室, 生命科學(xué)學(xué)院(新疆師范大學(xué))，新疆 烏魯木齊，830054)

科技發(fā)展提高人類生活質(zhì)量的同時(shí)，也形成了不良生活方式和不健康飲食習(xí)慣，大大增加了便秘、炎癥性腸病等腸道疾病[1-3]。其中便秘的患病率最高，大約30%的人在一生中會(huì)經(jīng)歷便秘不適，老年人和婦女受之影響更甚[4]。長期便秘的患者，由于糞便在腸道內(nèi)停留過久，導(dǎo)致腸道內(nèi)有害物質(zhì)增多，對腸黏膜完整和肝臟代謝造成損傷[5]。人類腸道中大約有1 014種微生物定植，統(tǒng)稱為腸道菌群，它們相互制約，相互依存[6]，在發(fā)揮宿主生理功能、抵抗感染和自身免疫性疾病的風(fēng)險(xiǎn)方面發(fā)揮著重要作用[7]。腸道菌群的多樣性受到病理狀況、遺傳、飲食習(xí)慣、藥物和環(huán)境等多因素的影響[8]。腸道菌群的變化與疾病的發(fā)生密切相關(guān)[9]。腸道菌群的破壞還會(huì)影響短鏈脂肪酸的產(chǎn)生，進(jìn)而降低胰高血糖素肽的產(chǎn)生，抑制腸道的傳遞功能，進(jìn)一步影響胃腸道動(dòng)力學(xué)[10-11]。而腸道是重要的消化器官，對腸道的損傷可能導(dǎo)致營養(yǎng)吸收障礙和對身體的營養(yǎng)供應(yīng)不足[12]，進(jìn)而引發(fā)其他疾病。

目前，頑固性便秘主要依賴藥物治療，但存在腹瀉、腹痛、藥物依賴等副作用[13]。臨床實(shí)踐證實(shí)，益生菌在治療便秘過程中發(fā)揮較好的效果，安全無副作用。目前常用于治療便秘的益生菌有干酪乳桿菌、副干酪乳桿菌、植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、兩歧雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌等[14-16]，緩解便秘效果較好。

在本研究中，我們通過16S rRNA基因的V3～V4可變區(qū)進(jìn)行Miseq測序，分析復(fù)方地芬諾酯導(dǎo)致小鼠便秘后腸道菌群的變化，以及干酪乳桿菌干預(yù)便秘小鼠后腸道菌群變化。通過探究干酪乳桿菌對便秘小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)及菌落豐富度的影響，推測干酪乳桿菌降解腸道毒素的益生途徑。研究結(jié)果可為干酪乳桿菌緩解便秘作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)，也能夠拓寬干酪乳桿菌的益生功能和應(yīng)用范圍。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級健康、昆明小鼠(生產(chǎn)許可證號(hào)：SYXK(川)2018-119)72只，4～5周齡，體重(20±2)g，成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，飼養(yǎng)環(huán)境溫度22 ℃，12 h 明暗交替，自由進(jìn)食、飲水。

1.1.2 儀器與試劑

Arktik PCR儀、NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)，賽默飛世爾科技公司；MISEQ測序儀、Illumina高通量測序儀，Illumina公司；QuantiFluorTM-ST 藍(lán)色熒光定量系統(tǒng)，Promega公司。

試驗(yàn)菌株為課題組前期從8名3～8歲健康兒童糞便中篩選的具有高效降解3-甲基吲哚能力的干酪乳桿菌。MS培養(yǎng)基，北京路橋技術(shù)有限公司；復(fù)方地芬諾酯片，河南鼎昌藥業(yè)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 飼料制備

基礎(chǔ)飼料，成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供；營養(yǎng)成分具體為(質(zhì)量分?jǐn)?shù))：水分7.3%，粗蛋白質(zhì)21.1%，粗纖維3.2%，粗脂肪5.4%，粗灰分6.0%，總磷0.94%，鈣1.22%。

1.2.2 溶液的制備

復(fù)方地芬諾酯溶液：復(fù)方地芬諾酯片每片含復(fù)方地芬諾酯2.5 mg，小鼠便秘模型灌胃復(fù)方地芬諾酯溶液的計(jì)量為20 mg/(kg BW·d)。

1.2.3 小鼠便秘模型建立

昆明雄性小鼠72只，4周齡，體重(20±2)g，體形豐滿，營養(yǎng)良好，行動(dòng)靈敏，飲食、飲水及糞便正常。在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下給予基礎(chǔ)飼料，自由進(jìn)食和飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)選取12只小鼠作為正常對照組[平均體重為(26.12±0.63)g]，灌胃0.5 mL生理鹽水；其余60只小鼠作為便秘組[平均體重為(26.54±1.19)g]，灌胃劑量為20 mg/(kg BW·d)復(fù)方地芬諾酯溶液，共計(jì)7 d。每天稱量小鼠體重，并根據(jù)體重調(diào)整灌胃量。每天記錄小鼠的飲食飲水量，收集每組小鼠在灌胃后6 h的糞便，計(jì)算小鼠糞便粒數(shù)、新鮮糞便質(zhì)量及含水率，計(jì)算如公式(1)所示。以其均顯著低于正常對照組，確定便秘小鼠造模成功，挑取造模成功的小鼠進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

(1)

式中：A，新鮮糞便質(zhì)量，g；B，烘干后糞便質(zhì)量，g。

1.2.4 小鼠分組

正常對照組12只小鼠，便秘小鼠按體重隨機(jī)分成5組，每組12只。分組如表1所示。

表1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組情況Table 1 Experiments in rats grouping

飼喂時(shí)嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作規(guī)程進(jìn)行，飼養(yǎng)環(huán)境溫度22～27 ℃，相對濕度50%～70%，12 h明暗交替，每天上午9點(diǎn)稱量與添加飼料、計(jì)算飲水量并更換飲水瓶，清洗托盤，即時(shí)清除糞便等。每天10點(diǎn)開始灌胃，正常對照組與模型對照組小鼠灌胃生理鹽水，陽性對照組灌胃嗜熱鏈球菌，其余各組便秘小鼠灌胃相應(yīng)濃度的干酪乳桿菌。飼養(yǎng)時(shí)間共計(jì)3 d。

1.2.5 樣本收集

實(shí)驗(yàn)期間，每天灌胃后將小鼠放入高壓滅菌代謝籠，在灌胃6 h后收集各組小鼠糞便，稱量糞便質(zhì)量、計(jì)數(shù)糞便粒數(shù)，新鮮糞便于60 ℃烘箱中烘干后計(jì)算糞便含水率。同時(shí)，無菌收集10粒新鮮糞便，分裝于2個(gè)滅菌EP管中，放入-80 ℃的冰箱保存。

1.2.6 小鼠糞便DNA提取

小鼠糞便中微生物群落總DNA抽提根據(jù) E.Z.N.A.? soil DNA kit說明書進(jìn)行。接著使用1%的瓊脂糖凝膠電泳(5 V/cm，20 min)檢測DNA的提取質(zhì)量，使用NanoDrop 2000微量分光光度計(jì)測定DNA濃度和純度(A260/230和A260/280)。

1.2.7 16S rRNA基因V3～V4可變區(qū)的PCR擴(kuò)增

以1.2.6中提取的細(xì)菌基因組DNA為模板，引物為338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)，對16S rRNA基因V3～V4可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

1.2.8 PCR產(chǎn)物回收

PCR產(chǎn)物用2.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，使用AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒回收純化，并用QuantiFluorTM-ST藍(lán)色熒光定量系統(tǒng)對回收產(chǎn)物進(jìn)行檢測定量，之后按照每個(gè)樣本的測序量要求，進(jìn)行相應(yīng)比例的混合。

1.2.9 小鼠腸道微生物群落結(jié)構(gòu)的高通量測序分析

構(gòu)建PE 300文庫，利用Illumina公司的Miseq PE300平臺(tái)進(jìn)行測序，由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成測序。

1.3 小鼠腸道菌群Alpha多樣性分析

使用UCHIME軟件將嵌合體序列去除，抽平后根據(jù)UPARSE軟件中相似度的默認(rèn)值97%對序列進(jìn)行操作分類單元(operational taxonomic units，OTU)的聚類。采用RDP classifier貝葉斯算法對97%相似水平的OUT代表序列進(jìn)行分類學(xué)分析，并在各個(gè)分類水平統(tǒng)計(jì)各樣本的群落組成。每組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±δ)表示，多組間比較采用單因素方差分析最小顯著差別(least significant difference，LSD)法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 干酪乳桿菌對便秘小鼠糞便粒數(shù)、質(zhì)量、含水率的影響

由表2可以看出，與正常對照組相比，各便秘組小鼠糞便粒數(shù)顯著降低(P<0.05)，糞便粒數(shù)僅為正常對照組的29.17%～34.38%。干酪乳桿菌干預(yù)后，小鼠糞便粒數(shù)逐漸穩(wěn)步上升。干預(yù)3 d后，干酪乳桿菌低、中、高劑量組小鼠糞便粒數(shù)分別為模型對照組的1.78、1.67、1.60倍(P<0.05)；其中效果最好的為低劑量組，優(yōu)于陽性對照組(P>0.05)。

表2 干酪乳桿菌對便秘小鼠糞便粒數(shù)的影響Table 2 Effect of Lactobacillus casei on fecal number of constipated mice

由表3可知，與正常對照組相比，便秘組小鼠糞便重量明顯減少，僅為正常對照組的31.31%～39.39%(P<0.05)。干酪乳桿菌干預(yù)后，各組便秘小鼠糞便重量均有增加趨勢。干預(yù)3 d后，干酪乳桿菌低、中、高劑量組糞便質(zhì)量分別為模型對照組的1.98、2.18、2.16 倍(P<0.05)；干酪乳桿菌中、高劑量效果較好，且與陽性對照組無顯著差異(P>0.05)。

從表4可以得出，與正常對照組相比，便秘小鼠糞便中的含水率顯著降低，僅為正常對照組的61.41%～65.08%(P<0.05)。干酪乳桿菌干預(yù)3 d后，干酪乳桿菌低、中、高劑量組小鼠糞便含水率逐漸升高，分別為模型對照組的1.31、1.35、1.40倍(P<0.05)，其中高劑量組效果最好，且均與陽性對照組無顯著差異(P>0.05)。

造模結(jié)束時(shí)，便秘組小鼠糞便粒數(shù)、質(zhì)量以及含水率均顯著低于正常對照組。干酪乳桿菌干預(yù)3 d后，與模型對照組相比，干酪乳桿菌低、中、高劑量組小鼠的糞便粒數(shù)、質(zhì)量以及含水率顯著升高(P<0.05)。表明復(fù)方地芬諾酯可以通過促進(jìn)腸道水分吸收，造成因腸蠕動(dòng)抑制而致的小鼠便秘。干酪乳桿菌可以通過抑制腸道水分重吸收，從而增加糞便中的含水率，達(dá)到緩解便秘的作用。

表4 干酪乳桿菌對便秘小鼠糞便含水率的影響 單位：%

2.2 小鼠腸道菌群Alpha多樣性分析

樣品中的細(xì)菌Shannon指數(shù)、Chao指數(shù)、Sobs指數(shù)、Simpson指數(shù)、Coverage指數(shù)等指標(biāo)進(jìn)行綜合分析，實(shí)現(xiàn)對樣品多樣性進(jìn)行分析。反映群落豐富度的指數(shù)有Sobs、Chao，反映群落多樣性的指數(shù)有Shannon、Simpson，反映群落覆蓋度的指數(shù)有Coverage。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5、表6。

表5 造模結(jié)束時(shí)小鼠腸道菌群Alpha多樣性分析Table 5 Analysis of Alpha diversity of intestinal microflora in mice at the end of modeling

表6 干酪乳桿菌干預(yù)后小鼠腸道菌群Alpha多樣性分析Table 6 Analysis of Alpha diversity of intestinal microflora in mice after intervention of Lactobacillus casei

在做干酪乳桿菌干預(yù)實(shí)驗(yàn)前，隨機(jī)在各組小鼠中選擇幾只進(jìn)行腸道菌群結(jié)構(gòu)分析，無顯著差異。造模后，與正常對照組相比，其余各組的Chao指數(shù)較高。此外，Chao指數(shù)是Sobs數(shù)目的1.3倍左右，表明本研究的細(xì)菌多樣性測序深度達(dá)到了豐富度估計(jì)值的77%左右。便秘組小鼠Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)均高于正常對照組，表明小鼠便秘后腸道菌群多樣性有所降低，且各組間差異不大。所有樣品的覆蓋率介于99.22%～99.25%，表明糞便中幾乎所有的細(xì)菌物種信息都能被檢測到。

與模型對照組相比，干酪乳桿菌干預(yù)的3組便秘小鼠的Chao指數(shù)是Sobs數(shù)目的1.3倍左右，表明本研究的細(xì)菌多樣性測序深度達(dá)到了豐富度估計(jì)值的77%左右。與模型對照組相比，干酪乳桿菌低劑量組和陽性對照組的Shannon指數(shù)升高，而干酪乳桿菌中劑量組、高劑量組降低，表明干酪乳桿菌低劑量組、陽性對照組菌群多樣性較高，而干酪乳桿菌中劑量組、高劑量組較低。Simpson指數(shù)介于0.05～0.11，菌群多樣性差異不大。所有樣品的覆蓋率介于99.36%～99.42%，表明干預(yù)后小鼠糞便中幾乎所有的細(xì)菌物種信息都能被檢測到。

2.3 基于門水平上小鼠腸道菌群細(xì)菌分類學(xué)分析

便秘模型造模試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，6組小鼠腸道菌群隸屬于1域，1界，15門，21綱，41目，74科，180屬，317種。與干酪乳桿菌干預(yù)后相比，在門水平上增加了梭桿菌門(Fusobacteria)和浮霉菌門(Planctomycetes)。在門水平上對優(yōu)勢菌群進(jìn)行分析，結(jié)果如圖1所示。優(yōu)勢菌群為擬桿菌門(Bacteroidetes)、厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)。

圖1 門水平上便秘小鼠腸道細(xì)菌優(yōu)勢菌群分析Fig.1 Analysis of predominant bacterial microflora in intestinal tract of constipated mice at phylum level

干酪乳桿菌干預(yù)試驗(yàn)完成后，6組小鼠的腸道菌群包含1域，1界，13門，19綱，39目，81科，198屬，335種。其中13門分別為擬桿菌門、放線菌門(Actinobacteria)、厚壁菌門、變形菌門、疣微菌門(Verrucomicrobia)、柔膜菌門(Tenericutes)、螺旋體門(Spirochaetes)、Patescibacteria菌門、Epsilonbacteraeota門、異常球菌-棲熱菌門(Deinococcus-Thermus)、脫鐵桿菌門(Deferribacteres)、藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria)和未分類到門的細(xì)菌(unclassified-k-norank-d-Bacteria)。在門水平上對優(yōu)勢菌群進(jìn)行分析，結(jié)果如圖2所示。優(yōu)勢菌群為擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門、放線菌門、Epsilonbacteraeota門。

以上結(jié)果提示干酪乳桿菌干預(yù)試驗(yàn)完成后，6組小鼠腸道菌群中優(yōu)勢菌群發(fā)生改變，灌胃干酪乳桿菌可以調(diào)節(jié)小鼠腸道菌群。

圖2 門水平上干酪乳桿菌干預(yù)便秘小鼠后腸道細(xì)菌優(yōu)勢菌群分析Fig.2 Analysis of predominant bacterial microflora in intestinal after intervention of Lactobacillus casei at phylum level in constipated mice

2.4 基于屬水平上小鼠腸道菌群中優(yōu)勢菌群分析

如圖3所示，便秘試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，6組小鼠腸道菌群中的優(yōu)勢菌群為乳桿菌屬(Lactobacillus)、norank_f_Muribaculaceae、另枝菌屬(Alistipes)、Odoribacter。其中差異顯著的物種有乳桿菌屬、Rikenellaceae_RC9_gut_group(P<0.05)，差異極顯著的物種有另枝菌屬、螺桿菌屬(Helicobacter)、普雷沃氏菌屬(Prevotellaceae-UCG-001)、嗜冷桿菌屬(Psychrobacter)(P<0.01)、Prevotellaceae_NK3B31_group spp.(P<0.001)。造模后，與正常對照組相比，便秘小鼠腸道菌群中乳桿菌屬、另枝菌屬豐度有不同程度的降低，而普雷沃氏菌屬、norank_f_Muribaculaceaespp.豐度升高。提示便秘可導(dǎo)致腸道菌群發(fā)生改變。

圖3 屬水平上便秘小鼠腸道細(xì)菌組間差異顯著性檢驗(yàn)Fig.3 Significant difference test of intestinal bacteria between groups of constipated mice at genus level注：*0.01

如圖4所示，干酪乳桿菌干預(yù)試驗(yàn)完成后，6組小鼠的腸道菌群中的優(yōu)勢菌群為norank_f_Muribaculaceaespp.、乳桿菌屬、擬普雷沃菌屬(Alloprevotella)、嗜冷桿菌屬。其中差異顯著的物種有嗜冷桿菌屬、擬桿菌屬(Bacteroides)、Odoribacter(P<0.05)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)(P<0.01)、螺桿菌屬、普雷沃氏菌屬、普雷沃氏菌科NK3B31群(Prevotellaceae_NK3B31_group)(P<0.001)。并且干酪乳桿菌干預(yù)后，與模型對照組相比，灌胃干酪乳桿菌的便秘小鼠腸道菌群中普雷沃氏菌屬、norank_f_Muribaculaceae豐度降低，另枝菌屬豐度升高；干酪乳桿菌中劑量組、干酪乳桿菌高劑量組、陽性對照組中乳桿菌屬豐度升高。此結(jié)果表明干酪乳桿菌可以提高腸道中乳桿菌屬、另枝菌屬的豐度，并降低條件致病菌普雷沃氏菌屬的豐度，從而改善腸道菌群。

圖4 屬水平上干酪乳桿菌干預(yù)便秘小鼠后腸道細(xì)菌組間差異顯著性檢驗(yàn)Fig.4 Significant difference test of intestinal bacteria between groups of constipated mice after intervention of Lactobacillus casei at genus level

3 結(jié)論與討論

在動(dòng)物的腸道中，各種菌群調(diào)節(jié)著腸道代謝和健康。很多研究表明新鮮糞便中菌群的變化能反映腸道內(nèi)菌群的情況。通過菌群多樣性分析，發(fā)現(xiàn)覆蓋率指數(shù)越高，能夠檢測出樣本中序列的概率也就越高；ACE指數(shù)、Chao l指數(shù)和Shannon指數(shù)越大，則表明菌群的多樣性和豐富度越高；Simpson指數(shù)越大，說明群落多樣性越低[17]。本研究通過高通量測序技術(shù)對便秘后小鼠和干酪乳桿菌干預(yù)后小鼠的120個(gè)糞便樣品進(jìn)行了測序，共獲得6 132 570×2條序列。經(jīng)過隨機(jī)抽樣將測序深度均一化、數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化后，有效序列數(shù)為6 132 570，每個(gè)樣品的序列數(shù)為23 077，在97%的相似性水平上共劃分出1 531個(gè)OTU。對菌群進(jìn)行多樣性分析發(fā)現(xiàn)，便秘組小鼠Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)均高于正常對照組，表明小鼠便秘后腸道菌群多樣性有所降低。與模型對照組相比，干酪乳桿菌低劑量組和陽性對照組的Shannon指數(shù)升高，而干酪乳桿菌中劑量組、高劑量組降低，表明干酪乳桿菌低劑量組、陽性對照組菌群多樣性較高，而干酪乳桿菌中劑量組、高劑量組的菌群多樣性較低。這與靳志敏等[18]用不同劑量植物乳桿菌對小鼠腸道菌群影響的研究結(jié)果相似，說明乳桿菌對腸道微生物區(qū)系具有一定的調(diào)節(jié)作用。

研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌通過競爭腸道黏附位點(diǎn)及分泌抗菌物質(zhì)等方式抑制病原菌的定植和生長繁殖，維持腸道健康[15]。本研究對便秘小鼠進(jìn)行干酪乳桿菌干預(yù)后，乳桿菌屬、另枝菌屬的豐度增加，普雷沃氏菌屬豐度降低。張董燕等[19]給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂卷曲乳桿菌，發(fā)現(xiàn)糞便菌群物種豐富度提高了，而且糞便中厚壁菌門、乳桿菌屬和光崗菌屬的比例也明顯增加。乳桿菌屬是公認(rèn)的益生菌，可通過產(chǎn)生乳酸、乙酸、過氧化氫、細(xì)菌素等抗菌物質(zhì)，在宿主腸道環(huán)境中發(fā)揮有益作用，并抑制腸道有害細(xì)菌的增長來改善宿主腸道菌群的平衡，增強(qiáng)宿主對病原體的防御屏障功能[20]。1項(xiàng)研究表明，與對照組相比，功能性便秘的成人糞便中雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量明顯減少[21]。在服用益生菌后，短雙歧桿菌、長雙歧桿菌和青春雙歧桿菌的數(shù)量顯著增加。對補(bǔ)充益生菌前后糞便的分析有助于檢測益生菌引起的腸道菌群的確切變化[22]。乳桿菌屬、另枝菌屬屬于腸道有益菌，可以保護(hù)腸道免疫系統(tǒng)不受外界環(huán)境刺激，增強(qiáng)腸道的黏膜功能，從而對炎癥進(jìn)行抵抗[23-24]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)便秘導(dǎo)致小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了炎癥反應(yīng)，在經(jīng)過干酪乳桿菌干預(yù)后，干酪乳桿菌通過增加腸道中乳桿菌屬、另枝菌屬的豐度，以及降低條件致病菌普雷沃氏菌屬的豐度，影響了腸道菌群與腸道病原體之間的競爭，從而改善腸道菌群，達(dá)到緩解便秘的作用。

對小鼠腸道菌群在屬水平上進(jìn)行優(yōu)勢菌群分析，并且進(jìn)行組間差異分析發(fā)現(xiàn)，造模結(jié)束時(shí)6組小鼠腸道菌群中的優(yōu)勢菌群為乳桿菌屬、norank_f_Muribaculaceae、另枝菌屬、Odoribacter。其中差異顯著的物種有乳桿菌屬、Rikenellaceae_RC9_gut_group(P<0.05)、另枝菌屬、螺桿菌屬、普雷沃氏菌屬、嗜冷桿菌屬(P<0.01)、Prevotellaceae_NK3B31_group(P<0.001)。與正常對照組相比，便秘小鼠腸道菌群中乳桿菌屬、另枝菌屬豐度有不同程度的降低，而普雷沃氏菌屬、norank_f_Muribaculaceae豐度升高。干酪乳桿菌干預(yù)后，小鼠腸道優(yōu)勢菌群為norank_f_Muribaculaceae、擬普雷沃菌屬、嗜冷桿菌屬、另枝菌屬。其中差異顯著的物種有嗜冷桿菌屬、擬桿菌屬、Odoribacter(P<0.05)、葡萄球菌屬(P<0.01)、螺桿菌屬、普雷沃氏菌屬、普雷沃氏菌科NK3B31群(P<0.001)。與模型對照組相比，灌胃干酪乳桿菌的便秘小鼠腸道菌群中普雷沃氏菌屬、norank_f_Muribaculaceae豐度降低，另枝菌屬豐度升高；干酪乳桿菌中劑量組、干酪乳桿菌高劑量組、陽性對照組中乳桿菌屬豐度升高。提示便秘可導(dǎo)致腸道菌群發(fā)生改變。此結(jié)果表明干酪乳桿菌可以提高腸道中乳桿菌屬、另枝菌屬的豐度，并降低條件致病菌普雷沃氏菌屬的豐度，從而改善腸道菌群，達(dá)到緩解便秘作用。