韋小敏，馬亞宣，李先芳

(河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院 動物醫(yī)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046)

女貞子為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實(shí)，其性涼，味甘、苦，歸肝、腎經(jīng)，有滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)的功能。常用于治療肝腎陰虛、眩暈耳鳴、腰膝酸軟、須發(fā)早白、目暗不明、內(nèi)熱消渴、骨蒸潮熱等癥[1]。女貞子歷代應(yīng)用的炮制方法有10 余種，但臨床上以生品和酒制品的應(yīng)用最為廣泛[2]。其酒制方法主要有酒蒸、酒燉和酒炙，具體實(shí)踐中酒制的時間長短有著很大的差異，有2 h、3 h、4 h、8 h，甚至有3 d者[3]。

女貞子經(jīng)過不同炮制后，其臨床功效會發(fā)生變化。生女貞子飲片以清肝明目、滋陰潤燥為主，酒制后滋補(bǔ)肝腎作用顯著增強(qiáng)[4]。這些改變必然與其內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)的變化密切相關(guān)。女貞子化學(xué)成分主要有萜類、環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類、黃酮類、揮發(fā)油、脂肪酸等幾大類，此外還有多糖、微量元素；其中最具活性成分和藥用價值的屬三萜類、環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類，其各自代表成分為齊墩果酸、特女貞苷和紅景天苷[5,6]。女貞子中齊墩果酸含量較大且藥理作用豐富，在抑制腫瘤細(xì)胞增長、抗炎、降脂、提高免疫等方面都有很好的療效[7]，2005年版《中國藥典》[8]將齊墩果酸作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。環(huán)烯醚萜類化合物是單萜類化合物的代謝產(chǎn)物，特女貞苷是其中的主要成分，具有保肝利膽、降血糖、調(diào)血脂、抗衰老以及調(diào)節(jié)免疫等功效[9]，自2010年后一直被《中國藥典》[1，10]定為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)以不同的酒制(酒蒸、酒燉)方法和時間為影響因素，以特女貞苷、齊墩果酸的含量為指標(biāo)，考察不同炮制工藝對女貞子主要成分變化的影響，為整體評價女貞子質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 女貞子藥材

冬季，女貞子果實(shí)成熟后，在河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院校園采摘，除去雜質(zhì)和病蟲害果實(shí)，洗凈，置沸水中略燙后，置陰涼通風(fēng)處干燥，得凈女貞子原藥材。

本品經(jīng)河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院中藥教研室程茂高老師鑒定，確為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實(shí)。

1.2 主要儀器

高效液相色譜儀；電子天平；高速萬能粉碎機(jī)；電子恒溫不銹鋼水浴鍋；電熱鼓風(fēng)干燥箱；圓底燒瓶；回流冷凝管等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 女貞子的炮制[11]取女貞子原藥材200 g，等份置于4個燒杯中，加20%的黃酒拌勻，用鋁箔紙蓋嚴(yán)，悶潤至酒被完全吸盡后，置不銹鋼鍋內(nèi)蒸2 h、4 h、8 h、10 h，取出干燥。

取女貞子原藥材200 g，等份置于4個燒杯中，加20%的黃酒拌勻，用鋁箔紙蓋嚴(yán)，悶潤至酒被完全吸盡后，置于不銹鋼鍋內(nèi)隔水燉2 h、4 h、8 h、10 h，取出干燥。

1.3.2 樣品的預(yù)處理 將上述凈女貞子和用不同酒制方法炮制過后的女貞子飲片，用萬能粉碎機(jī)粉碎至能通過三號篩，而后稱取各樣品粉末約2 g，放置于干燥后的稱量瓶中，精密稱定。把瓶蓋打開后，在105 ℃的干燥箱內(nèi)干燥5個小時，然后把瓶蓋蓋好轉(zhuǎn)移置干燥器中，放冷約三十分鐘后精密稱定，再在上述溫度下干燥1小時，放冷，再次稱重，直到連續(xù)兩次稱重的差異不大于5 mg為止[12]。以此干燥后的粉末作為供試品，分別測定其中的齊墩果酸和特女貞苷含量。

1.3.3 齊墩果酸的含量測定[13]精密稱取5.25 mg齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品，放到25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度后，配成濃度為0.210 mg/mL的齊墩果酸對照品溶液，搖勻，用0.45微米微孔濾膜濾過，作為對照品溶液。精密吸取上述齊墩果酸對照品溶液0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL，然后用甲醇定容到10mL的容量瓶中。選用色譜柱Kromasil C 18 (5 μm，4.6 mm×200 mm)；流動相為甲醇-水(86∶14)；柱溫30 ℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；在波長208 nm下檢測其峰面積。以濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=2184.2X+240.4，R2=0.9992。表明齊墩果酸在 0.0084 ～0.042 mg/mL 濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

準(zhǔn)確稱取各樣品粉末1 g，放到100 mL的圓底燒瓶內(nèi)，依次用20 mL、15 mL、10 mL無水乙醇在80 ℃的恒溫水浴鍋中進(jìn)行回流提取，每次提取3 min，而后用濾紙濾過，再將3次濾過后的濾液合并到100mL的容量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液備用。分別取上述制得的供試品溶液 10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算各樣品的齊墩果酸含量。

1.3.4 特女貞苷的含量測定[1]精密稱取6.25 mg特女貞苷標(biāo)準(zhǔn)品，放到25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度后，配成濃度為0.250 mg/mL的特女貞苷對照品溶液，搖勻，用0.45微米微孔濾膜濾過，精密吸取特女貞苷對照品溶液0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL，用甲醇定容到10 mL的容量瓶中。選用色譜柱Kromasil C 18 (5 μm，4.6 mm×200 mm)；流動相為甲醇-水(40∶60)；柱溫30 ℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；在波長224 nm下檢測其峰面積。以濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到特女貞苷的回歸方程為：Y=11881X-46.226，R2=0.9998，表明特女貞苷在0.01～0.05 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

準(zhǔn)確稱取各樣品粉末0.5 g，放到圓底燒瓶中，加入50%的乙醇50 mL，再次稱定其重量，在80 ℃的恒溫水浴鍋中回流提取1 h，取出放冷后，再稱定重量，并用50%的乙醇補(bǔ)足減失的重量，后用濾紙濾過后轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，搖勻，再用0.45 μm的微孔濾膜濾過，得續(xù)濾液[13]。分別取上述制得的供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算各樣品的特女貞苷含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 酒蒸對女貞子中齊墩果酸和特女貞苷含量的影響

女貞子酒蒸不同時間后，飲片中的齊墩果酸含量見圖1。結(jié)果顯示，女貞子酒蒸后齊墩果酸的含量與生品相比較明顯增加，并且在酒蒸4個小時的時候達(dá)到最高，其后隨著蒸制時間的延長又呈下降趨勢。女貞子酒蒸不同時間后，飲片中的特女貞苷含量見圖2。從圖2可以看出，女貞子酒蒸后，特女貞苷含量與生品相比較有所降低，且隨著酒蒸時間的延長，特女貞苷的含量逐漸降低。

圖1 不同酒蒸時間齊墩果酸含量變化

圖2 不同酒蒸時間特女貞苷含量變化

2.2 酒燉對女貞子中齊墩果酸和特女貞苷含量的影響

結(jié)果顯示，女貞子經(jīng)酒燉后，其主要有效成分齊墩果酸含量較生品明顯增加，并且在酒燉4小時的時候，齊墩果酸含量達(dá)到最高，其變化趨勢見圖3。女貞子經(jīng)酒燉后，其主要有效成分特女貞苷含量與生品相比較有所減少，且隨著酒燉時間的延長，特女貞苷的含量逐漸降低。其變化趨勢見圖4。

圖3 不同酒燉時間齊墩果酸含量變化

圖4 不同酒燉時間特女貞苷含量變化

2.3 女貞子酒制工藝的綜合評價分析

徐維統(tǒng)等[13]以齊墩果酸和特女貞苷為綜合評判指標(biāo)，優(yōu)選了酒蒸女貞子的最佳炮制工藝。他們根據(jù)齊墩果酸和特女貞苷這兩個指標(biāo)成分在工藝選擇中的主次地位，分別給予了齊墩果酸 60% 和特女貞苷40% 的加權(quán)系數(shù)，求出綜合質(zhì)量評分，分值最高的即為最佳炮制工藝。本實(shí)驗(yàn)參考該方法來綜合評價女貞子的炮制工藝。根據(jù)Y=(各樣品中齊墩果酸含量÷9個樣品中齊墩果酸最高含量)×60%+(各樣品中特女貞苷含量÷9個樣品中特女貞苷最高含量)×40%，將所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行計算，求出綜合評價值Y，其結(jié)果見表1。

表1 女貞子炮制工藝的綜合評價

根據(jù)計算結(jié)果看出，在酒蒸4 h的時候，其綜合評價值最高。因此，本實(shí)驗(yàn)顯示，女貞子較佳的酒制工藝為酒蒸4 h。

3 討論

中藥有效成分受炮制方法的影響。采用不同炮制方法處理，會對女貞子化學(xué)成分的含量產(chǎn)生一定影響[14，15]。本實(shí)驗(yàn)通過對女貞子生品和不同酒制品中齊墩果酸和特女貞苷含量比較, 研究酒制對女貞子的影響。結(jié)果表明，女貞子經(jīng)酒制后，其有效成分齊墩果酸的含量增加，這是因?yàn)榫浦聘淖兞思?xì)胞壁的通透性，產(chǎn)生了某些助溶和脫吸附作用，從而提高了齊墩果酸的溶出效率[13]。本實(shí)驗(yàn)所測得的每個樣品中的特女貞苷含量變化趨勢和前人研究結(jié)果一致，都是隨著酒制時間的延長，炮制品中特女貞苷含量逐漸降低[16]，但是均達(dá)到了藥典0.70%的要求[1]。特女貞苷含量之所以降低，是因?yàn)槠湫再|(zhì)不穩(wěn)定，經(jīng)較長時間加熱酒制后，在高溫及水蒸氣的作用下會水解生成紅景天苷，紅景天苷進(jìn)一步水解生成酪醇所致[4，6]。

女貞子中有多種不同類型的化學(xué)成分。其中最具活性成分和藥用價值的屬齊墩果酸和特女貞苷[5]。雖然特女貞苷的藥理作用強(qiáng)大且專屬性較強(qiáng)[16]，但是前人的研究發(fā)現(xiàn)，酒女貞子中特女貞苷的含量因炮制方法和時間不同而差異較大，因此本實(shí)驗(yàn)以齊墩果酸和特女貞苷的含量變化作為綜合指標(biāo)加以評判，并分別給予60%和40%的加權(quán)系數(shù)，求出綜合質(zhì)量評分，以考察女貞子不同炮制工藝之間的差別，更具科學(xué)性。根據(jù)綜合質(zhì)量評分，得出女貞子較佳的酒制工藝為酒蒸4 h。此結(jié)果可為酒制女貞子工藝條件提供參考。