王紅梅

摘要：本試驗(yàn)旨在建立同時(shí)快速檢測(cè)雞肉中6種磺胺類(lèi)藥物含量的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。雞肉樣品用乙腈超聲提取，經(jīng)Thermo Fisher Scientific Hyperis11 Gold （100×2.1mm，1.9μm）色譜柱分離，流動(dòng)相A：乙腈;流動(dòng)相B：0.1%甲酸水溶液作為流動(dòng)相梯度洗脫。電噴霧離子源正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式定量分析。結(jié)果表明，6種磺胺類(lèi)藥物在濃度10～500 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系很好，相關(guān)系數(shù)R2≥0.9998。6種磺胺類(lèi)藥物在含量為8和60μg/kg的樣品中，回收率為73%～88%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.9%～6%。綜上，該方法高效、快速、高分辨，可以用于雞肉樣品中磺胺類(lèi)藥的定性、定量分析。

關(guān)鍵詞：雞肉;磺胺類(lèi)藥物;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

磺胺類(lèi)藥物（ sulfonamides，SAs）是指一類(lèi)具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)化學(xué)藥物的總稱(chēng)，用于預(yù)防和治療全身性細(xì)菌感染性疾病，是當(dāng)前畜禽生產(chǎn)中常用的抗菌、抗原蟲(chóng)藥物，具有抗菌譜廣、價(jià)格低、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、高效、低毒、使用方便等優(yōu)點(diǎn)。其低劑量使用時(shí)，可提高飼料的利用率，促進(jìn)畜禽的生長(zhǎng)，但不正確的用藥量、用藥時(shí)間、方式以及用藥部位會(huì)導(dǎo)致磺胺在畜禽體內(nèi)及其排泄物的過(guò)量殘留，導(dǎo)致磺胺類(lèi)在人體中蓄積，因此產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)、泌尿系統(tǒng)損害、抑制白細(xì)胞生成等危害，重者導(dǎo)致急性血管性水腫、休克甚至死亡[1]。因此，我國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》對(duì)SAs總量及單個(gè)SAs殘留量做了明確規(guī)定，均不得超過(guò)100 μg/kg。

目前，測(cè)定動(dòng)物源性食品中磺胺類(lèi)藥物的方法不止一種，但超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法背景干擾少，能高效、快速、高分辨的定性、定量檢測(cè)和自動(dòng)分析微量物質(zhì)，為高靈敏測(cè)定磺胺類(lèi)藥物提供了支持。本文建立了比較優(yōu)化的前處理方法，以提高超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中磺胺類(lèi)藥物的檢測(cè)效率。

1 材料與方法

1.1 材料

肌肉樣品購(gòu)于本地超市。

1.2 儀器與試劑

高效液相三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)賽默飛世爾公司）;粉質(zhì)儀（中儲(chǔ)糧成都儲(chǔ)藏研究院）;低溫離心機(jī)（德國(guó)Sigma離心機(jī)公司）;數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;分液漏斗振蕩器（上海申賢恒溫設(shè)備廠）;混勻器（德國(guó)Heidoph）;電子微量天平（德國(guó)賽多利斯股份公司）;電子天平（ 常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）;渦旋振蕩器（美國(guó)安勝）;氮?dú)獍l(fā)生器（山東滕州魯南新科儀器有限公司）;Thermo Fisher Scientific Hyperis11 Gold 色譜柱（美國(guó)賽默飛世爾公司）;Milli-QIQ 7000超純水機(jī)（默克密理博實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）。

6種磺胺類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：磺胺甲惡唑（SMZ）、磺胺甲基嘧啶（SMR）、磺胺間二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺間甲氧嘧啶（SMM）、磺胺對(duì)甲氧嘧啶（SMD）、磺胺地索辛（SDT）（純度均大于99.5%，北京振翔科技有限公司）;乙腈（色譜純，德國(guó)Merck公司）;甲酸（色譜純，上海安普實(shí)驗(yàn)科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的SMR、SMD、SDM、SMZ、SMM、SDT標(biāo)準(zhǔn)品各2 mg，置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配制成濃度為200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.3.2樣品前處理

稱(chēng)取均質(zhì)后的雞肉樣品5 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈溶液，渦旋震蕩2 min，超聲10 min，4，000 r/min離心5 min，將乙腈層移入100 mL分液漏斗中。離心后的沉淀物再加入20 mL乙腈溶液，渦旋震蕩2 min，超聲10 min，4，000 r/min離心5 min，合并乙腈提取液。

提取液中加入20 mL乙腈飽和正己烷溶液，振搖5 min，將底層乙腈溶液移入100 mL雞心瓶中，45℃水浴中氮?dú)獯蹈桑瑴?zhǔn)確加入1mL乙腈-水溶液（1+1），超聲溶解殘?jiān)?，將溶解液轉(zhuǎn)入10 mL離心管中，用5 mL乙腈飽和正己烷溶液洗滌旋蒸瓶，洗滌液并入離心管中，4，000 r/min冷凍離心5 min，取下層乙腈-水溶液經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾后，供高效液相三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。

1.3.3儀器條件

（1）液相色譜條件

色譜柱為T(mén)hermo Fisher Scientific Hyperis11 Gold （100×2.1mm，1.9μm），流動(dòng)相A：乙腈;流動(dòng)相B：0.1%甲酸水溶液;柱溫：20℃;進(jìn)樣量：2μL，流動(dòng)相梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

（2）質(zhì)譜條件

電噴霧正離子電離源（H-ESI）;采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）;離子傳輸管溫度：350℃;離子蒸發(fā)溫度：300℃;碰撞氣：1.5 mTorr;鞘氣：35 Arb、輔助氣：10 Arb、反吹氣：0 Arb;離子噴霧電壓：3500 V。多反應(yīng)監(jiān)測(cè)、碰撞能量及透鏡電壓見(jiàn)表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 定性結(jié)果

6種磺胺類(lèi)藥物的提取離子色譜圖間圖1。在檢測(cè)目標(biāo)物中，SMR、SMD、SMZ、SMM極性較弱，SDM、SDT極性較強(qiáng)。如圖1所示，在方法條件下7 min之內(nèi)，6種磺胺類(lèi)藥物全部出峰，且峰形較好，易于定性、定量。

2.2 線性相關(guān)性與檢出限

制備混合標(biāo)準(zhǔn)濃度系列，分別為10 、50 、100 、250和500 ng/mL（分別相當(dāng)于被測(cè)組分的含量為2、10、20、50和100μg/kg）。將標(biāo)準(zhǔn)工作液按照2.3.3的方法進(jìn)樣測(cè)試。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如表3所。6種磺胺類(lèi)藥物在濃度10～500 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系很好，相關(guān)系數(shù)R2≥0.9998。

2.3 回收率與精密度

取雞肉樣品，稱(chēng)完樣品后分別加入40和300ng的6種磺胺類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)品，按照2.3.2與2.3.3的方法提取，測(cè)定，制備加標(biāo)濃度為40 和300 ng/mL，即樣品含量為8和60μg/kg的樣品，進(jìn)行回收率和精密度實(shí)驗(yàn)。每個(gè)含量包含6組水平重復(fù)，取平均值，計(jì)算回收率和精密度，結(jié)果見(jiàn)表4。6種磺胺類(lèi)藥物的回收率為73%～88%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.9%～6%。

3 結(jié)論

本研究建立了同時(shí)檢測(cè)雞肉中SMR、SMD、SDM、SMZ、SMM、SDT的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。該方法準(zhǔn)確、快速、高效，可適用于大量樣品的定性、定量分析，對(duì)于雞肉中磺胺類(lèi)藥物的檢測(cè)具有重要應(yīng)用價(jià)值，為食品安全提供有效的技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙笑天，潘亞利，傅英文，等.免疫親和凈化-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定豬肉和雞蛋中的12種磺胺類(lèi)藥物[J].食品工業(yè)科技，2011，32（11）：426-430.