王新霞 吳曉美 童涌

[摘要] 目的 探討艾滋?。ˋIDS）患者結(jié)核桿菌感染與其免疫功能及艾滋病病毒（HIV）載量的關(guān)系。方法 選取2018年6月至2020年1月浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬湖州醫(yī)院 湖州市中心醫(yī)院感染科收治的78例AIDS患者作為研究對(duì)象，所有患者入院后均完成首段尿、靜脈血等樣本采集，采用培養(yǎng)法和PCR法檢測(cè)結(jié)核桿菌。根據(jù)患者是否發(fā)生感染分為觀察組（n=38）和對(duì)照組（n=40）。采用流式細(xì)胞儀測(cè)定兩組CD4+免疫功能水平;采用病毒載量分析儀測(cè)定兩組HIV載量;對(duì)AIDS結(jié)核桿菌感染與患者免疫功能及HIV載量進(jìn)行相關(guān)性分析，分析AIDS患者的結(jié)核桿菌感染類型及構(gòu)成比、兩組AIDS患者結(jié)核桿菌感染下CD4+T細(xì)胞水平、細(xì)胞因子水平、HIV載量，并完成結(jié)核桿菌感染與其免疫功能及HIV載量關(guān)系分析。結(jié)果 38例伴有結(jié)核桿菌感染AIDS患者，排在前兩位的分別為肺結(jié)核和頸淋巴結(jié)核，分別占36.84%和28.95%;觀察組結(jié)核桿菌感染患者CD4+T細(xì)胞中<50 mm3、50～199 mm3病例數(shù)高于對(duì)照組非感染者（P<0.05）;200～349 mm3、≥350 mm3病例數(shù)低于對(duì)照組非感染者（P<0.05）;觀察組HIV載量中<1000 copy/ml、1000～4999 copy/ml病例數(shù)低于對(duì)照組（P<0.05）;≥10 000 copy/ml病例數(shù)高于對(duì)照組（P<0.001）;相關(guān)性分析結(jié)果表明，AIDS患者結(jié)核桿菌感染率與患者免疫功能CD4+T水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）;與HIV載量呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 結(jié)核桿菌感染能影響AIDS患者免疫功能，且與HIV載量存在相關(guān)性，積極采取有效的措施能提高機(jī)體免疫，對(duì)降低結(jié)核桿菌感染率具有重要的意義。

[關(guān)鍵詞] 艾滋病;結(jié)核桿菌感染;免疫功能;艾滋病病毒;相關(guān)性分析

[中圖分類號(hào)] R512.9? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2022）06-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between mycobacterium tuberculosis infection and the immune function and human immunodeficiency virus （HIV） load in patients with acquired immunodeficiency syndrome （AIDS）. Methods A total of 78 AIDS patients in the department of infectious diseases of Huzhou Hospital Affiliated to Zhejiang University School of Medicine， Huzhou Central Hospital from June 2018 to January 2020 were selected as the subjects. After admission， the first-void urine， venous blood sample and other samples were collected from all patients， and the mycobacterium tuberculosis was detected by culture method and polymerase chain reaction （PCR） method. The patients were divided into the observation group （n=38） and the control group （n=40） according to whether infection occurred or not. The levels of CD4+ immune function in both groups were measured by flow cytometer， and the HIV load in both groups was measured by viral load analyzer. Correlation analysis of AIDS Mycobacterium tuberculosis infection with immune function and HIV load in patients， and the type and composition ratio of mycobacterium tuberculosis infection in AIDS， the level of CD4+ T cells under mycobacterium tuberculosis infection in AIDS in both groups， the cytokine level， and HIV load were also analyzed. In addition， the analysis of the relationships between mycobacterium tuberculosis infection and the immune function and HIV load were completed. Results In 38 AIDS patients with mycobacterium tuberculosis infection， the top two were pulmonary tuberculosis and cervical lymphatic tuberculosis， accounting for 36.84% and 28.95%， respectively. The number of cases with CD4+ T-cell count <50 mm3 and 50-199 mm3 in patients with mycobacterium tuberculosis infection in the observation group was higher than that in non-infected patients in the control group （P<0.05）. The number of cases with CD4+ T-cell count 200-349 mm3 and≥350 mm3 in patients with mycobacterium tuberculosis infection in the observation group was lower than that in non-infected patients in the control group （P<0.05）. The number of cases with HIV load < 1000 copy/ml and （1000-4999） copy/ml in the observation group was lower than that in the control group（P<0.05）. The number of cases with HIV load ≥10 000 copy/ml in the observation group was higher than that in the control group （P<0.05）. The results of SPSS Pearson correlation analysis showed that the rate of mycobacterium tuberculosis infection in AIDS was negatively correlated with the CD4+T level of patients immune function （P<0.05）， and positively correlated with HIV load （P<0.05）. Conclusion Mycobacterium tuberculosis infection in AIDS can affect the immune function of patients， and there is a correlation with HIV load， so it is important to actively take effective measures to improve the immunity of the body to reduce the rate of mycobacterium tuberculosis infection.

[Key words] Acquired immunodeficiency syndrome; Mycobacterium tuberculosis infection; Immune function; Human immunodeficiency virus; Correlation analysis

艾滋?。╝cquired immune deficiency syndrome， AIDS）是一種危害性相對(duì)較大的傳染病，是因感染艾滋病病毒（human immunodeficiency virus， HIV）引起[1]。既往研究表明[2]，HIV屬于是一種能攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒，能將人體免疫系統(tǒng)中重要的CD4+淋巴細(xì)胞作為主要的攻擊目標(biāo)，從而引起人體免疫功能喪失。AIDS患者免疫水平相對(duì)較低，機(jī)會(huì)接觸后感染率和發(fā)生率較高，且有感染、發(fā)病和康復(fù)過程緩慢特點(diǎn)[3]。同時(shí)，AIDS患者屬于特殊的群體，容易對(duì)患者心理產(chǎn)生影響，增加臨床防治難度。結(jié)核桿菌最早由德國(guó)細(xì)菌學(xué)家1882年首次分離獲得，該菌能侵犯人體全身系統(tǒng)，但是亦引起肺結(jié)核多見[4-5]。對(duì)于AIDS患者由于機(jī)體免疫水平較低，當(dāng)機(jī)體感染結(jié)核桿菌后，將會(huì)增加結(jié)核病發(fā)生率。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究表明[6]，AIDS患者多以免疫為基礎(chǔ)發(fā)揮重要作用，能提高具有免疫活性的細(xì)胞因子，但臨床對(duì)于結(jié)核桿菌感染與免疫功能、HIV載量的關(guān)系研究較少。因此，本研究以AIDS患者為對(duì)象，探討AIDS結(jié)核桿菌感染與患者免疫功能及HIV載量的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年6月至2020年1月浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬湖州醫(yī)院 湖州市中心醫(yī)院感染科AIDS患者78例作為研究對(duì)象，根據(jù)患者是否發(fā)生結(jié)核菌感染分為觀察組和對(duì)照組。觀察組38例，年齡19～62歲，平均（47.98±5.61）歲;病程1～6年，平均（3.06±0.43）年;性傳播28例，血液傳播6例，其他4例。同期住院的無(wú)結(jié)核桿菌感染的AIDS患者共40例作為非感染組，年齡20～63歲，平均（48.11±5.65）歲;病程1～7年，平均（3.11±0.44）年;性傳播32例，血液傳播6例，其他2例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合AIDS診斷標(biāo)準(zhǔn)者[7];②完成結(jié)核桿菌檢測(cè)者;③完成HIV載量測(cè)定及T淋巴細(xì)胞水平測(cè)定者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并精神異常、凝血功能異?；蚱髻|(zhì)性疾病者;②合并其他感染性疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病或異位妊娠者;③合并急性闌尾炎、卵巢黃體囊腫破裂或伴有彌漫性腹膜炎者。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者/家屬均簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集? 所有患者入院后均完成結(jié)核桿菌檢測(cè);同時(shí)，患者入院后次日早晨取空腹全血2～3 ml，并將其放置在EDTA-K3抗凝管中，4 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，完成免疫功能、HIV載量測(cè)定[8]。

1.2.2 結(jié)核桿菌檢測(cè)? ①涂片及培養(yǎng)法。對(duì)入組患者均完成清晨痰液的采集，標(biāo)本獲取后對(duì)痰液給予離心沉淀法進(jìn)行處理干預(yù)。由于結(jié)核桿菌的密度高于痰液，給予高速離心沉淀法收集分枝桿菌樣本，集菌后取一部分進(jìn)行涂片;結(jié)核桿菌具有抗酸染色特點(diǎn)，進(jìn)行涂片染色鏡檢，有助于提高鏡檢陽(yáng)性率。涂片觀察后剩余的結(jié)核桿菌用于分離培養(yǎng)，取2 ml的菌液放置在無(wú)菌試管中，分別按順序加入酚紅指示劑、氫氧化鈉后搖晃均勻，15 min水浴，溫度37℃，采用硫酸中和到中性后，離心、取沉淀物，接種培養(yǎng)[9];②PCR法檢測(cè)。采用PCR法測(cè)定結(jié)核桿菌水平，具體方法如下：將標(biāo)本從-20℃冰箱中取出，充分振蕩混合標(biāo)本，5 min離心，速度15 000 r/pm，血清分離后去除上清，并加入裂解液30 ul，充分振蕩混勻后置入55℃下完成1 h水浴，再置入95℃下5 min保溫。離心1 min，速度10 000 r/pm，獲得PCR擴(kuò)增用模板液，在提取膜與PCR反應(yīng)過程中設(shè)置陽(yáng)性與陰性對(duì)照。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)定不同標(biāo)本中結(jié)核桿菌水平，設(shè)置PCR參數(shù)：30℃ 10 min;42℃ 30 min;99℃ 5 min;5℃ 5 min，連續(xù)進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，72℃ 10 min延長(zhǎng)，獲得最終產(chǎn)物并放入1.5%瓊脂凝膠電泳，β-actin為內(nèi)對(duì)照（引物由海貝博生物公司提供）[10]。

1.2.3 免疫功能及HIV載量測(cè)定? ①免疫功能測(cè)定。取上述分離的血清標(biāo)本，并將其放置在20～25℃冰箱中完成8 h檢測(cè)，采用流式細(xì)胞儀測(cè)定兩組CD4+免疫功能水平，儀器購(gòu)自于美國(guó)BD Becton Dickinson公司，儀器型號(hào)：BD FACS Cali bur GH0156，試劑盒購(gòu)自于武漢安特捷生物技術(shù)公司;根據(jù)測(cè)定結(jié)果（CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)）分為<50 mm3、50～199 mm3、200～349 mm3、≥350 mm3[11];②HIV載量測(cè)定。取上述抽取的全血，在6 h內(nèi)進(jìn)行10 min離心，速度3 000 r/pm，血清分離后放置在-80℃冰箱中，備用。采用病毒載量分析儀測(cè)定兩組HIV載量，儀器購(gòu)自于德國(guó)西門子公司，型號(hào)：Versant 440 Molecular system公司。根據(jù)HIV載量測(cè)定結(jié)果分為<1000、1000～4999、5000～9999、≥10 000 copy/ml四個(gè)階段[12]。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 感染部位? 記錄AIDS患者結(jié)核桿菌感染部位。

1.3.2 CD4+T細(xì)胞水平? 記錄觀察組與對(duì)照組結(jié)核桿菌感染下CD4+T細(xì)胞水平。

1.3.3 細(xì)胞因子水平? 記錄觀察組與對(duì)照組細(xì)胞因子IFN-γ及IL-4、TNF-α、IL-6及IL-10水平。

1.3.4 HIV載量? 記錄觀察組與對(duì)照組AIDS結(jié)核桿菌感染下HIV載量情況。

1.3.5 相關(guān)性分析? 對(duì)AIDS患者結(jié)核桿菌感染與其免疫功能及HIV載量進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AIDS結(jié)核桿菌感染部位及構(gòu)成比

38例患者伴有結(jié)核桿菌感染，排在前兩位的分別為肺結(jié)核和頸淋巴結(jié)核，分別占36.84%和28.95%，見圖1。

2.2 AIDS患者結(jié)核桿菌感染下CD4+T細(xì)胞水平比較

觀察組結(jié)核桿菌感染患者CD4+T細(xì)胞中<50 mm3、50～199 mm3病例數(shù)高于對(duì)照組非感染者（P<0.05）;200～349mm3、≥350 mm3病例數(shù)低于對(duì)照組非感染者（P<0.05）。見表1。

2.3 AIDS患者結(jié)核桿菌感染與細(xì)胞因子水平比較

觀察組IFN-γ及IL-4高于對(duì)照組（P<0.05）;觀察組TNF-α、IL-6及IL-10與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.4 AIDS患者結(jié)核桿菌感染下HIV載量比較

觀察組與對(duì)照組HIV載量中5000～9999 copy/ml病例數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）;觀察組HIV載量中<1000 copy/ml、1000～4999 copy/ml病例數(shù)低于對(duì)照組（P<0.05）;≥10 000 copy/ml病例數(shù)高于對(duì)照組（P<0.001）。見表3。

2.5 AIDS患者結(jié)核桿菌感染與患者免疫功能及HIV載量相關(guān)性

相關(guān)性分析結(jié)果表明，AIDS患者結(jié)核桿菌感染率與其免疫功能CD4+T水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.784，P<0.001）;與HIV載量呈正相關(guān)（r=0.813，P<0.001）。

3 討論

對(duì)于早期感染HIV患者具有較長(zhǎng)的無(wú)癥狀潛伏期，且任何一種傳染性病原體通過刺激免疫系統(tǒng)均能加劇病情的發(fā)展，可降低機(jī)體免疫水平，增加結(jié)核桿菌感染率。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究表明[13]，結(jié)核桿菌感染病程相對(duì)較長(zhǎng)，且持續(xù)的感染能引起特異性體液免疫與細(xì)胞免疫。本研究中，38例結(jié)核桿菌感染的艾滋病患者中，排在前兩位的分別為肺結(jié)核和頸淋巴結(jié)核，分別占36.84%和28.95%;觀察組結(jié)核桿菌感染患者CD4+T細(xì)胞中<50 mm3、50～199 mm3病例數(shù)高于對(duì)照組非感染者（P<0.05）;200～349 mm3、≥350 mm3病例數(shù)低于對(duì)照組非感染者（P<0.05），說(shuō)明AIDS患者結(jié)核桿菌感染后CD4+T細(xì)胞水平較低，能引起機(jī)體免疫功能下降，增加病原體感染率。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究表明，AIDS患者感染結(jié)核桿菌感染的原因相對(duì)較多，其機(jī)制亦相對(duì)復(fù)雜，可能與機(jī)體免疫水平低下等有關(guān)，再加上發(fā)病后營(yíng)養(yǎng)水平較低等引起免疫逃逸。機(jī)體穩(wěn)定性受到的影響因素較多，而免疫平衡是其重要保證。CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)是判斷HIV感染患者病情發(fā)展的重要指標(biāo)，隨著病情的不斷發(fā)展，機(jī)體免疫系統(tǒng)將會(huì)受到破壞，進(jìn)一步造成免疫功能下降，增加結(jié)核桿菌感染發(fā)生率。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究表明[14]，AIDS患者結(jié)核桿菌感染受到的影響因素較多，如年齡、體質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)及性別，不同因素均會(huì)造成CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)減少，引起Th1/Th2細(xì)胞因子失衡，感染結(jié)核桿菌患者的外周血IL-4、IFN-γ的水平明顯高于未感染結(jié)核桿菌的患者，提示結(jié)核桿菌與HIV共感染的狀態(tài)會(huì)對(duì)Th1/Th2型細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)穩(wěn)定產(chǎn)生影響[15]。因此，積極采取有效的措施提高機(jī)體免疫，對(duì)降低結(jié)核桿菌感染率具有重要的意義[16]。

AIDS主要與HIV病毒感染有關(guān)，且患者病情的發(fā)展多與HIV病毒量存在緊密的聯(lián)系[17]。HIV病毒量較高的患者，對(duì)于機(jī)體免疫系統(tǒng)的作用較大，患者病情越嚴(yán)重，能引起機(jī)體免疫平衡發(fā)生漂移，從而能加劇病情的發(fā)生、發(fā)展[18]。國(guó)內(nèi)虛證研究表明[19]，當(dāng)Th1狀態(tài)占據(jù)優(yōu)勢(shì)時(shí)，則會(huì)增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫，提高患者抗病毒能力;而當(dāng)Th2占據(jù)優(yōu)勢(shì)時(shí)，將會(huì)增加HIV的易感性，導(dǎo)致HIV病毒量呈比例增加。因此，HIV病毒載量能反映患者的病情嚴(yán)重程度，且病毒載量越大，病情越嚴(yán)重，對(duì)于機(jī)體CD4+T細(xì)胞水平的影響越大，結(jié)核桿菌感染率越高[20]。本研究中，觀察組HIV載量中<1 000 copy/ml、（1000～4999）copy/ml病例數(shù)低于對(duì)照組（P<0.05）;≥10 000 copy/ml病例數(shù)高于對(duì)照組（P<0.05），說(shuō)明AIDS結(jié)核桿菌感染率與病毒載量存在緊密的聯(lián)系，且伴有結(jié)核桿菌感染患者病毒載量較高。為了進(jìn)一步分析AIDS結(jié)核桿菌感染與免疫功能和HIV病毒載量的關(guān)系，本研究中對(duì)其關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明，AIDS結(jié)核桿菌感染率與患者免疫功能CD4+T水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）;與HIV載量呈正相關(guān)（P<0.05），說(shuō)明AIDS結(jié)核桿菌感染與HIV載量和免疫功能存在緊密聯(lián)系，應(yīng)加強(qiáng)患者基礎(chǔ)疾病治療，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，降低HIV載量，降低結(jié)核桿菌感染率。

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