趙振義，郭志剛，樊學(xué)海，孫巖

1天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院/天津醫(yī)科大學(xué)寶坻臨床學(xué)院神經(jīng)外科，天津 301800

2青島大學(xué)附屬煙臺毓璜頂醫(yī)院神經(jīng)外科，山東 煙臺 264001

腦膠質(zhì)瘤好發(fā)于老年人群，屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的原發(fā)腫瘤，源于神經(jīng)外胚層，具有復(fù)發(fā)率和病死率高、侵襲能力強(qiáng)、手術(shù)根治性切除困難等特點(diǎn)。研究顯示，腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1]。腦膠質(zhì)瘤可分為星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤、混合型少突星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤和室管膜瘤4種類型，其中以星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤最為常見[2]。目前臨床主要采用手術(shù)聯(lián)合放化療來綜合治療腦膠質(zhì)瘤，可明顯改善患者的病情，但術(shù)后極易復(fù)發(fā)，總生存期相對較短[3]。研究顯示，腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白 6（tumor necrosis factor-α-induced protein 6，TNFAIP6）、CXC趨化因子配體10（C-X-C chemokine ligand 10，CXCL10）均與腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)[4-5]。因此，本研究探討TNFAIP6、CXCL10在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對患者預(yù)后的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年2月至2019年12月天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院收治的腦膠質(zhì)瘤患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)CT、MRI檢查及術(shù)后病理學(xué)檢查確診為腦膠質(zhì)瘤，屬于原發(fā)性腦膠質(zhì)瘤[6]；②術(shù)前未接受過放化療；③無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并血液系統(tǒng)疾?。虎诤喜⑵渌到y(tǒng)惡性腫瘤；③合并臟器功能異常；④合并免疫系統(tǒng)或結(jié)締組織疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入127例腦膠質(zhì)瘤患者，其中男67例，女60例；年齡53～79歲，平均（62.35±6.23）歲；世界衛(wèi)生組織（WHO）腦膠質(zhì)瘤分級：Ⅰ～Ⅱ級（惡性程度低）57例，Ⅲ～Ⅳ級（惡性程度高）70例。另選取同期在天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的91例健康者，其中男49例，女42例；年齡50～85歲，平均（63.11±6.15）歲。兩組受試者性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

抽取所有受試者清晨空腹靜脈血5 ml，3000 r/min離心15 min后分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測所有受試者CXCL10水平[6]，試劑盒購自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，嚴(yán)格按照使用說明書進(jìn)行操作。

取127例腦膠質(zhì)瘤患者的腦膠質(zhì)瘤組織及距離腫瘤組織3 cm處的癌旁組織，采用免疫組化法檢測各組織中TNFAIP6的表達(dá)情況[7]。組織標(biāo)本切片、脫蠟、水化后，浸泡于3%過氧化氫中20 min，封閉其內(nèi)源性過氧化物酶活性。高壓枸櫞酸鹽抗原修復(fù)，溫水清洗后使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗3次，每次5 min，滴加10%血清用以阻斷非特異性結(jié)合，37℃孵育箱10 min。滴加TNFAIP6一抗（稀釋濃度為1∶100）4℃過夜，PBS再次清洗，滴加TNFAIP6二抗，37℃孵育10 min，PBS清洗3次。滴加過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液孵育10 min，二氨基聯(lián)苯胺進(jìn)行熒光顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、干燥后中性樹脂封片，用PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定[7]：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色，或其他染色明顯強(qiáng)于背景色為陽性，選取5個(gè)不同視野進(jìn)行全面觀察，每個(gè)視野中細(xì)胞數(shù)不低于200個(gè)，觀察完成后計(jì)算每個(gè)視野中陽性細(xì)胞所占比例。依據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評分，無著色計(jì)1分，淡黃色染色計(jì)2分，棕黃色染色計(jì)3分，棕褐色染色計(jì)4分；依據(jù)陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評分，無陽性細(xì)胞計(jì)1分，陽性細(xì)胞所占比例≤10%計(jì)2分，陽性細(xì)胞所占比例為11%～15%計(jì)3分，陽性細(xì)胞所占比例為16%～50%計(jì)4分，陽性細(xì)胞所占比例＞50%計(jì)5分。將染色強(qiáng)度評分與陽性細(xì)胞所占比例評分相乘，≤5分為陰性表達(dá)，≥6分為陽性表達(dá)。

1.3 隨訪

腦膠質(zhì)瘤患者自出院后采用電話隨訪的方法進(jìn)行為期1年的隨訪，記錄患者的預(yù)后情況，包括生存、復(fù)發(fā)或病死，以全因性死亡或復(fù)發(fā)再入院為隨訪終點(diǎn)，并將其作為預(yù)后不良的標(biāo)準(zhǔn)，隨訪時(shí)間截至2020年12月，分析影響腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響因素采用多元Logistic回歸分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TNFAIP6、CXCL10水平的比較

腦膠質(zhì)瘤患者腦膠質(zhì)瘤組織TNFAIP6水平為（8.58±1.85），明顯高于癌旁組織的（5.26±2.03），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.622，P=0.000）；腦膠質(zhì)瘤患者血清CXCL10水平為（1003.56±263.94）pg/ml，明顯高于健康者的（293.59±69.26）pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=25.036，P=0.000）。

2.2 不同WHO 分級腦膠質(zhì)瘤患者TNFAIP6、CXCL10水平的比較

WHO分級為Ⅲ～Ⅳ級的腦膠質(zhì)瘤患者的TNFAIP6、CXCL10水平均明顯高于Ⅰ～Ⅱ級患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 不同WHO分級腦膠質(zhì)瘤患者TNFAIP6、CXCL10水平的比較（±s）

表1 不同WHO分級腦膠質(zhì)瘤患者TNFAIP6、CXCL10水平的比較（±s）

W H O分級T N F A I P 6 C X C L 1 0（p g/m l）

2.3 腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良影響因素的單因素分析

隨訪1年，127例腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良38例，預(yù)后良好89例。單因素分析結(jié)果顯示，預(yù)后不良與預(yù)后良好腦膠質(zhì)瘤患者年齡、性別、合并癥比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；預(yù)后不良與預(yù)后良好腦膠質(zhì)瘤患者WHO分級、TNFAIP6水平、CXCL10水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表 2）

表2 127例腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良影響因素的單因素分析

2.4 腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的WHO分級、TNFAIP6水平、CXCL10水平作為自變量，腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后作為因變量納入多元Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，WHO分級為Ⅲ～Ⅳ級、TNFAIP6水平升高、CXCL10水平升高均為腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.01）。（表3）

表3 127例腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良影響因素的多元Logistic回歸分析

3 討論

腦膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)上皮，是由神經(jīng)外胚葉衍化來的膠質(zhì)細(xì)胞惡變形成的腫瘤，是常見的顱內(nèi)腫瘤，發(fā)病率占顱腦腫瘤的36%～63%[8-9]。隨著社會老齡化程度的加劇和生活方式的改變，腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病率和病死率呈逐年上升趨勢。早期腦膠質(zhì)瘤患者多無明顯癥狀，易錯(cuò)失最佳的治療時(shí)機(jī)；且腦膠質(zhì)瘤的惡性程度高，侵襲能力強(qiáng)，臨床治療難度較大[10-11]。由于一般的藥物無法透過血腦屏障，目前，臨床主要采用手術(shù)治療腦膠質(zhì)瘤，術(shù)后輔以放療或化療，但手術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)較高，難以完全清除腫瘤，患者的治療效果不理想、生存率低、預(yù)后較差，嚴(yán)重威脅患者的身心健康[12-13]。因此，早期診斷、有效治療對改善腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后有重要意義。

張強(qiáng)強(qiáng)等[14]探討CXCL10在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其臨床意義，結(jié)果顯示，CXCL10在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)隨著惡性程度的增高而升高，且與患者的不良預(yù)后相關(guān)。劉玉清等[15]對TNFAIP6在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其臨床意義進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TNFAIP6水平隨腦膠質(zhì)瘤病理學(xué)分級的升高而升高；TNFAIP6可作為腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的預(yù)測因素及潛在的研究和治療靶點(diǎn)，其參與了血管外基質(zhì)組成、血管生成、細(xì)胞黏附及炎性反應(yīng)等生物學(xué)過程。本研究結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤患者腦膠質(zhì)瘤組織TNFAIP6水平明顯高于癌旁組織，血清CXCL10水平明顯高于健康者，且高級別腦膠質(zhì)瘤患者的TNFAIP6、CXCL10水平均高于低級別患者，與程哲等[16]的研究結(jié)果相似。這可能是因?yàn)門NFAIP是由腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）誘導(dǎo)產(chǎn)生的蛋白家族，而TNF-α是由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是具有重要生物活性的細(xì)胞因子，因此，TNFAIP6作為TNFAIP家族成員，參與了細(xì)胞黏附、增殖、分化和凋亡等生物學(xué)過程，其不僅與炎性反應(yīng)有關(guān)，還與腫瘤進(jìn)展有關(guān)[17]。趨化因子對不同靶細(xì)胞具有趨化效應(yīng)，是可使細(xì)胞發(fā)生趨化運(yùn)動的小分子細(xì)胞因子[18]，可通過與靶細(xì)胞細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，使靶細(xì)胞定向轉(zhuǎn)移至感染部位，在炎性反應(yīng)、自身免疫性疾病和腫瘤中發(fā)揮多種調(diào)控作用[19]。CXCL10又稱為干擾素y誘導(dǎo)蛋白10，屬于CXC趨化因子超家族的非ELR類，在多種疾病中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[20]。同時(shí)本研究多因素分析結(jié)果顯示，WHO分級為Ⅲ～Ⅳ級、TNFAIP6水平升高、CXCL10水平升高均為腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），臨床可根據(jù)其水平變化進(jìn)行治療。

綜上所述，TNFAIP6、CXCL10水平隨著腦膠質(zhì)瘤的組織學(xué)分級的增加而升高，是腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，臨床可通過檢測二者的水平變化評估腦膠質(zhì)瘤的療效及預(yù)后。