李桂偉

摘要：奶牛隱性乳房炎是奶牛中的常見疾病之一，對(duì)奶牛健康生產(chǎn)危害很大。文章對(duì)奶牛隱性乳房炎的診斷方法進(jìn)行了總結(jié)，對(duì)乳汁體細(xì)胞診斷方法、酶學(xué)診斷方法和血清學(xué)炎性蛋白指標(biāo)診斷方法等3種常見的診斷方法進(jìn)行了詳細(xì)的分析，可使各奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)根據(jù)實(shí)際情況選擇相應(yīng)的檢測(cè)方法，更好地控制奶牛群中隱性乳房炎的發(fā)生，減少經(jīng)濟(jì)損失。

關(guān)鍵詞：奶牛;隱性乳房炎;診斷方法

中圖分類號(hào)：S857.2+6文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

乳房炎是造成奶牛養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)損失最為嚴(yán)重的疾病之一。奶牛發(fā)生乳房炎后不僅其產(chǎn)奶量、乳汁品質(zhì)均有不同程度的下降，治療費(fèi)用增加，而且炎性乳汁還危害著公共衛(wèi)生和消費(fèi)者的健康，重癥乳房炎患牛因產(chǎn)乳量的明顯減少甚至失去泌乳能力而被淘汰，因此，做好奶牛乳房炎精確診斷與早期預(yù)警對(duì)乳房炎防控具有重要意義。長(zhǎng)期以來(lái)，一些學(xué)者一直致力于奶牛乳房炎的診斷研究，一些新的診斷方法不斷涌現(xiàn)，文章綜合了近年來(lái)有關(guān)奶牛乳房炎診斷的研究成果，為奶牛乳房炎診斷提供參考。

1 乳汁體細(xì)胞診斷方法

乳腺內(nèi)體細(xì)胞（somatic cell，SCC）為免疫細(xì)胞及其它細(xì)胞的統(tǒng)稱。健康奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)較少，主要由巨噬細(xì)胞（macrophage cell）、淋巴細(xì)胞（lymphocyte）、嗜中性白細(xì)胞（Neutrophil，PMN）和乳腺上皮細(xì)胞等組成，其中，巨噬細(xì)胞約占60%～88%，主要起保護(hù)功能并發(fā)起炎性反應(yīng)，淋巴細(xì)胞約占10%～30%，中性白細(xì)胞約占1%～15%，上皮細(xì)胞約小于7%。當(dāng)奶牛發(fā)生乳腺感染時(shí)，炎癥因素能夠?qū)е氯橹械捏w細(xì)胞數(shù)急劇增多，而且乳汁內(nèi)的體細(xì)胞種類及其數(shù)量發(fā)生很大的變化[1]，其中中性粒細(xì)胞占絕大多數(shù)，占95%～99%。由于乳腺炎病原、病癥，以及感染階段的不同，乳汁中體細(xì)胞種類與數(shù)量也存在著明顯的差異，其中，尤為嗜中性白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的變化明顯[2，3]。一般情況下，乳汁中巨噬細(xì)胞的增多預(yù)示乳房發(fā)生慢性炎癥、非化膿性炎癥;淋巴細(xì)胞的增多預(yù)示為慢性炎癥或發(fā)生病毒性感染;嗜中性白細(xì)胞增多則預(yù)示為急性炎癥及炎癥早期[4，5]。

奶牛乳汁體細(xì)胞數(shù)能相對(duì)準(zhǔn)確地反映乳腺炎癥的嚴(yán)重程度，并被廣泛作為奶牛乳腺炎的診斷指標(biāo)。IDF推薦使用體細(xì)胞檢測(cè)和細(xì)菌學(xué)檢測(cè)作為判定奶牛乳房炎的方法。隨著DHI技術(shù)在國(guó)內(nèi)牧場(chǎng)的逐漸普及，體細(xì)胞數(shù)的快速檢測(cè)在奶牛乳房炎診斷，特別是隱性乳房炎診斷中發(fā)揮了重要作用。在十二烷基磺酸鈉（C12H25SO3Na）等陰離子表面活性劑和堿性物質(zhì)的作用下，脂類物質(zhì)乳化，乳中體細(xì)胞的細(xì)胞膜被破壞，并釋放出細(xì)胞DNA，DNA與其作用使乳汁產(chǎn)生沉淀或形成凝膠狀。根據(jù)沉淀或凝膠的多少，能夠間接判定體細(xì)胞數(shù)的數(shù)量[1]，從而診斷乳房的感染嚴(yán)重程度。根據(jù)此原理相繼建立了顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、體細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法、熒光電子細(xì)胞計(jì)數(shù)法、粒子計(jì)數(shù)法、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)法等直接計(jì)數(shù)檢驗(yàn)法，以及加利福尼亞乳房炎試驗(yàn)、苛性鈉凝乳試驗(yàn)法、過(guò)氧化物酶試驗(yàn)等體細(xì)胞間接檢驗(yàn)法，并用于隱性乳房炎的診斷。

隨著研究深入，一些新的診斷方法相繼出現(xiàn)。體細(xì)胞分型指數(shù)（DSCC）是指淋巴細(xì)胞與嗜中性粒細(xì)胞總數(shù)占體細(xì)胞數(shù)的比例，安朋朋等[5]研究了DSCC的變化規(guī)律，以及乳房炎致病菌對(duì)DSCC的影響，結(jié)果表明：體細(xì)胞評(píng)分與DSCC存在極顯著相關(guān)性，且隨著體細(xì)胞評(píng)分值的升高，DSCC波動(dòng)范圍逐漸減小;頭胎牛、四胎以上奶牛的DSCC值顯著高于二至三胎牛;細(xì)菌感染陽(yáng)性樣品DSCC（77.21%）極顯著高于陰性樣品（69.33%），但傳染性致病菌感染與環(huán)境性致病菌感染的樣品間DSCC無(wú)顯著差異。由此表明，DSCC對(duì)于診斷乳房炎具有一定價(jià)值。

2 酶學(xué)診斷方法

在奶牛乳腺發(fā)生病原性感染后，致病病原會(huì)引起乳腺組織發(fā)生一系列的炎性變化，并動(dòng)員大量免疫細(xì)胞至乳腺組織內(nèi)，其中90%為嗜中性多形核白細(xì)胞，大量嗜中性多形核白細(xì)胞進(jìn)入炎性乳腺，并吞噬入侵的病原，致使體細(xì)胞數(shù)持續(xù)升高。奶牛發(fā)生乳房炎時(shí)，乳腺內(nèi)的炎性細(xì)胞釋放的炎性成分將造成乳腺微血管的通透性增加，破壞血乳屏障，血液中的體細(xì)胞、溶酶體酶和急性期蛋白等成分滲入至牛乳中，并導(dǎo)致N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）等一些酶的生物活性升高。NAG存在于乳腺組織和白細(xì)胞中，當(dāng)乳腺細(xì)胞受到損傷或白細(xì)胞數(shù)升高時(shí)，NAG活性會(huì)顯著升高[6]，因此，NAG活性與奶牛隱性乳房炎發(fā)生密切相關(guān)，其活性能夠反應(yīng)乳腺是否存在感染的風(fēng)險(xiǎn)。NAG能夠預(yù)示分泌型細(xì)胞的狀態(tài)及乳腺炎發(fā)病程度，目前，已有商業(yè)化的NAG測(cè)定試劑盒，并用于隱性乳房炎的診斷中[7-9]。

髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidasedeficiency，MPO）是氧依賴性殺菌系統(tǒng)的重要組成部分。堿性磷酸酶（AKP）是機(jī)體防御感染的因子之一[10]。劉小倩等[6]在研究長(zhǎng)期飼喂高精料可否致奶牛發(fā)生內(nèi)源性乳房炎的試驗(yàn)中，應(yīng)用ELISA試劑盒測(cè)定了乳及乳腺組織中NAG、AKP、MPO、NAG及LPS炎性指標(biāo)，試驗(yàn)表明，牛乳中NAG、AKP活性顯著上升，LPS含量極顯著升高，其它指標(biāo)差異不顯著，結(jié)果說(shuō)明NAG、LPS和AKP可作為隱性乳房炎的診斷指標(biāo)。印度學(xué)者建立了一種斑點(diǎn)試驗(yàn)，根據(jù)奶樣中胰蛋白酶抑制劑的檢測(cè)結(jié)果診斷隱性乳房炎，該方法敏感性和特異性分別為88.2%和89.8%。Ball等通過(guò)檢測(cè)N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶檢測(cè)隱性乳房炎;黃權(quán)利等認(rèn)為乳房炎乳的LDH、ACP、GOT和GPT活性均增加。葛影影等[11]也證實(shí)，奶牛血清ALB水平及NAG活性的顯著變化與乳房炎的感染和發(fā)生關(guān)系密切，故這些指標(biāo)可作為診斷奶牛乳房炎和乳腺組織損傷程度的血清學(xué)敏感指標(biāo)。

髓過(guò)氧化物酶是PMN、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞釋放的嗜天青顆粒的主要成分，已經(jīng)證實(shí)，MPO可作為乳房炎的診斷指標(biāo)。瑞典學(xué)者制備了奶牛MPO單克隆抗體，建立了針對(duì)牛乳MPO的MPO-ELISA方法。牛國(guó)慶等[12]選取隱性乳房炎牛，進(jìn)行奶樣MPO測(cè)定試驗(yàn)。結(jié)果奶樣中SCC和MPO濃度的相關(guān)系數(shù)值為0.257，隨著SCC增高，MPO水平也增高，兩者具有正相關(guān)性。MPO與CMT的相關(guān)系數(shù)為0.546，相關(guān)顯著。結(jié)果表明，奶液中MPO可作為隱性乳房炎指示物，利用ELISA方法檢測(cè)奶樣中MPO的方法快速、簡(jiǎn)便，可對(duì)奶牛隱性乳房炎作出早期診斷。40766C9D-955F-457E-A670-A79A9F94D75C

3 血清學(xué)炎性蛋白指標(biāo)診斷方法

炎癥會(huì)激發(fā)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生急性炎性反應(yīng)。在炎癥過(guò)程中急性期蛋白含量將顯著升高。奶牛發(fā)生隱性乳腺炎后，結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）、α1-酸性糖蛋白（α1-accelerated graphics port，AGP）、淀粉樣蛋白 A（serum amyloid A protein，SAA）等會(huì)隨著炎癥的發(fā)展而增加，且C-反應(yīng)蛋白（C-creative protein，CRP）也與SCC具有一定相關(guān)性。在急性炎癥反應(yīng)期，動(dòng)物在肝臟中血合成清淀粉樣A蛋白、結(jié)合珠蛋白（Hp）等急性期蛋白抵御感染。Eckersall等報(bào)道，急性反應(yīng)期最顯著的特征是肝臟中合成急性期蛋白水平升高，其中SAA、Hp是目前認(rèn)為最敏感的指標(biāo)。

結(jié)合珠蛋白（Haptoglobin，Hp），又稱觸珠蛋白，是一種酸性糖蛋白。健康牛血清Hp濃度低于20mg/L，乳房炎牛2d內(nèi)升至2 g/L。Hp還可作為子宮炎、腸炎、肺炎等指征。血清淀粉樣蛋白A（Serum amyloid，SAA）在急性炎癥刺激下，血清SAA1、SAA2水平在5hrs～6hrs升高約1000倍。α1-酸性糖蛋白（α1-Acid，glycoprotein，α1-AGP），又稱類黏蛋白，蔣磊[13]選取健康奶牛和不同發(fā)病程度隱性乳房炎患牛，采用α1-酸性糖蛋白ELISA試劑盒測(cè)定各組乳清樣品中α1-酸性糖蛋白的含量，結(jié)果顯示，隱性乳房炎組奶牛乳清中α1-酸性糖蛋白的含量顯著或極顯著高于健康組奶牛，且隨著奶牛隱性乳房炎病情的加重及乳中體細(xì)胞數(shù)的增加，乳清中α1-酸性糖蛋白的含量呈現(xiàn)出遞增趨勢(shì)。研究證實(shí)，乳腺炎癥引發(fā)的乳腺損傷及乳中體細(xì)胞數(shù)增加與乳清中α1-酸性糖蛋白的含量呈正相關(guān)性。研究證實(shí)，乳房炎期間乳清中轉(zhuǎn)鐵蛋白和白蛋白含量升高，而α乳清蛋白和β乳球蛋白含量降低。程郁昕等研究表明，奶牛血清中α乳蛋白與體細(xì)胞計(jì)數(shù)相關(guān)性為0.60，血清中乳蛋白可作為乳房炎診斷依據(jù)。奶牛血清或乳汁中結(jié)合珠蛋白、血清淀粉樣蛋白和α-酸性糖蛋白等在乳房炎診斷中具有重要價(jià)值[14]。

參考文獻(xiàn)：

[1]馬云，巨友娟，徐永平，等.幾種自制診斷液對(duì)奶牛隱性乳房炎的診斷效果[J].畜牧與獸醫(yī)， 2010， 42（9）：93-95.

[2]R Pilla， D Schwarz， S Koenig， et al.Microscopic differential cell counting to identify inflammatory reactions in dairy cow quarter milk samples[J].J Dairy Sci， 2012，95：4410-4420.

[3]Ariel L Rivas， Fred W Quimby， Julia Blue， et al.Longitudinal evaluation of bovine mammary gland health status by somatic cell counting， flow cytometry， and cytology[J]. J Vet Diagn Invest，2001， 13：399-407.

[4]M Paape， J Mehrzad， Xin Zhao， et al.Defense of the bovine mammary gland by polymorphonuclear neutrophil leukocytes[J].J Mammary Gland Biol.Neoplasia， 2002，7：109-121.

[5]安朋朋，孫健，韓先干，等.牛奶體細(xì)胞分型指數(shù)變化規(guī)律[J].中國(guó)奶牛，2020，（10）：50-56.

[6]劉小倩，劉穎，榮超，等.ACE2在奶牛乳腺中的表達(dá)定位及其抗炎性損傷作用的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2017，48（03）：552-560.

[7]Hall S M，Rycroft A N.Causative organisms and somatic cell counts insubclinical intramammary infections in milking goats in the UK[J].Vet Rec，2007，160（1）：19-22.

[8]王義翠，劉延鑫，孫宇，等.五味消毒飲對(duì)夏季隱性乳房炎奶牛乳和血液相關(guān)生理生化指標(biāo)的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2020，（22）：128-129.

[9]Ler Y，Laurent F，Moussaoui F.Polymorphonuclear proteolytic activity and milk composition change[J].Vet Rec，2003，34（5）：629-645.

[10]Mornni P，Pisoni G，Ruffo G，et al.Study of intramammary infections in dairy goats from mountainous regions in Italy[J].N Z Vet J，2005，53（5）：375-376.

[11]葛影影，王根林，張震，等.奶牛乳房炎血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)的變化[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2018，（3）：39-43.

[12]牛國(guó)慶，武果桃，任杰.MPO作為奶牛隱性乳房炎診斷指標(biāo)的研究[J].中國(guó)奶牛，2019，（12）：50-53.

[13]蔣磊.α1-酸性糖蛋白與奶牛隱性乳房炎的相關(guān)性分析[J].中國(guó)奶牛，2017，（9）：46-49.

[14]曹隨忠，楊永新，李宏濱，等.蛋白質(zhì)組學(xué)及其在奶牛乳房炎研究中的應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，27（3）：13-19.40766C9D-955F-457E-A670-A79A9F94D75C

[15]NY/T 2692-2015《奶牛隱性乳房炎快速診斷技術(shù)》[S].11.220-B41，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部，2015-02-09，2015-05-01.

Research progress on diagnostic methods of recessive mastitis in dairy cows

LI Guiwei

（Animal Husbandry and Veterinary Branch， Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences， Qiqihar 161005， Heilongjiang China）

Abstract：Recessive mastitis is one of the common diseases in dairy cows， which is very harmful to the healthy production of dairy cows. Articles on recessive mastitis cows diagnostic methods are summarized， the milk somatic cell diagnostics， enzymology diagnosis method and serological inflammatory protein diagnostic methods of three common methods of indicators has carried on the detailed analysis， can make each cow farms according to actual situation to choose the corresponding detection methods， better control the occurrence of recessive mastitis in dairy herd， reduce economic loss.

Keywords：dairy cow; Latent mastitis; Diagnostic methods第41卷第2期2022年4月 黑龍江水產(chǎn)Northern Chinese Fisheries研究報(bào)告The research report

作者簡(jiǎn)介：李桂偉（1979.3-），女，黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)分院助理研究員。研究方向：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)。郵箱：lgwzll123@163.com。40766C9D-955F-457E-A670-A79A9F94D75C