曾妍

【摘要】 目的：分析陰道鏡活檢、細(xì)胞增殖核抗原67（Ki-67）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、牛嗅素4（OLFM4）在子宮頸癌與癌前病變中的診斷價(jià)值。方法：回顧性分析2019年1月-2021年1月湖北六七二中西醫(yī)結(jié)合骨科醫(yī)院收治的278例子宮頸病變患者的臨床資料，均經(jīng)陰道鏡活檢，并采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)Ki-67、VEGF、OLFM4在不同子宮頸病變患者中的表達(dá)，以術(shù)后組織病理檢查為金標(biāo)準(zhǔn)，分析陰道鏡活檢、Ki-67、VEGF、OLFM4診斷子宮頸病變的價(jià)值。結(jié)果：組織病理結(jié)果顯示，278例宮頸病變患者中，慢性子宮頸炎72例，CINⅠ 46例，CINⅡ 60例，CINⅢ 40例，子宮頸癌60例。與組織病理結(jié)果對(duì)照，陰道鏡活檢診斷慢性子宮頸炎的符合率為95.83%;診斷CINⅠ的符合率為71.74%;診斷CINⅡ的符合率為75.00%;診斷CINⅢ的符合率為72.50%;診斷子宮頸癌的符合率為86.67%。Ki-67、VEGF、OLFM4的陽(yáng)性表達(dá)率均隨病變級(jí)別的升高而升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Ki-67、VEGF、OLFM4在子宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：陰道鏡活檢、Ki-67、VEGF、OLFM4診斷子宮頸癌與癌前病變具有一定價(jià)值，可作為篩查子宮頸癌的輔助方法，值得臨床推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 子宮頸癌 癌前病變 陰道鏡活檢 細(xì)胞增殖核抗原67 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 牛嗅素4

Diagnostic Value of Colposcopy Biopsy， Ki-67， VEGF and OLFM4 in Cervical Cancer and Precancerous Lesions/ZENG Yan. //Medical Innovation of China， 2022， 19（10）： -127

[Abstract] Objective： To analyze the diagnostic value of colposcopy biopsy， cell proliferation antigen 67

（Ki-67）， vascular endothelial growth factor （VEGF） and bovine OLFM4 （OLFM4） in cervical cancer and precancerous lesions. Method： The clinical data of 278 patients with cervical lesions treated in Hubei 672 Orthopaedic Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine from January 2019 to January 2021 were retrospectively analyzed. All of them were biopsied by colposcopy， and the expressions of Ki-67， VEGF and OLFM4 in patients with different cervical lesions were detected by immunohistochemical SP method. The value of colposcopy biopsy， Ki-67， VEGF and OLFM4 in the diagnosis of cervical lesions was analyzed using postoperative histopathological examination as the gold standard. Result： Histopathological results showed that among the 278 patients with cervical lesions， there were 72 patients with chronic cervicitis， 46 patients with CINⅠ， 60 patients with CINⅡ， 40 patients with CINⅢ， and 60 patients with cervical cancer. Compared with histopathological results， the coincidence rate of chronic cervicitis diagnosed by colposcopy biopsy was 95.83%; the coincidence rate of CINⅠ diagnosis was 71.74%; the coincidence rate of CINⅡ diagnosis was 75.00%; the coincidence rate of CINⅢ diagnosis was 72.50%; the coincidence rate of cervical cancer diognosis was 86.67%. The positive expression rates of Ki-67， VEGF and OLFM4 increased with the increase of lesion grade， the differences were statistically significant （P<0.05）. The positive expression rates of Ki-67， VEGF and OLFM4 in cervical cancer were higher than those in chronic cervicitis， CINⅠ， CINⅡ and CINⅢ， with statistical significance （P<0.05）. Conclusion： Colposcopy biopsy， Ki-67， VEGF and OLFM4 have certain value in the diagnosis of cervical cancer and precancerous lesions， and can be used as an auxiliary method for cervical cancer screening， which is worthy of clinical application.

[Key words] Cervical cancer Precancerous lesion Colposcopy biopsy Proliferating cell nuclear antigen 67 Vascular endothelial growth factor Olfactomedin 4

First-author’s address： Hubei 672 Orthopaedics Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine， Wuhan 430000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.10.029

子宮頸病變是婦科常見(jiàn)病，包括子宮頸炎、子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及子宮頸癌等，其中子宮頸癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤，近年來(lái)其發(fā)病率上升，且年輕化，在女性惡性腫瘤中排第2位，僅次于乳腺癌[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年子宮頸癌發(fā)病率為45萬(wàn)，我國(guó)每年新增病例約10萬(wàn)[2]。而CIN是癌前病變階段，因此及時(shí)干預(yù)可降低子宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)[3]。臨床常采用陰道鏡檢查，對(duì)子宮頸癌及癌前病變的早診斷及治療與預(yù)后有一定價(jià)值。但其對(duì)操作者要求較高，且無(wú)法取得子宮頸管內(nèi)病變組織，從而限制了其準(zhǔn)確性，導(dǎo)致誤診[4]。近年來(lái)生物標(biāo)記物逐漸用于子宮頸癌與癌前病變篩查中，抗原67（Ki-67）是核抗原蛋白，常用于輔助子宮頸癌及其癌變前的早期診斷[5]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）能促進(jìn)淋巴管新生，對(duì)CIN臨床治療、預(yù)后有一定價(jià)值[6]。牛嗅素4（OLFM4）是抗細(xì)胞凋亡的糖蛋白，參與癌細(xì)胞黏附和轉(zhuǎn)移[7]。鑒于臨床采用陰道鏡活檢聯(lián)合Ki-67、VEGF、OLFM4診斷子宮頸癌與癌前病變的診斷價(jià)值相關(guān)報(bào)道較少，因此本研究進(jìn)一步分析。旨在提高子宮頸病變檢出率?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2019年1月-2021年1月湖北六七二中西醫(yī)結(jié)合骨科醫(yī)院收治的278例子宮頸病變患者的臨床資料，年齡30～65歲，平均（38.46±6.22）歲。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)術(shù)后組織病理檢查確診;②有性生活史;③臨床資料完整。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者;②合并器質(zhì)性疾病者;③盆腔放療等相關(guān)病史。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)

1.2 方法

1.2.1 組織病理學(xué)檢測(cè) 行常規(guī)病理組織制片，即于移行帶3、6、9、12點(diǎn)依次取材，同時(shí)應(yīng)用甲醛溶液10%固定選取的子宮頸組織，通過(guò)常規(guī)的包埋法將其制備成蠟塊同時(shí)送至病理科檢測(cè)。診斷標(biāo)準(zhǔn)，子宮頸癌：具有鱗狀上皮分化（即角化），細(xì)胞間橋，而無(wú)腺體分化或者黏液分泌;癌前病變：慢性子宮頸炎，表現(xiàn)為白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);CINⅠ，輕度非典型增生，細(xì)胞異型性輕，排列不整齊，異常增生的子宮頸細(xì)胞僅限于上皮層的下1/3;CINⅡ，中度上皮內(nèi)瘤變，中度非典型增生，細(xì)胞異型性明顯，排列較紊亂，異常增生的子宮頸細(xì)胞占據(jù)上皮層的下2/3;CINⅢ，高度上皮內(nèi)瘤變，重度非典型增生，細(xì)胞異型性顯著，失去極性，異常增生的子宮頸細(xì)胞擴(kuò)展至上皮層的下2/3以上。

1.2.2 陰道鏡活檢 陰道鏡采用XD-6000Y型。避開(kāi)月經(jīng)期，窺器放入陰道后呈半開(kāi)狀，暴露陰道穹窿，用棉球擦去分泌物，調(diào)整焦距，用5%醋酸的棉球浸濕子宮頸，反應(yīng)3 min后用5%復(fù)方碘液棉球浸濕子宮頸，對(duì)病變面積較大者采用Leep術(shù)活檢;對(duì)可疑部位行3、6、9、12點(diǎn)作活檢。進(jìn)行組織學(xué)檢查。陰道鏡圖像診斷：（1）正常轉(zhuǎn)化區(qū)，柱狀上皮小島，腺開(kāi)口和納氏腺囊腫;（2）子宮頸濕疣;（3）醋白上皮;（4）白嵌二聯(lián)征;（5）白嵌三聯(lián)征;（6）子宮頸癌：移行區(qū)有醋白上皮、粗鑲嵌、粗點(diǎn)狀血管及其他異型血管同時(shí)出現(xiàn)或單獨(dú)出現(xiàn)并可伴有豬油狀、微小腦回狀上皮改變;（7）陰道鏡檢查不滿意：移行帶上移至子宮頸管內(nèi)或因接觸性出血嚴(yán)重?zé)o法檢查。（1）為陰道鏡陰性診斷，（2）～（7）為陽(yáng)性診斷。其中陰道鏡陰性診斷為慢性子宮頸炎;子宮頸濕疣、醋白，上皮組織學(xué)預(yù)測(cè)為CINⅠ;二聯(lián)征組織學(xué)預(yù)測(cè)為CINⅡ;三聯(lián)征組織學(xué)預(yù)測(cè)為CINⅢ;子宮頸癌組織學(xué)預(yù)測(cè)為子宮頸癌。

1.2.3 Ki-67、VEGF、OLFM4檢測(cè) 鼠抗人Ki-67單克隆抗體及鼠抗人VEGF單克隆抗體均為福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司產(chǎn)品。OLFM4兔抗人多克隆抗體為英國(guó)Abcam公司。均采用免疫組化SP法染色。免疫組織化染色：切片脫蠟，梯度酒精水化;行微波修復(fù)。將切片放入含檸檬酸鹽緩沖液的容器內(nèi)，微波爐加熱13 min，溫度98 ℃取出容器，自然冷卻，PBS沖洗3 min×3次;阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：滴加3%過(guò)氧化氫，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3 min×3次;滴加非免疫動(dòng)物血清，室溫下孵育10 min。除去血清，滴加即用型Ki-67的一抗，4 ℃孵育過(guò)夜，PBS沖洗3 min×3次;滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫下孵育10 min，PBS沖洗

3 min×3次;滴加過(guò)氧化物酶溶液，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3 min×3次;滴加DAB溶液顯色;蘇木素復(fù)染、脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片。結(jié)果判讀：Ki-67、VEGF、OLFM4陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，表達(dá)強(qiáng)度按陽(yáng)性細(xì)胞比例及分布情況判讀：陰性（-）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%;弱陽(yáng)性（+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為5%～24%;中度陽(yáng)性（++）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為25%～50%;強(qiáng)陽(yáng)性（+++）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%。

1.3 觀察指標(biāo) 以術(shù)后組織病理檢查為金標(biāo)準(zhǔn)，分析陰道鏡活檢對(duì)慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及子宮頸癌診斷情況;并統(tǒng)計(jì)Ki-67、VEGF、OLFM4在慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及子宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 選用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0對(duì)分析和處理，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，行字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陰道鏡活檢與組織病理診斷對(duì)照 術(shù)后組織病理結(jié)果顯示，278例子宮頸病變患者中，慢性子宮頸炎72例，CINⅠ 46例，CINⅡ 60例，CINⅢ 40例，子宮頸癌60例。其中陰道鏡活檢診斷慢性子宮頸炎的符合率為95.83%;診斷CINⅠ的符合率為71.74%;診斷CINⅡ的符合率為75.00%;診斷CINⅢ的符合率為72.50%;診斷子宮頸癌的符合率為86.67%，見(jiàn)表1。

2.2 Ki-67在子宮頸病變中的表達(dá) Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率隨病變級(jí)別的升高均有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;Ki-67在子宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率高于慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 VEGF在子宮頸病變中的表達(dá) VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率隨病變級(jí)別的升高均有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;VEGF在子宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率高于慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 OLFM4在子宮頸病變中的表達(dá) OLFM4的陽(yáng)性表達(dá)率隨病變級(jí)別的升高均有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;OLFM4在子宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率高于慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表4。

3 討論

目前認(rèn)為，CINⅡ、CINⅢ患者與高危型HPV密切相關(guān)，CINⅠ病理形態(tài)和陰道鏡下改變與HPV感染無(wú)明顯區(qū)別[8]。有學(xué)者認(rèn)為，CINⅡ、Ⅲ是癌前病變，CINⅠ僅是自我限制的性傳播感染的形態(tài)[9]。因此子宮頸癌可早期預(yù)防。但由于早期子宮頸癌很難用肉眼識(shí)別，常規(guī)子宮頸活檢陽(yáng)性率不高。而電子陰道鏡分辨率較高，能夠觀察子宮頸柱狀鱗狀上皮邊緣區(qū)域，觀察子宮頸上皮及血管較小病變[10]。同時(shí)在檢查中使用醋酸溶液可定位疑病變部位，從而提高診斷準(zhǔn)確性和可靠性，且道鏡可檢測(cè)到肉眼無(wú)法檢測(cè)到的亞臨床病變，從而大大降低了漏診率[11]。本研究顯示，陰道鏡活檢診斷慢性子宮頸炎的符合率為95.83%;診斷CINⅠ的符合率為71.74%;診斷CINⅡ的符合率為75.00%;診斷CINⅢ的符合率為72.50%;診斷子宮頸癌的符合率為86.67%，與羅古坡等[12]研究相似，提示陰道鏡活檢診斷子宮頸癌與癌前病變中具有一定價(jià)值，但均具有一定誤診率，這是由于活檢不能替代子宮頸錐術(shù)后的組織病理診斷，且陰道鏡子宮頸管內(nèi)的病灶難以暴露，因此存在一定誤診率。

研究表明，Ki-67與惡性腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后具相關(guān)性[13-14]。Ki-67是細(xì)胞分裂和增殖的蛋白，可反映細(xì)胞的增殖活性及異常增殖、惡性病變、新生血管等病理過(guò)程的程度，其高表達(dá)表明腫瘤細(xì)胞增殖活躍，是腫瘤增殖活性分級(jí)的指標(biāo)[15]。而惡性腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴(lài)于血管生成，VEGF是腫瘤血管生成過(guò)程中最特異的促血管生成因子，能刺激內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和血管的形成[16-18]。同時(shí)新生血管結(jié)構(gòu)不完善和血管通透性的增加可導(dǎo)致細(xì)胞空間的擴(kuò)大，致使癌細(xì)胞進(jìn)入[19]。OLFM4是糖基化細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，分通過(guò)與凝集素和鈣粘蛋白相互作用調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附，調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞增殖，與腫瘤組織的分化相關(guān)[20]。本研究顯示，Ki-67、VEGF、OLFM4的陽(yáng)性表達(dá)率均隨病變級(jí)別的升高而升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示Ki-67、VEGF、OLFM4陽(yáng)性情況隨子宮頸病變進(jìn)展逐漸增高，能夠反映正常子宮頸、CIN組織及子宮頸細(xì)胞增殖和分化，可成為高危人群篩查的指標(biāo)。但由于本研究納入例數(shù)較少，可影響結(jié)論，下一步可擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步論證，并分析陰道鏡活檢聯(lián)合Ki-67、VEGF、OLFM4對(duì)子宮頸病變的診斷價(jià)值，為臨床提供參考。

綜上所述，陰道鏡活檢、Ki-67、VEGF、OLFM4診斷子宮頸癌與癌前病變具有一定價(jià)值，可成為高危人群篩查的指標(biāo)，值得臨床推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2021-07-20） （本文編輯：張爽）