趙 婉，王艷艷，黃莉莉，趙 航，李廷利

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省醫(yī)院 藥學(xué)部，黑龍江 哈爾濱 150000）

酸棗仁湯為補(bǔ)養(yǎng)心肝、益血安神的經(jīng)典名方[1]，具有鎮(zhèn)靜催眠、抗焦慮、抗抑郁、抗驚厥和改善心腦血管疾病等作用[2,3]，現(xiàn)代臨床多用于治療不同類型焦慮、抑郁、神經(jīng)衰弱及各類疾病伴失眠患者[4]。酸棗仁湯原名酸棗湯，最早記載該方的典籍是張仲景《金匱要略·血痹虛勞病脈證并治第六》，其述：“虛勞，虛煩不得眠，酸棗湯主之”[5]。后來清朝俞嘉言在《醫(yī)門法律》將其更名為酸棗仁湯[6]。因此，原方中所用“酸棗”是否等同于現(xiàn)在所用的“酸棗仁”，酸棗仁中安神藥理作用的主要藥效成分總皂苷與總黃酮的含量是否優(yōu)于酸棗，值得探索與研究。

《金匱要略》中記載的酸棗湯制備方法為“酸棗二升、甘草一兩、知母二兩、茯苓二兩、川芎二兩。上五味，以水八升煮酸棗仁得六升，納諸藥煮取三升，分溫三服”。根據(jù)東漢時(shí)期量器得知“二升”酸棗仁的重量為250g 左右[7]。參考上述湯劑煎煮方法，在其他因素不改變的條件下，分別考察提取溫度、粉碎程度、浸泡時(shí)間對(duì)湯劑總黃酮與總皂苷含量的影響，優(yōu)化湯劑的提取工藝。本實(shí)驗(yàn)選擇山西陽(yáng)泉的道地酸棗，將其加工為酸棗仁和炒酸棗仁，同一批次產(chǎn)地藥物間的含量比較更為準(zhǔn)確可靠。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與藥品

MS105 型分析天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易有限公司）；N-1300 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本EYELA 公司）；SP-1920 型紫外可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）。

HAc（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；HClO4（天津政成化學(xué)制品有限公司）；香草醛（天津博迪化工股份有限公司）；Al（NO3）3（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；NaNO2（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；NaOH（天津市凱通化學(xué)試劑有限公司），以上試劑均為分析純。

酸棗，購(gòu)自山西省陽(yáng)泉市平定縣；酸棗仁（由酸棗加工而得）；炒酸棗仁（取上述酸棗仁，按照2020年版《中國(guó)藥典》清炒法（通則0213）炒至略微膨脹鼓起，顏色變深，微有香味）；酸棗仁湯（酸棗仁同上，茯苓、知母、川芎、甘草均購(gòu)自同仁堂）；蘆丁對(duì)照品（DST181101-017，純度：HPLC≥98% 成都德思特生物有限公司）；酸棗仁皂苷A 對(duì)照品（DST190709-058，純度：HPLC≥98% 成都德思特生物有限公司）。

1.2 方法學(xué)考察

1.2.1 酸棗湯劑制備方法 取酸棗適量，精密稱定，加入適量水，在水沸騰后煎煮25min，過濾，濃縮至200mL，備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

（1）總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱定蘆丁對(duì)照品適量，于25mL 容量瓶中，用無水乙醇超聲溶解并定容。精密移取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mL 于7 個(gè)10mL容量瓶中備用。依次加入5% NaNO2溶液0.6mL，搖勻，放置6min，加入10%Al（NO3）3溶液0.4mL，搖勻，放置6min，加入4% NaOH 溶液4mL，搖勻，用無水乙醇定容，搖勻，放置15min。以0mL 標(biāo)準(zhǔn)品溶液為空白試劑，以紫外可見分光光度計(jì)上510nm 處測(cè)定的吸光度值為y，以蘆丁質(zhì)量（mg）為x 進(jìn)行線性回歸，回歸方程y=0.4843x+0.024，R2=0.9926。結(jié)果顯示，總黃酮在0.200～1.000mg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

（2）總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱定酸棗仁皂苷A標(biāo)準(zhǔn)品適量，加甲醇溶解，定容于10mL 容量瓶，搖勻，備用。分別精密移取120、220、280、360、440、500μL 于6 個(gè)10mL 試管中，53℃水浴揮干溶劑，各試管中加入5%香草醛-HAc 溶液200μL，HClO4800μL，搖勻，60℃水浴15min 后，立即取出置冰水浴2min，各加5mL HAc，以0mL 標(biāo)準(zhǔn)品溶液為空白試劑，以紫外可見分光光度計(jì)上472nm 處測(cè)定的吸光度值為y，以酸棗仁皂苷A 質(zhì)量（mg）為x 進(jìn)行線性回歸，回歸方程y=1799.5x+0.0679，R2=0.9988。結(jié)果顯示，總皂苷在0.05472～0.23712ng 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.3 精密度實(shí)驗(yàn) 按照1.2.1 項(xiàng)下制備樣品溶液，按1.2.2 項(xiàng)下方法分別連續(xù)測(cè)定6 次吸光度，結(jié)果見表1。

表1 總黃酮和總皂苷精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of precision test of total flavonoids and total saponins

由表1 可知，測(cè)得總黃酮、總皂苷的吸光度RSD 分別為0.63%、0.24%，結(jié)果表明，所用儀器精密度良好。

1.2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別在3、6、12、24、48h 測(cè)定總黃酮的吸光度，0，10，30，120，150，180min 測(cè)定總皂苷的吸光度，結(jié)果見表2。

表2 總黃酮和總皂苷穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（吸光度A）Tab.2 Results of the stability test of total flavonoids and total saponins

由表2 可知，其吸光度RSD 分別為1.92%、1.16%，結(jié)果表明，樣品在考察時(shí)間范圍內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批酸棗，制備6 份樣品溶液，分別測(cè)定總黃酮和總皂苷吸光度RSD 結(jié)果見表3。

表3 總黃酮和總皂苷重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Results of reproducible experiment of total flavonoids and total saponins

由表3 可知，總黃酮和總皂苷吸光度為1.66%、1.65%，結(jié)果表明，此方法重復(fù)性良好。

1.2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的6 份樣品，分別加蘆丁、酸棗仁皂苷A 對(duì)照品適量，按1.1.2 項(xiàng)下方法操作，表4 為總黃酮、總皂苷加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

由表4 可知，平均回收率分別為98.19%、98.97%，RSD 分別為4.38%、3.01%。

表4 總黃酮、總皂苷加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Results of total flavonoids and total saponin recovery test

2 結(jié)果與討論

2.1 單因素影響實(shí)驗(yàn)

2.1.1 提取溫度的影響 稱取225g 酸棗，加入1600mL 水，分別在60、70、80、90、100℃溫度下提取，煎煮25min 至水煎液為1200mL 時(shí)，過濾，濃縮至200mL?？傸S酮與總皂苷含量結(jié)果見圖1。

由圖1 可以看出，在一定范圍內(nèi)，隨著提取溫度的增加，總黃酮和總皂苷的含量逐漸增加，當(dāng)提取溫度為100℃時(shí)，總黃酮和總皂苷的含量最高。

圖1 提取溫度對(duì)酸棗總黃酮和總皂苷含量的影響Fig.1 Effect of extraction temperature on the content of total flavonoids and total saponins of suanzao

2.1.2 粉碎程度的影響 將酸棗粉碎為最粗粉（全部通過1#篩，但混有能通過3#篩不超過20% 的粉末），粗粉（全部通過2#篩，但混有能通過4#篩不超過40%的粉末），中粉（全部通過4#篩，但混有能通過5#篩不超過60%的粉末）。稱取225g 酸棗粉末，加入1600mL 水，在100℃溫度下提取，煎煮25min至水煎液為1200mL 時(shí)，過濾，濃縮至200mL?？傸S酮與總皂苷含量結(jié)果見圖2。

由圖2 可以看出，在一定范圍內(nèi)，隨著粉碎程度的增大，總黃酮和總皂苷的含量越來越高，當(dāng)粉粹程度超過粗粉后，總黃酮和總皂苷的含量減少，當(dāng)粉粹程度為粗粉時(shí)，總黃酮和總皂苷的含量最高。

圖2 粉碎程度對(duì)酸棗總黃酮和總皂苷含量的影響Fig.2 Effect of comminution degree on the content of total flavonoids and total saponins of suanzao

2.1.3 浸泡時(shí)間的影響 稱取225g 酸棗，加入1600mL 水分別浸泡0、0.5、1.0、1.5、2.0h，在100℃下提取，煎煮25min 至水煎液為1200mL 時(shí)，過濾，濃縮至200mL?？傸S酮與總皂苷含量結(jié)果見圖3。

圖3 浸泡時(shí)間對(duì)酸棗總黃酮和總皂苷含量的影響Fig.3 Effect of soaking time on the content of total flavonoids and total saponins of suanzao

由圖3 可以看出，浸泡時(shí)間過短，總黃酮和總皂苷提取不完全，浸泡時(shí)間超過1.5h 后，總黃酮和總皂苷含量的變化不是很大，當(dāng)浸泡時(shí)間為1.0h 時(shí)，總黃酮和總皂苷的含量最高。

綜上所述，制備工藝為稱定225g 酸棗粗粉，加入1600mL 水浸泡1h 后，在100℃溫度下煎煮25min至水煎液為1200mL 時(shí)，過濾，即得。

2.2 酸棗仁系列藥物湯劑總黃酮與總皂苷含量比較

2.2.1 樣品制備方法 按照制備工藝研究確定的粉碎程度，浸泡時(shí)間和提取溫度，選擇優(yōu)化的方法制備酸棗仁系列藥物湯劑。

2.2.2 總黃酮與總皂苷含量測(cè)定 分別應(yīng)用1.2.1和1.2.2 的方法，移取適量樣品溶液測(cè)定各湯劑中總黃酮與總皂苷的含量，分析比較含量的變化趨勢(shì)。酸棗仁系列藥物總黃酮與總皂苷含量見表5。

表5 酸棗仁系列藥物總黃酮與總皂苷含量（%）Tab.5 Total flavonoids and total saponins content of a series of medicines of suanzaoren

由表5 可知，總黃酮含量：酸棗仁湯（酸棗仁）<炒酸棗仁<酸棗仁湯（酸棗）<生酸棗仁<生-炒酸棗仁配伍<酸棗；總皂苷含量：炒酸棗仁<酸棗仁湯（酸棗仁）<酸棗仁湯（酸棗）<生酸棗仁<生-炒酸棗仁配伍<酸棗。

3 結(jié)論

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，相較于酸棗仁，酸棗安神的有效成分總黃酮和總皂苷含量更高。將酸棗仁湯中的酸棗仁替換為酸棗后其總黃酮與總皂苷的含量依舊高于酸棗仁湯。以上結(jié)果可以為酸棗仁湯轉(zhuǎn)變?yōu)樗釛棞峁├碚撝С帧Ｋ釛椚始庸こ杀靖?，售價(jià)不菲，如若替換為酸棗將會(huì)大幅度簡(jiǎn)化制備工藝，充分利用藥用資源，為酸棗的新藥研發(fā)開辟新思路。目前，學(xué)者們認(rèn)為總皂苷和總黃酮成分是酸棗仁湯安神的主要藥效基礎(chǔ)，其他成分是否影響酸棗仁湯的臨床療效還需要進(jìn)一步的研究，酸棗仁湯中的酸棗仁能否更換為酸棗還需要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的支持。