李梁杰 井虹蘇 Byar Shubh Narayan 丁紫涵 張 迪 程 開(kāi)

(1. 佳木斯大學(xué)研究生院，黑龍江 佳木斯 154007；2. 佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154000； 3. 深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院，廣東 深圳 518111)

胃癌是一個(gè)全球性的尚未解決的臨床問(wèn)題，全世界的總體生存統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)很低[1]。每年新診斷出的胃癌大多數(shù)發(fā)生在亞洲和南美國(guó)家[2]。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2020年美國(guó)有27 000新增病例被診斷[3]。大多數(shù)胃癌病例是在疾病晚期被診斷出來(lái)的，導(dǎo)致總體預(yù)后不佳。胃癌的總存活率很低，在美國(guó)為31%，全球保持在25%[4]。很明顯，胃癌仍然是一種致命的疾病，但是目前的治療方案或更早的檢測(cè)策略并沒(méi)有有意義的方式對(duì)其加以控制[1]。

紫杉醇作為臨床一線的抗腫瘤藥物，在癌癥治療方面有著獨(dú)特的作用，但是近幾年因?yàn)槠涿黠@的毒副作用限制了其臨床應(yīng)用[5]。黃芩是臨床常用的一味中藥材，其具有良好的抗病毒、抗菌以及解熱鎮(zhèn)痛的作用效果，在保肝、抗腫瘤等方面發(fā)揮著重要的藥理作用[6]。因此，本實(shí)驗(yàn)著重研究紫杉醇聯(lián)合黃芩素對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖抑制作用。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與材料

全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-TEK公司)、紫杉醇(大連美倫生物有限公司)、黃芩苷(懋康生物科技有限公司)、CCK-8試劑盒(碧云天生物)、凝膠成像系統(tǒng)(上海天能科技有限公司)、PCNA(碧云天生物)。

1.3 檢測(cè)紫杉醇和黃芩苷作用SGC-7901細(xì)胞的存活率

將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞配置成細(xì)胞懸液，向96孔板的各孔中加入200 μL，細(xì)胞密度為7 000個(gè)/孔，培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h和48 h。配置的黃芩苷的濃度為：5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、60 μg/ml、80 μg/ml；配置紫杉醇的濃度為：0.1 μmol/L、0.5 μmol/L、2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L。將黃芩苷和紫杉醇加入96孔板中，每個(gè)濃度5個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)24和48 h。然后，在每孔內(nèi)加20 μL的CCK-8溶液，放入培養(yǎng)箱中孵育2 h后，取出96孔板，用酶標(biāo)檢測(cè)儀檢測(cè)每孔吸光度值。選取紫杉醇濃度為10 μmol/L，黃岑苷濃度為40 μg/ml，配比好濃度后，將紫杉醇和黃芩苷按1∶1、1∶2、1∶3 的比例對(duì)SGC-7901細(xì)胞再進(jìn)行上述加藥實(shí)驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采取SPSS17.0軟件分析出來(lái)，所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用單因素方差分析，P<0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 紫杉醇和黃芩苷對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖的影響

紫杉醇和黃芩苷分別作用于SGC-7901細(xì)胞24 h 和48 h后，不同濃度的紫杉醇和黃芩苷對(duì)SGC-7901細(xì)胞的存活率具有影響顯著，隨著紫杉醇和黃芩苷時(shí)間濃度的增加，SGC-7901細(xì)胞的存活率明顯降低。具體結(jié)果見(jiàn)表1，表2。

表1 不同濃度紫杉醇對(duì)SGC-7901細(xì)胞存活率的影響Tab. 1 Effects of different concentrations of Paclitaxel on the survival rate of SGC-7901 cells

表2 不同濃度黃芩苷對(duì)SGC-7901細(xì)胞存活率的影響Tab. 2 Effects of different concentrations of baicalin on the survival rate of SGC-7901cells

2.2 紫杉醇聯(lián)合黃芩苷對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖的影響

紫杉醇與黃芩苷聯(lián)用后，SGC-7901細(xì)胞的存活率在48 h時(shí)紫杉醇與黃芩苷濃度比為1∶5時(shí)最低，并隨時(shí)間的延長(zhǎng)存活率也相應(yīng)的下降，不同聯(lián)合濃度的紫杉醇和黃芩苷對(duì)SGC-7901細(xì)胞的存活率見(jiàn)表3。

表3 紫杉醇聯(lián)合黃芩苷對(duì)U251細(xì)胞存活率的影響Tab. 3 The effect of Paclitaxel combined with baicalin on the survival rate of SGC-7901 cells

2.3 紫杉醇聯(lián)合黃岑苷對(duì)SGC-7901細(xì)胞PCNA增殖蛋白表達(dá)的影響

如圖1所示，與對(duì)照組相比，紫杉醇和黃岑苷均可降低PCNA蛋白的表達(dá)量(P<0.05)，兩藥聯(lián)合在降低PCNA蛋白表達(dá)更為顯著(P<0.05)。

3 討論

盡管手術(shù)仍是治療胃癌的唯一有效方法，但是術(shù)前(新輔助)、術(shù)后(輔助)或圍手術(shù)期加化療，都有利于生存期的延長(zhǎng)[7]。根據(jù)MAGIC試驗(yàn)(圍手術(shù)期采用ECF方案化療：阿霉素、順鉑和持續(xù)輸注5-氟尿嘧啶)的發(fā)現(xiàn)，與單純手術(shù)相比，多模式方法治療局部進(jìn)展期胃癌可提高總存活率[8]。目前中西醫(yī)結(jié)合的方法治療腫瘤受到廣泛的關(guān)注，本實(shí)驗(yàn)采取的紫杉醇聯(lián)合黃芩苷治療胃癌的方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫杉醇和黃岑苷對(duì)SGC-7901細(xì)胞的抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴(lài)性，并且二者聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同抗腫瘤作用。隨黃芩苷濃比例升高時(shí)，抑制率成上升趨勢(shì)，且均比紫杉醇和黃岑苷單獨(dú)作用的抑制率高。因此可在臨床治療中采用黃芩苷和紫杉醇聯(lián)合治療胃癌患者，有望提高胃癌患者的生存率，降低化療的毒副作用。

注：與對(duì)照組比，#表示p<0.05,##表示p<0.01; 與單藥組比，*表示p<0.05 圖1 紫杉醇聯(lián)合黃岑苷對(duì)SGC-7901細(xì)胞PCNA