鄭國(guó)群 于 佳 吳明偉*

1.貴州省黎平縣中醫(yī)醫(yī)院，貴州 黎平 557300；2.貴州省中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550000

欖香烯注射液(Elemene injection)是我國(guó)自主研制的一種二類(lèi)非細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物，其主要抗腫瘤活性物質(zhì)欖香烯[1-2](Elemene)是從姜科植物溫郁金(CurcumawenyujinY. H. Chen et C. Ling)、溫莪術(shù)(CurcumaaromaticaSalisb.)中提取的一種具有抗腫瘤活性的倍半萜烯類(lèi)化合物，主要以β-欖香烯、γ-欖香烯和δ-欖香烯的油狀混合物形式存在。欖香烯注射液的原藥材溫莪術(shù)是姜科植物蓬莪術(shù)CurcumaphaeocaulisVal. 、廣西莪術(shù)CurcumakwangsiensisS. G. Lee et C. F. Liang或溫郁金CurcumawenyujinY. H. Chen et C. Ling的干燥根莖，味辛、苦，性溫，既可入血分，又能入氣分，具有破血行氣、消積止痛之功效，為破血消癥之要藥，用于瘀血經(jīng)閉、食積腹脹、癥瘕痞塊等，其中醫(yī)、中藥學(xué)應(yīng)用首載于《藥性論》：“治女子血?dú)庑耐?，破痃癖冷氣，以酒醋摩服?！睖赜艚鹗墙浦参锱钶g(shù)CurcumaphaeocaulisVal. 、廣西莪術(shù)CurcumakwangsiensisS. G. Lee et C. F. Liang、姜黃CurcumalongaL.或溫郁金CurcumawenyujinY. H. Chen et C. Ling的干燥根莖的干燥塊根，味辛、苦，性寒，具有活血行氣、開(kāi)郁止痛、涼血清心和利膽退黃之功效，可用于血瘀氣滯之胸肋腹痛、熱病神昏、癲癇等證，肝膽濕熱證和肝郁化火、氣火上逆，迫血旺行之吐血、衄血及婦女倒經(jīng)等?！侗静輦湟分杏涊d，郁金可行氣、解郁、泄血、破淤，涼心熱、散肝郁，治婦人經(jīng)脈逆行?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，莪術(shù)和溫郁金均具有較好的抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗早孕、抗菌、保肝、抗纖維組織增生、保護(hù)心血管系統(tǒng)、細(xì)胞毒等作用，為臨床常用的活血化瘀類(lèi)藥物。使用溫莪術(shù)和溫郁金制備的欖香烯注射液主要成分為β-、γ-和δ-欖香烯是欖香烯的3種同分異構(gòu)體，其中β-欖香烯分子式為C15H24[3-4](化學(xué)名為1-甲基-1-乙烯基-2,4-二異丙基環(huán)己烷，結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1)，是抗腫瘤作用的主要活性物質(zhì)。該藥對(duì)許多腫瘤細(xì)胞都具有明顯的抑殺作用，如肺癌細(xì)胞、肺腺癌細(xì)胞及直腸癌細(xì)胞等，亦可用于介入、腔內(nèi)化療及癌性胸腹水的治療。自1994年投入市場(chǎng)之后，欖香烯注射液在多種腫瘤和癌癥的臨床治療上獲得了大量應(yīng)用。

圖1 β-欖香烯(1-甲基-1-乙烯基-2,4-二異丙基環(huán)己烷)(摘自文獻(xiàn)[5])

1 欖香烯注射液作用機(jī)制研究進(jìn)展

1.1 抑制腫瘤細(xì)胞增殖 腫瘤主要由腫瘤細(xì)胞組成，增長(zhǎng)速度很快，生長(zhǎng)旺盛，與整個(gè)機(jī)體不協(xié)調(diào)，能無(wú)限制地分裂和增殖，腫瘤細(xì)胞增殖周期包括增殖、非增殖和無(wú)增殖能力三個(gè)細(xì)胞群。增殖細(xì)胞群是指處于不斷按指數(shù)分裂增殖的細(xì)胞，它們對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、復(fù)制、播散和轉(zhuǎn)移起決定性作用。因此，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖可有效地控制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，同時(shí)亦是治療惡性腫瘤的重要手段或途徑之一。曹陽(yáng)等[6]研究發(fā)現(xiàn)欖香烯對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用，同時(shí)亦降低了bcl-2蛋白的表達(dá)和bcl-2mRNA水平以及上調(diào)p53蛋白的表達(dá)。表明欖香烯作用機(jī)制可能與上調(diào)抑癌基因p53與下調(diào)了癌基因bcl-2的表達(dá)有關(guān)，進(jìn)而誘使肺癌細(xì)胞凋亡。龔敏等[7]研究發(fā)現(xiàn)欖香烯對(duì)HepG-2細(xì)胞增殖的抑制作用主要與其影響DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(topoisomerase I, TOPO)的表達(dá)與活性有關(guān)，且呈現(xiàn)明顯的時(shí)間和劑量依賴(lài)性。徐希等[8]研究證實(shí)了欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用具有時(shí)效和量效關(guān)系，誘導(dǎo)Raji細(xì)胞的凋亡作用具有一定的濃度依賴(lài)性；同時(shí)亦發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞周期中的G0/G1期細(xì)胞相對(duì)增多，而S期和G2/M期細(xì)胞均相對(duì)地減少，表明欖香烯可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，其作用機(jī)制是阻滯腫瘤細(xì)胞向S期和G2/M期進(jìn)展，將其停滯在細(xì)胞周期中的G0/G1期。

朱廷準(zhǔn)等[9]報(bào)道欖香烯對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，證實(shí)了欖香烯抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用與阻滯腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期有關(guān)，且其阻滯作用又與欖香烯上調(diào)細(xì)胞中 MKK3和 MKK6的磷酸化水平有關(guān)。再次證實(shí)了欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖具有明顯的抑制作用。對(duì)MKK3/6信號(hào)通路的磷酸化激活，在抑制腫瘤細(xì)胞增殖過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用，而抑制MKK3和MKK6的活性則可明顯消除欖香烯的抗腫瘤作用。

1.2 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 細(xì)胞的凋亡異常是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的主要機(jī)制之一，且易受一些基因和蛋白的表達(dá)影響。如：Survivin與Caspase-3特異性結(jié)合，一方面阻斷細(xì)胞凋亡效應(yīng)；另一方面可與細(xì)胞核內(nèi)的細(xì)胞周期依賴(lài)性蛋白激酶4相結(jié)合，抑制p21基因活性，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。鄒麗娟等[10]研究發(fā)現(xiàn)β-欖香烯是通過(guò)對(duì)K562細(xì)胞的殺傷作用，從而導(dǎo)致其細(xì)胞凋亡，且其對(duì)腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用呈現(xiàn)一定的時(shí)效和量效依賴(lài)性。李傳剛等[11]研究發(fā)現(xiàn)欖香烯能夠升高人膀胱癌BIU-18細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度，并與藥物濃度具有一定的依賴(lài)性關(guān)系。方寧等[12]研究發(fā)現(xiàn)β-欖香烯作用于HcaF細(xì)胞后可使鈣庫(kù)釋放Ca2+，致細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度升高；且在細(xì)胞凋亡初期，可使細(xì)胞質(zhì)膜的生物學(xué)特性發(fā)生改變，如：細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸由內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)，使Ca2+迅速由細(xì)胞內(nèi)向胞外轉(zhuǎn)運(yùn)，從而導(dǎo)致胞內(nèi)Ca2+濃度降低。證實(shí)了β-欖香烯對(duì)HcaF細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用可能與Ca2+的濃度變化有關(guān)，在細(xì)胞凋亡早期質(zhì)膜內(nèi)Ca2+濃度出現(xiàn)先升高再降低的現(xiàn)象。黃富春等[13]報(bào)道β-欖香烯可明顯誘導(dǎo)結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞株凋亡，而且在細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞質(zhì)內(nèi)游離Ca2+濃度明顯的升高，以細(xì)胞凋亡早期尤為明顯。由此可見(jiàn)，β-欖香烯可通過(guò)影響細(xì)胞中Ca2+濃度而發(fā)揮其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。

吉慶明[14]研究發(fā)現(xiàn)欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用，主要與上調(diào)白血病K562細(xì)胞中PDCD5蛋白表達(dá)有關(guān)。丁華等[15]發(fā)現(xiàn)欖香烯對(duì)SHG-44細(xì)胞株亦有明顯的促凋亡作用，其作用機(jī)制是阻滯SHG-44細(xì)胞株的增殖，將其細(xì)胞周期停滯在G2/M期，對(duì)G2/M期的阻滯作用和對(duì)腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用均存在明顯的劑量和時(shí)間依賴(lài)性。欖香烯可顯著降低Bcl-2蛋白和增強(qiáng)Bax蛋白的水平表達(dá)。亦證實(shí)了欖香烯注射液對(duì)腫瘤細(xì)胞具有顯著的抑制增殖作用和誘導(dǎo)其凋亡作用，其作用機(jī)制主要是阻滯細(xì)胞周期中G2/M期的發(fā)生發(fā)展，以及抑制Bcl-2蛋白表達(dá)。

周興芹等[16]證實(shí)了欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖具有明顯抑制作用，將A549 細(xì)胞停滯在G2/M期，并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)增殖抑制作用對(duì)藥物濃度和作用時(shí)間具有一定的依賴(lài)性。趙永順等[17]研究指出欖香烯誘導(dǎo)U87細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制是抑制其賴(lài)以生存的Raf/MEK/ERK通路，從而下調(diào)Raf/MEK/ERK通路下游信號(hào)癌基因Bcl-2表達(dá)，增加Bax/Bcl-2比值，啟動(dòng)線(xiàn)粒體凋亡程序，最終誘導(dǎo)U87細(xì)胞凋亡。

1.3 抑制腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 惡性腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移是其發(fā)生發(fā)展的主要特征之一，轉(zhuǎn)移過(guò)程由一系列連續(xù)和相互關(guān)聯(lián)的步驟組成，包括：腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤脫離并侵入鄰近的健康組織、侵入血液和淋巴管，以及通過(guò)血流循環(huán)(循環(huán)腫瘤細(xì)胞)到達(dá)其他部位或身體組織中，在其特定的組織器官中生長(zhǎng)發(fā)育而形成繼發(fā)性腫瘤。腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移與其運(yùn)動(dòng)、黏附能力密切相關(guān)，腫瘤細(xì)胞只有先突破其周?chē)幕啄ぜ凹?xì)胞外間質(zhì)，才能發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移[18-20]。陳龍邦等[21]研究證實(shí)了β-欖香烯可明顯抑制B16細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其作用機(jī)制通過(guò)抑制B16細(xì)胞對(duì)纖維結(jié)合蛋白和粘連層蛋白兩種基質(zhì)的黏附，從而抑制腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。馮利等[22]研究亦證實(shí)了欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有明顯的抑制作用，通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞基底膜和細(xì)胞外間質(zhì)屏障的保護(hù)，從而抑制其發(fā)生遷徙和轉(zhuǎn)移。鄭瑾等[23]通過(guò)劃痕試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了β-欖香烯可以降低肝癌細(xì)胞的侵襲、遷移能力。Fu X等[24]采用β-欖香烯聯(lián)合紫杉醇治療卵巢癌時(shí)，發(fā)現(xiàn)患者卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和侵襲受到明顯地抑制，發(fā)現(xiàn)β-欖香烯聯(lián)合紫杉醇可明顯誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡、下調(diào)SKOV3細(xì)胞抗凋亡Bcl-2和Bcl-xl基因表達(dá)，上調(diào)促凋亡p53和Apaf1基因表達(dá)，以及在S期阻止SKOV3細(xì)胞周期并下調(diào)CDK1、細(xì)胞周期蛋白-B1、SKOV3細(xì)胞中MDR1、LRP和TS的p27基因表達(dá)和凋亡相關(guān)抗性基因表達(dá)。抑制磷酸化的STAT3和NF-κB表達(dá)，通過(guò)下調(diào)SKOV3細(xì)胞中的STAT-NF-κB信號(hào)通路來(lái)抑制遷移和侵襲。Cai B等[25]研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)β-欖香烯可顯著增加膀胱癌細(xì)胞凋亡數(shù)，還可明顯抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲和遷移，而且β-欖香烯還能上調(diào)PTEN和降低pAKT的表達(dá)而發(fā)揮其抗腫瘤作用。由此可見(jiàn)，β-欖香烯可通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞黏附和運(yùn)動(dòng)，阻止其向遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移而發(fā)揮其抗腫瘤作用。

1.4 抑制腫瘤血管生成 腫瘤的血管生成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的基本要素，大量新生的腫瘤血管作為“運(yùn)輸通道”，為癌細(xì)胞快速增殖提供了豐富的氧氣和養(yǎng)料。腫瘤局部或癌周廣泛存在的新生血管為癌細(xì)胞入血轉(zhuǎn)移提供了“通道”，讓游離癌細(xì)胞得以快速地隨全身血液流動(dòng)向遠(yuǎn)處播散。因此破壞或抑制腫瘤局部的新生血管，切斷腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)所需氧氣及其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是抗血管生成治療的核心基礎(chǔ)。陶磊等[26]研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯可顯著抑制喉癌細(xì)胞株Hep-2增殖和誘導(dǎo)其凋亡，通過(guò)抑制堿性纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表達(dá)，而發(fā)揮其抗腫瘤血管生成作用。進(jìn)一步研究證實(shí)，欖香烯主要是通過(guò)降低真核細(xì)胞翻譯起始因子(eukaryotic initiationg factor, eIF)家族成員eIF4E、eIF4G、bFGF和VEGF的表達(dá)，從而減輕瘤體的體積和重量，同時(shí)其作用與藥物濃度呈正相關(guān)。張志鋒等[27]驗(yàn)證了欖香烯能夠降低腫瘤VEGF的生成和VEGF受體(VEGF-1、VEGF-2)的表達(dá)，從而腫瘤血管生成。另外，周昆等[28]研究表明欖香烯對(duì)腫瘤血管和淋巴管轉(zhuǎn)移的抑制作用，亦是通過(guò)抑制SPC-A-1生長(zhǎng)的同時(shí)降低VEGFR-3和VEGF-C的表達(dá)水平而實(shí)現(xiàn)。因此，欖香烯抑制腫瘤血管生成的作用機(jī)制與其降低eLF家族成員中VEGF和bFGF的蛋白表達(dá)有關(guān)。

1.5 增強(qiáng)腫瘤對(duì)放化療的敏感性 協(xié)同、增效作用放化療在腫瘤治療過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用，但也有其不足之處。在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也殺傷了正常組織細(xì)胞，限制了放化療的治療強(qiáng)度。因此，增強(qiáng)腫瘤對(duì)放化療的敏感性，在不增加毒副作用的基礎(chǔ)上提高放化療療效，是有效治療腫瘤的重要手段之一。

1.5.1 協(xié)同作用 郝立宏等[29]研究發(fā)現(xiàn)欖香烯能明顯增強(qiáng)阿霉素對(duì)CEM/ADM細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，并且與藥物濃度和作用時(shí)間具有一定的依賴(lài)性。王利等[30]研究表明β-欖香烯可降低多藥耐藥相關(guān)蛋白和多藥耐藥基因mdr-1基因編碼的P-糖蛋白的表達(dá)，從而逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性。Li Q Q等[31]發(fā)現(xiàn)β-欖香烯可明顯增強(qiáng)肺癌A549和H460細(xì)胞株對(duì)順鉑的敏感性，從而促使其腫瘤細(xì)胞凋亡。β-欖香烯對(duì)肺癌細(xì)胞株的鉑增敏作用主要與下調(diào)Bcl-2、IAPs蛋白和線(xiàn)粒體介導(dǎo)的內(nèi)在凋亡途徑有關(guān)。高金榮等[32]研究發(fā)現(xiàn)，低劑量欖香烯可誘導(dǎo)人卵巢癌HO-8910和人宮頸癌HeLa細(xì)胞對(duì)紫杉醇的反應(yīng)性，并能顯著增加紫杉醇的細(xì)胞毒作用，尤其是對(duì)紫杉醇極不敏感的HeLa細(xì)胞具有高選擇性。Cao C等[33]通過(guò)研究在A549、A549/ADR和MRC-5細(xì)胞上評(píng)估NLC的體外細(xì)胞毒性(如圖2所示)，發(fā)現(xiàn)任何藥物濃度中A549和A549/ADR細(xì)胞上，DOX/ELE Hyd NLC(阿霉素和β-欖香烯共載，pH敏感的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體)的細(xì)胞毒性均高于DOX/ELE NLC(DOX和ELE共同裝載的NLC不包含pH敏感的Hyd)。DOX / ELE NLCs高于DOX/ELE INJ(DOX和ELE的注射液)；DOX/ELE Hyd NLC比單藥加載的DOX Hyd NLC和ELE Hyd NLC表現(xiàn)出更好的細(xì)胞抑制作用。含DOX的制劑對(duì)A549/ADR細(xì)胞的療效低于A549細(xì)胞，而欖香烯則可以幫助該系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞毒性。當(dāng)0.2﹤Fa(受影響細(xì)胞的分?jǐn)?shù))﹤0.8時(shí)，IC50值﹤1，DOX / ELE Hyd NLC具有顯著協(xié)同作用。由此可知，欖香烯對(duì)化療具有明顯的協(xié)同抗癌作用。

1.5.2 增敏作用 佘軍軍等[34]采用6 Mev X線(xiàn)聯(lián)合β-欖香烯乳劑對(duì)腎動(dòng)脈灌注治療時(shí)，發(fā)現(xiàn)腫瘤的放射增敏效應(yīng)得以明顯增強(qiáng)，亦延緩了腫瘤的生長(zhǎng)和增強(qiáng)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用。進(jìn)一步的研究證實(shí)了β-欖香烯可抑制和延緩腫瘤瘤體的生長(zhǎng)，及其具有明顯的放射增敏作用。欖香烯能增強(qiáng)放療對(duì)DNA分子的損傷作用，主要是通過(guò)Caspase-3途徑顯著下調(diào)Bcl-2表達(dá)，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而致其增敏作用[35]。吳大鵬等[36]研究證實(shí)了β-欖香烯乳具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用，并從蛋白水平上初步推測(cè)了β-欖香烯乳對(duì)腫瘤細(xì)胞的放療增敏機(jī)制。

Jiang H等[37]研究證實(shí)了欖香烯的放射增敏作用與其上調(diào)腫瘤細(xì)胞p53及下調(diào)bcl-2的表達(dá)存在一定的相關(guān)性。張卓[38]研究發(fā)現(xiàn)低濃度的β-欖香烯對(duì)A549細(xì)胞即有一定的放射增敏作用，10 μg/mL和20 μg/mL β-欖香烯放射增敏比SERD0值為(1.54±0.20)和(1.63±0.32)；SERDq值為(1.53±0.15)和(1.75±0.19)，而且放射增敏比和放射增敏作用的強(qiáng)弱均與β-欖香烯的濃度呈正相關(guān)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)β-欖香烯乳聯(lián)合放療對(duì)A549細(xì)胞周期的分布具有明顯的影響，即阻滯G2/M期的發(fā)生和發(fā)展，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。G2/M期細(xì)胞比率和凋亡率亦與β-欖香烯的濃度呈正相關(guān)。證實(shí)了β-欖香烯對(duì)放療的增敏作用主要是通過(guò)上調(diào)A549細(xì)胞p53和下調(diào)Bcl-2的基因表達(dá)而實(shí)現(xiàn)。研究表明，β-欖香烯乳聯(lián)合放療時(shí)，明顯抑制了DNA雙鏈損傷修復(fù)基因Ku70和DNA-PKcs的表達(dá)，進(jìn)而增強(qiáng)A549細(xì)胞對(duì)放療的敏感性。亦發(fā)現(xiàn)A549細(xì)胞DNA-PKcs、Ku70基因表達(dá)與p53表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，而與Bcl-2表達(dá)顯著正相關(guān)。由此可見(jiàn)，β-欖香烯可通過(guò)對(duì)DNA雙鏈損傷修復(fù)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡途徑的影響，而明顯增強(qiáng)其放射敏感性和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。

圖2 對(duì)A549 (A)、A549/ADR細(xì)胞(B)和MRC-5細(xì)胞(C)進(jìn)行NLCs體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)(摘自文獻(xiàn)[33])

1.6 逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥 腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性是現(xiàn)今化療失敗的最主要原因之一，防止多藥耐藥(MDR)的發(fā)生，或逆轉(zhuǎn)多藥耐藥是目前提高化療療效的重要途徑之一。胡軍等[39]研究發(fā)現(xiàn)β-欖香烯可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對(duì)阿霉素耐藥性發(fā)生逆轉(zhuǎn)，從而增強(qiáng)該耐藥細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性。Li X等[40]研究發(fā)現(xiàn)β-欖香烯對(duì)人卵巢癌細(xì)胞中順鉑耐藥細(xì)胞株的增生具有明顯的抑制作用，而且對(duì)人卵巢癌細(xì)胞具有高度的選擇性；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)β-欖香烯可明顯增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞G2-M期的阻滯作用，從而增強(qiáng)順鉑對(duì)腫瘤耐鉑藥細(xì)胞株的增殖抑制作用。郝立宏等[41]發(fā)現(xiàn)β-欖香烯主要是通過(guò)抑制Bcl-2的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)其逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的MDR和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用，同時(shí)β-欖香烯又可顯著降低ADM對(duì)K562/ADM細(xì)胞的IC50。欖香烯能逆轉(zhuǎn)K562/ADM細(xì)胞的MDR，可能是通過(guò)下調(diào)K562/ADM細(xì)胞的P-gp的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)[42]。此外，楊?lèi)?ài)珍等[43]發(fā)現(xiàn)人肺腺癌細(xì)胞株SPC-A1中對(duì)紫杉醇、多西他賽、長(zhǎng)春瑞濱和阿霉素均高度耐藥的細(xì)胞亞株SPC-A1/Tax 01，對(duì)欖香烯具有高度的敏感性，說(shuō)明欖香烯對(duì)紫杉醇耐藥的腫瘤細(xì)胞仍具有明顯的抑殺作用。陳春美等[44]研究發(fā)現(xiàn)欖香烯對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U251/ADM細(xì)胞耐藥性具有逆轉(zhuǎn)作用，逆轉(zhuǎn)機(jī)制可能與其抑制耐藥基因mdr-1、MRP和GST-π的表達(dá)具有一定的相關(guān)性。Zhao Y F等[45]研究發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對(duì)分子靶向藥吉非替尼的敏感性與p21蛋白的高表達(dá)有關(guān)。腫瘤細(xì)胞對(duì)吉非替尼耐藥時(shí)，明顯降低了PC9-ZD中p21的表達(dá)，而聯(lián)用β-欖香烯可上調(diào)PC9-ZD中p21的表達(dá)，進(jìn)而逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)吉非替尼的耐藥性。Deng M等[46]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)β-欖香烯能調(diào)節(jié)MMP-2/9表達(dá)和逆轉(zhuǎn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，還可通過(guò)上調(diào)Cbl-b的表達(dá)，從而抑制EGFR-ERK/AKT通路，進(jìn)而調(diào)節(jié)MMP-2/9的表達(dá)，同時(shí)β-欖香烯亦能通過(guò)抑制miR-1323表達(dá)而上調(diào)Cbl-b的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)β-欖香烯處理后的裸鼠肺中轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)節(jié)的數(shù)量顯著減少，證實(shí)了β-欖香烯可通過(guò)調(diào)節(jié)miR-1323/Cbl-b/EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)軸來(lái)抑制MDR胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。由此可見(jiàn)，β-欖香烯對(duì)MDR癌細(xì)胞具有顯著的抗轉(zhuǎn)移作用。

1.7 激活抗腫瘤免疫、增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能 機(jī)體免疫系統(tǒng)具有識(shí)別和通過(guò)免疫機(jī)制特異地清除“非己”細(xì)胞，抵御腫瘤發(fā)生發(fā)展的特性。腫瘤細(xì)胞可通過(guò)多種機(jī)制逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的識(shí)別和攻擊，在機(jī)體內(nèi)得以迅速地生存和發(fā)展，形成腫瘤。因此，通過(guò)激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答和增強(qiáng)細(xì)胞的免疫原性，是有效治療腫瘤的途徑之一。肖立森等[47]通過(guò)MTT法檢測(cè)和比較了β-欖香烯與5-FU、ADM、ADD、VCR、MTX、Vp-16、MMC等7種抗癌藥物的敏感性，發(fā)現(xiàn)β-欖香烯對(duì)胰頭癌、乳腺癌、食管癌、胃癌及大腸癌的體外細(xì)胞毒性與上述抗癌藥物相似，證實(shí)了欖香烯可阻滯腫瘤細(xì)胞的有絲分裂，以及具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)代謝的作用，從而加速腫瘤細(xì)胞的凋亡。吳偉忠等[48]研究發(fā)現(xiàn)β-欖香烯可增強(qiáng)H22細(xì)胞的免疫原性，同時(shí)能夠激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫，其抗腫瘤效應(yīng)與腫瘤細(xì)胞膜上HSP70蛋白的表達(dá)介導(dǎo)有關(guān)。官成濃等[49]研究發(fā)現(xiàn)欖香烯聯(lián)合化療藥物治療擴(kuò)散期胃癌時(shí)患者血常規(guī)和生化水平無(wú)明顯變化，說(shuō)明欖香烯對(duì)機(jī)體的免疫功能具有很好地保護(hù)作用，而且在機(jī)體抵抗腫瘤和抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用。張思奮等[50]研究發(fā)現(xiàn)欖香烯可顯著提高經(jīng)欖香烯灌注介入治療的直腸癌患者外周T細(xì)胞亞群CD3、CD4及CD4/CD8比值。從而證實(shí)了欖香烯有提高患者免疫功能的作用。姚淑娟等[51]研究發(fā)現(xiàn)欖香烯可以促進(jìn)化療后荷瘤C57BL/6小鼠機(jī)體免疫功能的恢復(fù)和提高T細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力，以促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生白細(xì)胞介素-2(IL-2)和自然殺傷細(xì)胞(NK)，從而激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫療效。由此可見(jiàn)，欖香烯是一種良好的腫瘤疫苗。

1.8 欖香烯注射液在線(xiàn)粒體途徑下的作用研究 線(xiàn)粒體是生物體細(xì)胞代謝和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的重要場(chǎng)所，是對(duì)各種損傷最為敏感的細(xì)胞器之一，而腫瘤細(xì)胞的線(xiàn)粒體功能障礙是其重要的特征之一?？梢?jiàn)，線(xiàn)粒體的功能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著決定性的作用。王茜莎等[52]研究發(fā)現(xiàn)δ-欖香烯能升高線(xiàn)粒體內(nèi)的Bax蛋白水平，促使線(xiàn)粒體內(nèi)cyto C和AIF釋放入胞質(zhì)，進(jìn)而導(dǎo)致線(xiàn)粒體膜電位的降低。姚成才等[53]研究指出不同濃度欖香烯均可明顯抑制A549/DDP細(xì)胞株的生長(zhǎng)，并具有一定的濃度和時(shí)間依賴(lài)性，同時(shí)亦能逆轉(zhuǎn)A549/DDP細(xì)胞株對(duì)鉑的耐藥性和提高腫瘤細(xì)胞對(duì)鉑的敏感性。欖香烯與順鉑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，發(fā)現(xiàn)欖香烯能夠明顯降低A549/DDP細(xì)胞株的線(xiàn)粒體膜電位，亦能上調(diào)胞質(zhì)中Cyto C、Caspase-3、Bad的蛋白表達(dá)，以及下調(diào) Pro-caspase-3、Bcl-2的蛋白表達(dá)，增加ROS濃度，降低GSH/(GSSG+GSH)比值。進(jìn)一步研究證實(shí)，在40 μg/mL濃度欖香烯中加入線(xiàn)粒體PTP抑制劑Cyclos-Porine A和Caspase-3抑制劑DEVD-CHO時(shí)，發(fā)現(xiàn)Caspase-3表達(dá)減低。Cyclos-Porine A能阻止PTP的通透性，DEVD-CHO能抑制Caspase-3的激活，從而抑制A549/DDP細(xì)胞凋亡。表明Cyto C釋放、Caspase激活及Bcl-2蛋白低表達(dá)和Bad高表達(dá)可促使欖香烯逆轉(zhuǎn)A549/DDP細(xì)胞的耐藥性。由此可見(jiàn)，欖香烯逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性機(jī)制，可能與其損傷線(xiàn)粒體膜和誘導(dǎo)線(xiàn)粒體凋亡路徑有關(guān)。

史亞博等[54]研究指出在線(xiàn)粒體相關(guān)途徑下欖香烯對(duì)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及遷徙轉(zhuǎn)移、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)治療敏感性及逆轉(zhuǎn)耐藥效應(yīng)具有協(xié)同作用，而且都受到Survivin表達(dá)的影響。由此揣測(cè)，Survivin作為共同效應(yīng)的作用靶點(diǎn)同時(shí)可能具有相應(yīng)的特異性，Survivin對(duì)Cyto C、Caspase、線(xiàn)粒體膜電位亦可能有一定程度的影響。Survivin蛋白僅僅表達(dá)于腫瘤和胚胎組織，欖香烯對(duì)Survivin的抑制作用是否為其線(xiàn)粒體相關(guān)途徑下抗腫瘤效應(yīng)與其他藥物的不同點(diǎn)尚需進(jìn)一步明確。

1.9 欖香烯注射液作用的基因靶點(diǎn)研究 細(xì)胞發(fā)生癌變主要是由于細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的失調(diào)而導(dǎo)致了細(xì)胞的無(wú)限增殖，腫瘤細(xì)胞內(nèi)異常信號(hào)系統(tǒng)靶點(diǎn)的特異性研究，為腫瘤的治療提供了又一途徑。鄭京勝等[55]通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)195個(gè)欖香烯注射液靶標(biāo)基因與血栓癥疾病靶標(biāo)基因的交集基因，欖香烯注射液的靶點(diǎn)信息集主要富集在胃、肺結(jié)、直腸、卵巢和乳腺等組織中。欖香烯注射液交集靶基因的生物功能主要包括鉀離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、類(lèi)固醇激素介導(dǎo)的信號(hào)通路、蛋白質(zhì)同源寡聚化及調(diào)節(jié)心房肌細(xì)胞膜復(fù)極化等，而交集靶基因主要作用于不對(duì)稱(chēng)突觸、軸突末端和GABA-A受體復(fù)合物等。交集靶基因的分子功能主要是RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄因子活性、配體激活的序列特異性DNA結(jié)合和類(lèi)固醇激素受體活性等。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)欖香烯注射液的靶點(diǎn)主要富集在Caspase-3、Bcl-2和CDC42等信號(hào)通路，這些信號(hào)通路均已被證明參與腫瘤細(xì)胞的直接抑殺和誘導(dǎo)凋亡過(guò)程。欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接抑殺和誘導(dǎo)凋亡機(jī)制主要與Bcl家族成員有關(guān)，即下調(diào)Bcl-2、Bcl-X(L)等抗凋亡成員，上調(diào)Bax、Bak等促凋亡成員以及激活Caspase酶族，其中Caspase-3為欖香烯抗腫瘤過(guò)程中最為關(guān)鍵的Bcl成員。

2 改善患者生活質(zhì)量

欖香烯輔助放化療治療惡性腫瘤具有顯著的療效，可有效降低或減弱放化療引起的毒副反應(yīng)，明顯延長(zhǎng)患者的生存期，從而提高患者的生活質(zhì)量[56]。此外，欖香烯可參與到機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中，增強(qiáng)細(xì)胞的免疫功能和機(jī)體的抗腫瘤效果，同時(shí)還能降低或減少放化療引起的骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)及神經(jīng)毒性等毒副反應(yīng)的發(fā)生率，使患者的生活質(zhì)量得以大大的提高或改善。田鋒奇等[57]研究證實(shí)了欖香烯對(duì)腫瘤腦轉(zhuǎn)移患者具有非常顯著的輔助治療效果，有效改善化療所致的白細(xì)胞減少，降低感染的發(fā)生率，從而提高腫瘤患者的生活質(zhì)量。Jiang X等[58]通過(guò)系統(tǒng)評(píng)價(jià)和薈萃分析欖香烯注射液聯(lián)合放療在肺癌腦轉(zhuǎn)移患者的治療中，亦證實(shí)了欖香烯注射液能提高放療的治療效果，并且能顯著降低患者骨髓抑制、白細(xì)胞減少的發(fā)生率和減輕患者放療時(shí)引起的不良反應(yīng)。Yao Y等[59]通過(guò)meta分析發(fā)現(xiàn)，動(dòng)脈灌注欖香烯可以明顯改善TACE患者的ORR和顯著提高其生存期，欖香烯還可明顯改善TACE患者不良反應(yīng)的發(fā)生率和強(qiáng)度，如骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)(腹痛、惡心和嘔吐等)、發(fā)燒或肝功能障礙(轉(zhuǎn)氨酶升高)等。由此可見(jiàn)，欖香烯可增強(qiáng)放化療的治療效果，顯著降低或減弱放化療引起的毒副反應(yīng)，明顯延長(zhǎng)患者的生存期，從而提高患者的生活質(zhì)量。

3 討論

欖香烯注射液是從姜科植物溫郁金和溫莪術(shù)中提取的一種具有抗腫瘤活性的化合物，其中醫(yī)、中藥學(xué)應(yīng)用可見(jiàn)于《藥性論》《本草備要》《本草經(jīng)讀》等著作。莪術(shù)和郁金具有活血行氣、開(kāi)郁止痛、涼血清心和利膽退黃之功效，可用于破血消癥以及治療瘀血經(jīng)閉、食積腹脹、癥瘕痞塊等病癥，為臨床常用的活血化瘀類(lèi)藥物。此外，郁金屬苦寒之藥，而腫瘤多屬陽(yáng)，因此郁金不單具有清熱解毒之功效，還能專(zhuān)攻抗癌，引諸藥直達(dá)病所，以使攻伐消散之品專(zhuān)于病所而不傷正。從莪術(shù)和郁金中，可提取出欖香烯以制備抗腫瘤藥物。1994年，我國(guó)上市了自主研發(fā)的欖香烯注射液，其具有療效確切、副作用輕微等特點(diǎn)，屬于二類(lèi)非細(xì)胞毒性抗腫瘤新藥。欖香烯注射液對(duì)腫瘤細(xì)胞具有直接或破壞作用，并誘導(dǎo)其凋亡，而且還具有抑制腫瘤血管生成、增強(qiáng)機(jī)體自身的免疫功能以及促進(jìn)機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫原性等作用，亦能增強(qiáng)惡性腫瘤對(duì)放化療的敏感性，更能明顯改善和提高患者的生活質(zhì)量?，F(xiàn)今臨床中使用的抗腫瘤藥物均有不同程度的細(xì)胞毒性作用，即在抑殺腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也能殺傷或損傷機(jī)體的某些正常的組織細(xì)胞或功能器官，尤其是殺傷人體中生長(zhǎng)發(fā)育旺盛的血液、淋巴組織細(xì)胞等，嚴(yán)重破壞了機(jī)體的免疫防御系統(tǒng)，從而使化療藥物的劑量或使用受到一定的限制，以致腫瘤迅速地發(fā)生和發(fā)展。而欖香烯注射液的問(wèn)世，因其低毒、價(jià)廉且高效等優(yōu)點(diǎn)，為腫瘤的防治提供了一種全新的選擇。

現(xiàn)今針對(duì)欖香烯注射液的抗腫瘤、抗癌效果，研究者們進(jìn)行了大量的臨床試驗(yàn)，對(duì)欖香烯藥理、藥效上的研究越來(lái)越精細(xì)，認(rèn)識(shí)也越來(lái)越深入。但是欖香烯抗腫瘤作用的某些機(jī)制尚不甚明確，如在蛋白水平及線(xiàn)粒體等方向上還未能明確其相關(guān)作用機(jī)制，蛋白水平和線(xiàn)粒體等方向上具體的作用靶點(diǎn)和基因的相關(guān)研究亦較少。而且欖香烯注射液與免疫或化療藥物聯(lián)合應(yīng)用抗腫瘤治療時(shí)的最佳搭配方案仍需要更進(jìn)一步的深入研究。今后對(duì)于欖香烯注射液在分子水平和線(xiàn)粒體等方向上關(guān)于其作用靶點(diǎn)和相關(guān)基因?qū)W，以及欖香烯的最佳配伍方案的深入研究，將有助于為惡性腫瘤的治療提供更為全面的理論依據(jù)，同時(shí)亦能為腫瘤患者的治療制定出相應(yīng)的最佳方案。