馬 婷， 寧德魯， 李勇杰， 耿樹香， 張艷麗

(1.云南省林業(yè)和草原科學院 經(jīng)濟林木研究所，昆明 650201； 2.高原木本油料種質(zhì)創(chuàng)新與利用技術國家地方聯(lián)合工程研究中心，昆明 650201)

油橄欖 (OleaeuropaeaL.)為木犀科(Oleaceae)木犀欖屬(OLea)小喬木，與油茶、油棕、椰子并稱為世界四大木本油料植物[1-2]。橄欖油是以油橄欖鮮果為原料，采用冷榨工藝提取的產(chǎn)品，其不經(jīng)加熱和化學處理，保留了天然營養(yǎng)成分[3]。橄欖油中富含多酚、黃酮、維生素、角鯊烯及不飽和脂肪酸，具有調(diào)節(jié)膽固醇、抗氧化、預防癌癥、美容及調(diào)整人體生理機能的作用，享有“液體黃金”“植物油皇后”等美譽[4]。

我國自1964 年開始引種油橄欖，現(xiàn)已發(fā)展到12個省市37個地州67個市縣，總種植面積達8萬hm2，成為適生區(qū)的新型特色產(chǎn)業(yè)。但目前我國橄欖油產(chǎn)量僅為消費總量的10%左右，自主產(chǎn)能遠遠不足[5]。同時，油橄欖原產(chǎn)于地中海冬春多雨、夏季高溫干燥區(qū)域，喜中性偏堿土壤，而我國油橄欖引種區(qū)冬春干旱、夏季高溫多雨，且多為酸性紅壤，引進油橄欖品種適應性、穩(wěn)定性和豐產(chǎn)性均存在一定問題[6]。因此，培育新品種以增強適應性，是我國油橄欖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一項重要措施[7-8]。云南省林業(yè)科學院自20世紀70年代開展鄉(xiāng)土近緣種與油橄欖品種的雜交育種工作，選育出云雜1號、云雜2號和云雜3號3個雜交品種，其中云雜3號被定名為金葉佛樨欖，并于2014年獲園藝植物新品種注冊登記[9-10]。

油橄欖果實成熟期因品種和氣候條件而不同，采收時間的確定主要根據(jù)果實的成熟度。國內(nèi)外已有較多關于油橄欖果實成熟度與果實表型性狀、含油率及油質(zhì)的相關研究，并在各種植區(qū)形成適宜的采收時間[11-12]，但目前尚缺乏對自主雜交品種的相關研究。本文以云南省林業(yè)和草原科學院雜交選育的云雜1號、云雜2號和云雜3號3個品種為研究對象，通過不同采收時間分析不同品種油橄欖果實表型性狀、含油率以及油質(zhì)的變化，為明確雜交品種的利用方向以及確定最佳采收期提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

油橄欖果實：供試樣品在2018年6月初采集1次，7—9月期間每半月采集1次，10月末采集1次，地點位于云南省楚雄州永仁縣糯達油橄欖種質(zhì)資源圃(北緯26°2′26″，東經(jīng)101°38′50″)，品種為云南省林業(yè)和草原科學院雜交選育的云雜1號、云雜2號和云雜3號，采樣樹均生長良好、無病蟲害，果實樣品選取樹冠中上部東、南、西、北4 個方向生長正常的果實，采摘后混合。

石油醚、三氯甲烷、冰乙酸、甲醇、碘化鉀、氫氧化鈉、硫代硫酸鈉、無水硫酸鈉、95%乙醇、可溶性淀粉，均為分析純。

游標卡尺；HX2002Z電子天平；GZX-9240MBE電熱鼓風干燥箱、HHS電熱恒溫水浴鍋，上海博迅公司；7890B5977A氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，安捷倫公司；FOSS Soxtec 2008全自動脂肪測定儀(丹麥)；ABENCOR 橄欖分析系統(tǒng)，西班牙MC2 Ingenieria 公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 果實表型性狀測定

對不同時間采集的果實樣品，根據(jù)品種隨機取10顆，使用游標卡尺分別測量縱、橫徑，采用電子天平稱取單果質(zhì)量及果核質(zhì)量，計算果形指數(shù)(果實縱徑與果實橫徑的比值)和果肉率(單果質(zhì)量與果核質(zhì)量的差占單果質(zhì)量的百分比)。

1.2.2 果實成熟度指數(shù)測定

從果實樣品中隨機抽取100顆，根據(jù)油橄欖果實成熟時果皮和果肉的顏色變化，將油橄欖成熟度劃分為8個類別(0，果皮呈深綠色；1，果皮呈黃綠色；2，不到1/2的果皮轉為紅色；3，超過1/2的果皮轉為紅色；4，果皮轉為黑色，但果肉為白色；5，不到1/2的果肉轉為紅色；6，超過1/2的果肉轉為紅色；7，果肉全部轉為紅色)[13]。按照不同類別果實數(shù)量，計算果實成熟度指數(shù)(果實成熟度指數(shù)=∑(成熟度類別×果實個數(shù))/100)。

1.2.3 果實含水量測定

采用烘干稱重法。將200 g左右油橄欖鮮果實置于75 ℃烘箱中烘干至恒重，根據(jù)果實烘干前后的質(zhì)量差，計算果實含水量，每個樣品重復3次。

1.2.4 果實含油率測定

根據(jù)張東等[14]的方法測定干基含油率并換算為鮮果含油率。

1.2.5 橄欖油提取

準確稱取800 g油橄欖果實，放入粉碎機中進行粉碎，粉碎完成后將果肉和果核完全混合均勻。稱取700 g混合物于融合罐中，放入融合攪拌器在25℃水浴條件下融合20 min，加入300 mL沸水繼續(xù)融合10 min。將融合后的混合物于3 000 r/min下離心60 s，移取分離的油相和水相于500 mL量筒中，再加入100 mL沸水沖洗離心后的混合物，然后重復離心步驟，收集離心后的油相和水相于上述量筒中，靜置30 min，移取油相于收集瓶中，密封并低溫保存。

1.2.6 橄欖油酸值和過氧化值測定

分別參照GB 5009.229—2016、GB 5009.227—2016測定橄欖油酸值及過氧化值，每個樣品重復測定3次。

1.2.7 橄欖油脂肪酸組成與含量分析

參考文獻[15]的方法對橄欖油進行甲酯化后采用GC-MS分析脂肪酸組成，按峰面積歸一化法定量。測定2個平行樣并取其平均值。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2010和SPSS 24.0軟件進行統(tǒng)計和分析。

2 結果與分析

2.1 不同采收時間3個雜交油橄欖品種果實表型性狀的變化

2.1.1 果實大小

不同油橄欖品種果實橫徑、縱徑及果形指數(shù)的變化見圖1。

注：云雜1號9月末果實已經(jīng)成熟并開始掉落，至10月已無果可采；同一品種不同字母表示存在顯著差異(P<0.05)。下同

從圖1可以看出，3個品種橫徑、縱徑及果形指數(shù)變化趨勢基本一致，但不同品種之間因成熟期不一致有所差異。從橫徑來看，云雜1號在6月初到8月末生長較快，之后生長趨于平緩；云雜2號和云雜3號前期生長較快，9月中旬后生長開始逐漸放緩。3個品種縱徑在整個觀測期內(nèi)生長均較為緩慢，云雜1號、云雜2號和云雜3號分別從8月末、9月末和9月中旬起縱徑生長穩(wěn)定、差異不顯著。云雜1號橫、縱徑在9月末達最大值，分別為11.25 mm和15.94 mm，9月末果實開始掉落至10月已無果可采；云雜2號在9月末橫、縱徑達最大值，分別為11.89 mm和16.49 mm，至10月末時橫、縱徑有一定程度縮?。辉齐s3號在10月末橫、縱徑達到最大值，分別為11.71 mm和16.00 mm。橫、縱徑總體呈快-慢-穩(wěn)定的變化趨勢，與楊叢華等[16]對豆果和柯基兩個油橄欖品種的研究結果吻合。3個品種果形指數(shù)的變化趨勢與橫、縱徑相反，呈逐步下降的趨勢，6月初果形指數(shù)最大，在1.74～1.80之間，到8月末至9月初后果形趨于平穩(wěn)，果形指數(shù)在1.4左右，為長圓形果實。

2.1.2 單果質(zhì)量及果肉率

不同油橄欖品種果實單果質(zhì)量及果肉率的變化見表1。從表1可以看出：3 個品種單果質(zhì)量隨著采收時間的延遲上升，云雜1號和云雜2號分別于9月中旬和9月末到達最高點后有一定程度縮??；云雜1號、云雜2號和云雜3號分別在9月中旬、9月末和10月末達到單果質(zhì)量的最大值，分別為1.25、1.41 g和1.41 g，均屬于小果形品種。果肉率與單果質(zhì)量相似，總體隨采收時間的延長呈上升趨勢，云雜1號、云雜2號和云雜3號的果肉率最大值分別出現(xiàn)在9月末、10月末和10月末，分別為68.82%、71.92%和71.94%。

表1 不同油橄欖品種果實單果質(zhì)量及果肉率的變化

在6月初到7月初3個品種果實成熟度為0，故測定了從7月31日果實開始轉色起的成熟度指數(shù)情況，結果見表2。由表2可以看出，7月31日云雜1號成熟度指數(shù)為0，而云雜2號和云雜3號有少部分果皮開始轉色，成熟度指數(shù)分別為0.15和0.18。隨著時間的推移，成熟度指數(shù)逐步升高，云雜1號于9月末達最大值5.52，云雜2號和云雜3號則在10月末達最大值，分別為5.40和4.56。

表2 不同油橄欖品種果實成熟度指數(shù)的變化

2.3 不同采收時間3個雜交油橄欖品種果實含水量及含油率的變化

3個油橄欖品種鮮果含水量及含油率的變化見圖2。

圖2 不同油橄欖品種鮮果含水量及含油率的變化

由圖2可以看出，3個品種鮮果含水量及含油率的變化趨勢基本一致，隨著果實的不斷成熟，含水量逐步下降而含油率逐漸上升。不同采收時間鮮果含水量以6月初和7月初差異最為顯著，1個月間含水量差值在12.76%～14.49%之間；在鮮果含油率方面，除云雜2號在9月18日和9月28日采收含油率差異不顯著外，3 個品種在其余采收時間均有顯著差異，與Piravi-Vanak等[17]的研究結果一致。至9月末，云雜1號含水量達最小值51.53%，含油率達最大值16.10%；至10月末，云雜2號、云雜3號含水量分別達最小值50.01%和50.76%，含油率分別達最大值21.61%和19.97%。其中，云雜2號和云雜3號鮮果含油率在18%以上，已達到林木品種審(認)定中對油用品種的指標要求，可作為油用品種發(fā)展。

2.4 不同采收時間3個雜交油橄欖品種油質(zhì)的變化

2.4.1 酸值和過氧化值

從8月中旬果實明顯開始轉色起，對不同時間采收的油橄欖果實提油后分析橄欖油的酸值和過氧化值，結果見表3。由表3可以看出：從8月中旬到10月末，3個品種橄欖油的酸值(KOH)隨采收時間浮動變化，但均在最終采收時間達到最大值，觀測期內(nèi)3個品種橄欖油的最大酸值(KOH)在0.24～0.32 mg/g之間；過氧化值則隨著采收時間的變化，總體有一定的升高，且不同采收時間整體差異顯著。總體而言，在不同的采收時間3個品種橄欖油的酸值(KOH)均小于1.6 mg/g，過氧化值均小于10 mmol/kg，符合GB/T 23347—2009《橄欖油、油橄欖果渣油》中特級初榨橄欖油的質(zhì)量指標。

表3 不同品種橄欖油酸值及過氧化值的變化

2.4.2 脂肪酸組成

不同品種橄欖油主要脂肪酸組成的變化及變異系數(shù)分別見表4和表5。由表4可以看出，云雜1號、云雜2號和云雜3號橄欖油中脂肪酸組成基本一致，主要為油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞麻酸和十六碳烯酸，占總量的98%以上，與閆輝強[18]、趙夢炯[19]等的研究結果基本一致。橄欖油作為高油酸型的植物油在3個品種中也得到充分體現(xiàn)，云雜1號、云雜2號和云雜3號的平均油酸含量分別為65.64%、69.34%和70.41%；亞油酸作為植物油中最豐富的多不飽和脂肪酸，是人體所需的必需脂肪酸[20-21]，在3個品種橄欖油中平均含量分別為15.32%、12.91%和11.98%；棕櫚酸在3個品種橄欖油中平均含量分別為14.09%、13.22%和13.03%，硬脂酸平均含量在2.03%～2.12%之間，十六碳烯酸平均含量在0.55%～1.06%之間，亞麻酸平均含量在0.73%～0.76%之間。從油酸含量的變化來看，云雜1號在8月中旬油酸含量最高，隨著采收時間的推后逐漸下降；而云雜2號和云雜3號表現(xiàn)出相同的趨勢，即在8月中旬至8月末小幅度升高之后隨著采收時間的推后逐步下降。亞油酸含量的變化趨勢則總體上隨著采收時間的推后逐漸上升。棕櫚酸含量在整個過程中變化不明顯，總體上為小幅波動性變化。亞麻酸含量總體呈下降趨勢，而硬脂酸和十六碳烯酸含量則處于波動性變化。

從表4和表5可以看出，3個品種橄欖油中平均SFA含量在15.14%～16.11%之間，不同采收時間其變異系數(shù)范圍為0.61%～2.40%，說明SFA含量相對穩(wěn)定。MUFA和PUFA總含量在82%以上，其中MUFA包括油酸和十六碳烯酸，總體隨采收時間的推后呈逐步下降的趨勢，不同采收時間變異系數(shù)在2.38%～3.47%之間，含量相對穩(wěn)定；PUFA包括亞麻酸和亞油酸，3個品種隨采收時間的推后其含量總體上升，變異系數(shù)在13.68%～15.10%之間，說明隨采收時間變化較大。不同采收時間油酸/亞油酸及MUFA/PUFA變異系數(shù)較大，分別在17.84%～24.42% 和15.89%～21.51%之間，隨著采收時間的推后總體呈下降趨勢，這一結果與楊倩雨[22]、Yorulmaz[23]等的分析結果相一致。

表4 不同品種橄欖油主要脂肪酸組成的變化

表5 不同采收時間3個品種橄欖油主要脂肪酸組成的變異系數(shù) %

2.5.1 相關性分析

采用3個油橄欖品種不同采收時間的果實各項指標，計算皮爾遜相關系數(shù)，結果見表6。

由表6可以看出，大多數(shù)指標間均有較強的相關性。其中：橫徑與縱徑、單果質(zhì)量、果肉率、成熟度指數(shù)、含油率和PUFA含量呈極顯著正相關，與果形指數(shù)、含水量呈極顯著負相關，與MUFA含量呈顯著負相關；縱徑與單果質(zhì)量、果肉率、成熟度指數(shù)、含油率呈極顯著正相關，與果形指數(shù)、含水量呈極顯著負相關，與PUFA含量呈顯著正相關；果形指數(shù)與單果質(zhì)量、果肉率、成熟度指數(shù)、含油率呈極顯著負相關，與含水量呈極顯著正相關，與MUFA含量和PUFA含量分別呈顯著正相關和顯著負相關；單果質(zhì)量與果肉率、成熟度指數(shù)、含油率呈極顯著正相關，與含水量呈極顯著負相關，與PUFA含量呈顯著正相關；果肉率與成熟度指數(shù)、含油率呈極顯著正相關，與含水量呈極顯著負相關，與MUFA含量和PUFA含量分別呈顯著負相關和顯著正相關；成熟度指數(shù)與含油率和PUFA含量呈極顯著正相關，與MUFA含量呈極顯著負相關，與含水量呈顯著負相關；含水量與含油率呈極顯著負相關，與SFA含量呈顯著正相關；含油率與PUFA含量呈顯著正相關；MUFA含量與PUFA含量呈極顯著負相關。

2.5.2 主成分分析

對影響油橄欖果實品質(zhì)的果形指數(shù)、單果質(zhì)量、果肉率、成熟度指數(shù)、含油率、油酸含量、MUFA含量和PUFA含量8個指標進行主成分分析，得到主成分個數(shù)及貢獻率如表7所示。由表7可見，第1主成分方差貢獻率為78.337%，第2主成分方差貢獻率為16.716%，前兩個主成分累積方差貢獻率達到95.053%，說明這2個主成分能夠代表8個指標的絕大部分信息，故提取前2個主成分進行綜合分析。

表7 主成分分析的特征值及貢獻率

計算初始因子載荷矩陣，結果見表8。由表8可知：在第1個主成分上，果肉率、成熟度指數(shù)和PUFA含量均有較高的載荷，主要體現(xiàn)果實品質(zhì)及油中多不飽和脂肪酸情況；在第2主成分上油酸含量和MUFA含量有較高的載荷，主要體現(xiàn)果實的單不飽和脂肪酸組成。

表8 初始因子載荷矩陣

根據(jù)前2個主成分的特征值、貢獻率及各指標的載荷因子，計算得到相應的特征向量，并得到2個主成分的表達式，以2個主成分所對應的特征值占提取主成分總特征值的比例為權重，計算得到主成分綜合模型，根據(jù)主成分綜合模型計算不同采收時間云雜1號、云雜2號和云雜3號的綜合得分，結果見表9。

表9 不同油橄欖品種在不同采收時間的主成分綜合得分

分值越高說明綜合品質(zhì)最佳，為最適宜的采收時間。由表9可見，3 個品種不同采收時間綜合得分如下：云雜1號，綜合得分由高到低的采收時間排序為9月28日>9月18日>8月30日>8月15日；云雜2號和云雜3號，綜合得分由高到低的采收時間排序均為10月25日>9月28日>9月18日>8月30日>8月15日。因此，云雜1號選擇在9月末采收，云雜2號和云雜3號在10月末采收較為適宜。此外，各品種最佳采收期綜合得分由高到低依次為云雜2號>云雜3號>云雜1號。

3 結 論

從6月初至10月末，云雜1號、云雜2號和云雜3號果實不斷成熟，橫徑、縱徑、單果質(zhì)量、果肉率、成熟度指數(shù)、含油率總體呈上升趨勢，果形指數(shù)和含水量變化趨勢與之相反。不同采收時間各指標差異顯著，9月末到10月末，3 個品種果實生長趨于穩(wěn)定，成熟度指數(shù)為4.56～5.52，果形指數(shù)在1.4左右，單果質(zhì)量為1.25～1.41 g，果肉率為68.82%～71.94%，鮮果含水量為50.01%～51.53%、含油率16.10%～21.61%(上述指標均為3個品種在采收期的最大值)。且整個觀測期內(nèi)3個品種的酸值和過氧化值均符合特級初榨橄欖油的標準。從油質(zhì)來看，3個品種脂肪酸組成中油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞麻酸和十六碳烯酸占總量的98%以上，其中不飽和脂肪酸含量占82%以上。含油率作為評價油橄欖質(zhì)量最重要的指標，與橫徑、縱徑、單果質(zhì)量、果肉率、成熟度指數(shù)呈極顯著正相關，與果形指數(shù)及含水量呈極顯著負相關，與PUFA含量呈顯著正相關。

對油橄欖果實的8個指標進行主成分分析并根據(jù)綜合得分排序，得出：云雜1號最佳采收時間為9月末，云雜2號、云雜3號在10月末采收較為適宜。綜合分析分值由高到低依次為云雜2號>云雜3號>云雜1號，其中云雜2號和云雜3號含油率均大于18%，可作為優(yōu)良油用品種發(fā)展。