李春艷，高 翀，龐懷林

(1.南通泰禾化工股份有限公司，南通 226407；2.上海泰禾化工有限公司，上海 201615)

鄰羥基苯乙酸是一種有著廣泛用途的精細(xì)化工中間體，化學(xué)名稱為2-(2-羥基苯基)乙酸，分子式為C8H8O3，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。其被廣泛用于嘧菌酯、苯并呋喃酮等藥物及中間體的合成[1-3]。

圖1 鄰羥基苯乙酸結(jié)構(gòu)式

嘧菌酯屬高效、廣譜的甲氧丙烯酸酯類殺菌劑，其幾乎對(duì)所有的作物真菌病害均有良好的防治效果，主要登記用于防治谷物、水稻、花生、葡萄、馬鈴薯、果樹、蔬菜、咖啡、草坪等植物病害[4-5]。鄰羥基苯乙酸是生產(chǎn)嘧菌酯的主要原料，其質(zhì)量控制對(duì)嘧菌酯等藥物及中間體的合成有著重要意義，但目前有關(guān)其分析方法尚未見(jiàn)公開報(bào)道?；诖?，本文采用高效液相色譜儀建立了鄰羥基苯乙酸的定性定量分析方法，該方法分離效果好，操作簡(jiǎn)單快速，適用于鄰羥基苯乙酸在合成嘧菌酯等藥物過(guò)程中的質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀配具可變波長(zhǎng)的二級(jí)管陣列檢測(cè)器和島津配套色譜工作站Labsolution (日本島津公司)；DTC-27J 型超聲波清洗儀(湖北鼎泰生化科技設(shè)備制造有限公司)；ME204/02 型電子天平(瑞士梅特勒托利多集團(tuán))；有機(jī)相濾膜(孔徑0.45 μm)(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)。

乙腈，色譜純(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；磷酸，分析純(國(guó)藥集團(tuán))；蒸餾水(廣州屈臣氏)；鄰羥基苯乙酸標(biāo)樣，已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0% (南通泰禾化工股份有限公司提供，沈陽(yáng)化工研究院有限公司定值)；40%鄰羥基苯乙酸溶液試樣(南通泰禾化工股份有限公司提供)。

1.2 色譜條件

檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器；色譜柱為島津Itertsil ODS-3不銹鋼色譜柱 (250 mm×4.6 mm i.d.，內(nèi)裝5 μm填充物)；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水溶液，經(jīng)濾膜過(guò)濾和脫氣，流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm；柱溫為(40±2) ℃；進(jìn)樣體積為20 μL。采用梯度洗脫程序，其洗脫條件見(jiàn)表1。在上述色譜操作條件下，鄰羥基苯乙酸的保留時(shí)間約11.2 min。鄰羥基苯乙酸標(biāo)樣和試樣的高效液相色譜圖如圖2所示。

表1 液相色譜梯度洗脫條件

圖2 鄰羥基苯乙酸標(biāo)樣(上圖)和試樣(下圖)的高效液相色譜圖

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取約0.1 g (精確至0.000 1 g)鄰羥基苯乙酸標(biāo)樣置于50 mL 容量瓶中，用乙腈-0.1%磷酸水溶液(體積比50∶50)溶解定容并搖勻，作為標(biāo)樣儲(chǔ)備溶液。準(zhǔn)確移取標(biāo)樣儲(chǔ)備溶液5 mL 于另一50 mL 容量瓶中，用乙腈-0.1%磷酸水溶液(體積比50∶50)溶解、定容、搖勻并過(guò)濾備用。

1.3.2 試樣溶液的制備

稱取約0.25 g (精確至0.000 1 g) 40%鄰羥基苯乙酸溶液置于50 mL 容量瓶中，用乙腈-0.1%磷酸水溶液(體積比50∶50)溶解定容并搖勻，作為試樣儲(chǔ)備溶液。準(zhǔn)確移取試樣儲(chǔ)備溶液5 mL 于另一50 mL容量瓶中，用乙腈-0.1%磷酸水溶液(體積比50∶50)溶解、定容、搖勻并過(guò)濾備用。

1.4 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰2 針的峰面積相對(duì)變化小于1.0%，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.5 計(jì)算

將測(cè)得的2 針試樣溶液以及試樣前后2 針標(biāo)樣溶液中鄰羥基苯乙酸峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中鄰羥基苯乙酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按式(1)計(jì)算：

式中：為試樣中鄰羥基苯乙酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示；為試樣溶液中鄰羥基苯乙酸峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g)；P為標(biāo)樣中鄰羥基苯乙酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示；為標(biāo)樣溶液中鄰羥基苯乙酸峰面積的平均值；m2為試樣的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g)。

2 結(jié)果和分析

2.1 分析方法特異性

本試驗(yàn)采用HPLC-DAD 峰純度分析法來(lái)鑒別鄰羥基苯乙酸。鄰羥基苯乙酸標(biāo)樣的最小峰純度相似度為1.000 000，最小峰純度閾值為0.999 999，最小峰純度指數(shù)為0，說(shuō)明標(biāo)樣色譜峰中不含有雜質(zhì)峰；40%鄰羥基苯乙酸溶液中的鄰羥基苯乙酸HPLC-DAD 峰純度中最小峰純度相似度為1.000 000，最小峰純度閾值為0.999 999，最小峰純度指數(shù)為0，說(shuō)明樣品色譜峰中不含有雜質(zhì)峰。標(biāo)樣與試樣的色譜峰保留時(shí)間差在1.0%以內(nèi)，如圖2 所示。標(biāo)樣和試樣的峰純度圖如圖3 所示。

圖3 鄰羥基苯乙酸標(biāo)樣(上圖)和試樣(下圖)中目標(biāo)峰純度

2.2 分析方法的線性相關(guān)性的測(cè)定

按照本方法中1.3.1 節(jié)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的步驟，稱取不同質(zhì)量的鄰羥基苯乙酸標(biāo)樣，配制成6 個(gè)不同質(zhì)量濃度的鄰羥基苯乙酸線性相關(guān)溶液，按照本方法中所示條件，待儀器基線穩(wěn)定后，按順序測(cè)定每個(gè)鄰羥基苯乙酸溶液的峰面積，取2 次測(cè)定平均值，以鄰羥基苯乙酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)圖4?？梢?jiàn)，質(zhì)量濃度為104.4～344.1 μg/mL 時(shí)，鄰羥基苯乙酸的質(zhì)量濃度與其響應(yīng)值之間呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，其線性方程為y=19 527x-2 795.2，相關(guān)系數(shù)R2=1.000 0，完全可以滿足定量分析的要求。

圖4 鄰羥基苯乙酸峰面積與質(zhì)量濃度關(guān)系圖

2.3 分析方法的精密度試驗(yàn)

對(duì)同一溶液準(zhǔn)確連續(xù)稱取5 個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得鄰羥基苯乙酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2 可見(jiàn)，鄰羥基苯乙酸的變異系數(shù)為0.05%，說(shuō)明該方法精密度良好，能滿足日常的定量分析。

表2 40%鄰羥基苯乙酸的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

采用加標(biāo)回收法，準(zhǔn)確稱取6 個(gè)已知含量的同一鄰羥基苯乙酸溶液試樣，加入不同質(zhì)量已知含量的鄰羥基苯乙酸標(biāo)樣至50 mL 容量瓶中，按照本方法中1.3.2 節(jié)進(jìn)行配制備用。在上述色譜操作條件下分別進(jìn)行分析，見(jiàn)表3?？梢?jiàn)，鄰羥基苯乙酸的回收率為99.2%～100.7%，平均回收率為100.1%，說(shuō)明該方法準(zhǔn)確度良好，能滿足日常的定量分析。

表3 40%鄰羥基苯乙酸溶液的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié) 論

本文采用高效液相色譜儀建立了快速測(cè)定40%鄰羥基苯乙酸溶液中有效成分的定性定量方法。采用ODS-3 不銹鋼色譜柱(250 mm×4.6 mm i.d.×5 μm)和二極管陣列檢測(cè)器在270 nm 波長(zhǎng)下，以乙腈和0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，采用梯度洗脫方式，測(cè)得有效成分的精密度和準(zhǔn)確度高、線性關(guān)系良好。該方法具有操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)過(guò)程穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確，分離效果好等特點(diǎn)，可用于40%鄰羥基苯乙酸溶液的檢測(cè)。