周雨玫 劉雁峰 申萌萌

摘要 目的：探討二補(bǔ)助育湯對(duì)胚胎著床障礙模型小鼠子宮內(nèi)膜形態(tài)及血管生成素-1（Ang-1）mRNA、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）mRNA的表達(dá)和定位的影響。方法：24只ICR雌性小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、戊酸雌二醇組、二補(bǔ)助育湯組，每組6只，用米非司酮建立胚胎著床障礙動(dòng)物模型，各組給予相應(yīng)藥物灌胃，妊娠第5天處死小鼠后，檢測各組妊娠率、平均著床位點(diǎn)數(shù)、子宮內(nèi)膜Ang-1和VEGF mRNA表達(dá)量及其蛋白定位。結(jié)果：模型組小鼠平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)、Ang-1 mRNA、VEGF mRNA表達(dá)量明顯低于空白組（均 P <0.05）;與模型組比較，二補(bǔ)助育湯組平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)、Ang-1 mRNA、VEGF mRNA表達(dá)量顯著提高（均 P <0.05）。結(jié)論：二補(bǔ)助育湯可提高子宮內(nèi)膜Ang-1和VEGF蛋白表達(dá)量，促進(jìn)子宮內(nèi)膜血管生成，從而提高子宮內(nèi)膜容受性。

關(guān)鍵詞 二補(bǔ)助育湯;胚胎著床障礙小鼠;血管生成;血管生成素-1;血管內(nèi)皮生長因子;子宮內(nèi)膜容受性;妊娠率;平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)

Influence of Erbu Zhuyu Decoction on the Expression of Uterine Angiogenesis-related Factors in the Endometrium of Mice with Embryo Implantation Dysfunction

ZHOU Yumei1，LIU Yanfeng1，SHEN Mengmeng2

（1 Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100700，China; 2 Beijing University of Chinese Medicine Third Affiliated Hospital，Beijing 100029，China）

AbstractObjective： To investigate the influence of Erbu Zhuyu Decoction on the expression of angiopoietin-1（Ang-1） and vascular endothelial growth factor（VEGF） in the endometrium of mice with embryo implantation dysfunction. Methods： Female ICR mice（n=24） were randomly assigned into a blank group，a model group，an Erbu Zhuyu Decoction group，and a progynova group（each n=6）.Mifepristone was used to establish the model of embryo implantation dysfunction.The mice in different groups were orally administrated with corresponding agents each day and sacrificed in the afternoon of the 5th day of pregnancy.The morphology of uterus was observed，and the pregnancy rate and average number of embryo implantation sites were calculated.The mRNA levels and protein localization of Ang-1 and VEGF were determined. Results： Compared with the blank group，the modeling decreased the embryo implantation sites（ P <0.05） and down-regulated the mRNA levels of Ang-1 and VEGF（ P <0.05）.Compared with the model group，Erbu Zhuyu Decoction increased the embryo implantation sites（ P <0.05） and up-regulated the mRNA levels of Ang-1 and VEGF（ P <0.05）. Conclusion： Erbu Zhuyu Decoction can up-regulate the mRNA levels of Ang-1 and VEGF to improve the blood supply and promote the receptivity of endometrium，thereby facilitating embryo implantation.

Keywords Erbu Zhuyu Decoction; Mouse model of embryo implantation dysfunction; Angiogenesis; Angiopoietin-1; Vascular endothelial growth factor; Endometrial receptivity; Pregnancy rate; Average number of embryo implantation sites

中圖分類號(hào)：R243;R271.14 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ?doi： 10.3969/j.issn.1673-7202.2022.09.013132E811B-59F1-4B75-AC56-5F39F1BE546F

子宮內(nèi)膜容受性（Endometrial Receptivity，ER）是指子宮內(nèi)膜在特定時(shí)期對(duì)胚胎表達(dá)出接受著床的狀態(tài)[1]。胚胎著床需要充足的血管生長和維持，過程中伴隨子宮內(nèi)膜組織生成豐富的血管[2]，以提供營養(yǎng)支持。充足的子宮血管和調(diào)節(jié)細(xì)胞因子是胚胎成功著床的必要條件，子宮內(nèi)膜血管生成和細(xì)胞因子表達(dá)的下降會(huì)導(dǎo)致生殖失敗[3]。血管生成主要受兩大關(guān)鍵生長因子家族調(diào)節(jié)：血管內(nèi)皮生長因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）家族和血管生成素（Angiopoietin，Ang）家族[4]，兩家族共同合作誘導(dǎo)血管的生長[5]。研究表明，Ang-1和VEGF在種植窗期子宮組織及早期胎盤中出現(xiàn)高表達(dá)，提示Ang-1和VEGF可能參與胚胎植入過程[6]。故調(diào)控血管生成的Ang、VEGF家族可能影響子宮內(nèi)膜容受性。二補(bǔ)助育湯是北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院名老中醫(yī)肖承悰教授治療子宮內(nèi)膜容受性不良的經(jīng)驗(yàn)用方，可明顯提高子宮內(nèi)膜容受性不良患者體外受精-胚胎移植（In Vitro Fertilization Embryo Transfer，IVF-ET）的成功率[7]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上，試從血管生成角度出發(fā)，探討二補(bǔ)助育湯對(duì)血管生成相關(guān)基因Ang-1和VEGF的影響，進(jìn)一步研究其改善子宮內(nèi)膜容受性的作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1動(dòng)物6～8周齡未交配過無特定病原體（Specific Pathogen Free，SPF）級(jí)ICR雌性小鼠24只，體質(zhì)量（25±2）g;7～9周齡有生育能力SPF級(jí)ICR雄性小鼠12只，體質(zhì)量（25±2）g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006。所有動(dòng)物由北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房負(fù)責(zé)飼養(yǎng)，自由獲取食物和飲水，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為（22±2）℃，濕度為5% ～10%，光照周期12 h/12 h。本研究經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批通過（倫理審批號(hào)：BUCM-4-2020110203-4105）。

1.1.2藥物二補(bǔ)助育方由骨碎補(bǔ)15 g、補(bǔ)骨脂15 g、巴戟天15 g、桑寄生15 g、川續(xù)斷15 g、川牛膝15 g等藥物組成，由北京康仁堂藥業(yè)有限公司制作出顆粒制劑。用0.5%羧甲基纖維素鈉（Carboxymethyl Cellulose，CMC）溶液加熱攪拌溶解，制成質(zhì)量濃度為3 g/mL的混懸液;戊酸雌二醇（Bayer公司，德國，進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)：H20160679，批號(hào)：502A）。取1.5 mg放在研缽中研碎，溶于0.5% CMC溶液中，攪拌均勻，制成濃度為0.03 mg/mL溶液;米非司酮片（華潤紫竹藥業(yè)有限公司，批號(hào)：43190503）研碎后藥末溶于麻油中配制成質(zhì)量濃度為0.68 g/mL的米非司酮油劑。

1.1.3試劑與儀器4%多聚甲醛（SPI公司，英國，貨號(hào)：#2615）;anti-VEGF（北京中杉金橋公司，貨號(hào)：ZA-509）;Ang-1 Polyclonal Antibody（Abbkine公司，美國，貨號(hào)：ABP53096）;兔超敏即用型二步法<非生物素>檢測試劑盒[北京中杉金橋公司，貨號(hào)：PV-9001（GBI）];SsoAdvancedTM SYBR Green Supermix熒光定量PCR（Bio-Rad公司，美國，貨號(hào)：Cat#A5000）。熒光定量PCR儀（Bio-Rad公司，美國，型號(hào)：CFX96）;光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS公司，日本，型號(hào)：Olympus BX60）。

1.2方法

1.2.1分組與模型制備所有小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，每日16：00時(shí)合籠，雌雄比例2∶ 1，次日8：00發(fā)現(xiàn)陰栓者認(rèn)定為妊娠，記為妊娠第1天。將妊娠小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表分為4組：空白組、模型組、戊酸雌二醇組、二補(bǔ)助育湯組，每組6只。分別予以相應(yīng)藥物灌胃。妊娠第4天9：00，模型組、戊酸雌二醇組、二補(bǔ)助育湯組于小鼠后頸部皮下注射米非司酮油劑，注射量為0.1 mL/只，制成胚胎著床障礙模型;空白組同時(shí)間注射麻油，注射量為0.1 mL/只。

1.2.2給藥方法空白組和模型組小鼠于妊娠第1天開始每天灌服0.5% CMC溶液，其余各組灌服相應(yīng)藥物（二補(bǔ)助育湯組、戊酸雌二醇組小鼠給藥量分別相當(dāng)于臨床體質(zhì)量70 kg的成人每日劑量160 g、2 mg）灌胃量按0.1 mL/10 g計(jì)算，連續(xù)灌胃5 d。各組小鼠于妊娠第5天下午脫頸處死，無菌條件下快速摘取子宮，其中一角子宮迅速放入凍存管中液氮中冷凍，-80 ℃保存，備PCR檢測;另一角子宮投入4%多聚甲醛溶液中固定，備蘇木精-伊紅（Hematoxylin Eosin，HE）染色及免疫組織化學(xué)檢測。

1.2.3檢測指標(biāo)與方法1）觀察各組小鼠子宮大體形態(tài);2）妊娠率及平均著床位點(diǎn)數(shù)：記錄各組小鼠妊娠數(shù)量及每只小鼠著床位點(diǎn)數(shù)。妊娠率（%）=妊娠小鼠數(shù)/該組雌鼠數(shù)×100%;平均著床位點(diǎn)數(shù)（%）=總胚泡數(shù)/該組妊娠小鼠數(shù)×100%;3）光鏡下子宮內(nèi)膜形態(tài)：采用HE染色法，觀察子宮組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。操作步驟如下：石蠟包埋，4 μm厚切片，脫蠟，沖洗5 min，蘇木精染色15 min，水洗，5%伊紅染色5 min，沖洗5 min，乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹脂封片;4）免疫組織化學(xué)法檢測各組小鼠子宮內(nèi)膜中Ang-1、VEGF的表達(dá)：4%多聚甲醛固定24 h后進(jìn)行病理制片，乙醇逐級(jí)脫水、二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋、4 μm厚切片，常規(guī)脫蠟至水，3% H2O2 10 min，抗原修復(fù)10 min，一抗4 ℃過夜，二抗、三抗37 ℃ 30 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水、二甲苯透明、樹脂膠封固，顯微鏡觀察;5）子宮內(nèi)膜Ang-1、VEGF mRNA的表達(dá)：取各組小鼠子宮內(nèi)膜組織100 mg，Trizol法提取總RNA，用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，檢測RNA完整性，反轉(zhuǎn)錄為cDNA后，進(jìn)行RT-PCR，內(nèi)參為GAPDH。Ang-1：上游引物5′-CAGCATCCTGCAGAAGCAAC-3′，下游引物5′-TCTCTTTTTCCTCCCTTTAGCA-3′，擴(kuò)增片段99 bp;VEGF：上游引物5′-TATTCAGCGGACTCACCAGC-3′，下游引物5′-CCTCCTCAAACCGTTGGCA-3′，擴(kuò)增片段150 bp。反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性2 min，94 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)?；虮磉_(dá)量采用相對(duì)定量2-△△Ct法進(jìn)行計(jì)算。132E811B-59F1-4B75-AC56-5F39F1BE546F

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ?±s ）表示，多組間比較采用One-way ANOVA分析，兩兩比較采用LSD法。不滿足正態(tài)分布或方差齊性，用非參數(shù)檢驗(yàn)。以 P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1子宮形態(tài)空白組小鼠子宮顏色淡紅，胚胎著床處子宮膨大，呈串珠狀改變，血管豐富;模型組小鼠子宮顏色蒼白，管腔較細(xì)，胚胎著床數(shù)目極少，分布稀疏，著床處膨大較空白組小，血管稀疏;戊酸雌二醇組小鼠子宮顏色黃白，管腔形態(tài)短粗，胚胎著床數(shù)目少，分布稀疏且不均勻;二補(bǔ)助育湯組小鼠子宮顏色淡紅，管腔細(xì)長，胚胎著床數(shù)目較多，分布均勻呈串珠狀改變，血管豐富。見圖1。

2.2妊娠率及平均著床位點(diǎn)數(shù)與空白組比較，模型組平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05），胚胎著床障礙模型造模成功;與模型組比較，二補(bǔ)助育湯組與戊酸雌二醇組平均著床位點(diǎn)數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P <0.05）;與戊酸雌二醇組比較，二補(bǔ)助育湯組平均著床位點(diǎn)數(shù)略有增多，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05）。見表1，圖2～3。

2.3子宮內(nèi)膜HE染色空白組子宮內(nèi)膜腔上皮增厚，呈假復(fù)層改變;子宮間質(zhì)稀疏，呈蛻膜化表現(xiàn);腺體、血管豐富。模型組子宮內(nèi)膜厚度變薄，腺體、血管數(shù)量較空白組減少。戊酸雌二醇組子宮內(nèi)膜較模型組有明顯改善，腺體表達(dá)豐富，但血管較少。二補(bǔ)助育湯組子宮內(nèi)膜較模型組增厚，間質(zhì)內(nèi)腺體、血管表達(dá)豐富。見圖4。

2.4子宮內(nèi)膜Ang-1蛋白定位及mRNA表達(dá)

空白組Ang-1蛋白在子宮內(nèi)膜間質(zhì)、血管上皮細(xì)胞中表達(dá)陽性。模型組VEGF蛋白在子宮內(nèi)膜血管上皮細(xì)胞上表達(dá)弱陽性，在間質(zhì)細(xì)胞上表達(dá)陰性。戊酸雌二醇組和二補(bǔ)助育湯組Ang-1蛋白定位與空白組相接近。見圖5。

與空白組比較，模型組小鼠子宮內(nèi)膜Ang-1 mRNA表達(dá)量減少（ P <0.05）;與模型組比較，戊酸雌二醇組和二補(bǔ)助育湯組小鼠子宮內(nèi)膜Ang-1 mRNA表達(dá)量均升高，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P <0.05）。見表2，圖6。

2.5子宮內(nèi)膜VEGF蛋白定位及mRNA表達(dá)

空白組VEGF蛋白在子宮內(nèi)膜腔上皮、血管上皮、腺體上皮、間質(zhì)細(xì)胞上陽性表達(dá)。模型組VEGF蛋白在子宮內(nèi)膜腔上皮、血管上皮、腺體上皮細(xì)胞上表達(dá)弱陽性，在間質(zhì)細(xì)胞上表達(dá)陰性。戊酸雌二醇組和二補(bǔ)助育湯組VEGF蛋白定位與空白組相接近。見圖7。

與空白組比較，模型組小鼠子宮內(nèi)膜VEGF mRNA表達(dá)量減少（ P <0.05）;與模型組比較，戊酸雌二醇組和二補(bǔ)助育湯組小鼠子宮內(nèi)膜VEGF mRNA表達(dá)量均升高，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P <0.05）。見表3，圖8。

3討論

北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院肖承悰教授治療子宮內(nèi)膜容受性不良選用經(jīng)驗(yàn)方二補(bǔ)助育湯加減。肖教授認(rèn)為腎虛血瘀、心血不足、胞脈不暢為該病的主要病機(jī)，立“補(bǔ)腎氣、通胞脈”治法，臨床療效顯著。方由骨碎補(bǔ)、補(bǔ)骨脂、巴戟天、桑寄生、川續(xù)斷、川牛膝等藥物組成，方名中“二補(bǔ)”為君藥骨碎補(bǔ)、補(bǔ)骨脂，二藥合用補(bǔ)腎助孕，溫陽活血;巴戟天補(bǔ)腎益精，助君藥補(bǔ)腎助陽;桑寄生、川續(xù)斷補(bǔ)腎益精，活血通脈，溫而不燥，補(bǔ)而不膩;川牛膝補(bǔ)腎氣、通血脈，引諸藥下行于胞中。方中補(bǔ)腎藥物與活血行氣藥物靈活配伍，補(bǔ)而不滯，共奏補(bǔ)腎、溫陽、活血、通脈之功。團(tuán)隊(duì)前期臨床研究表明，二補(bǔ)助育湯能改善患者臨床癥狀，提高再次IVF-ET的成功率及臨床妊娠率，可從增加子宮內(nèi)膜厚度、降低子宮動(dòng)脈及內(nèi)膜血流值、提高Salle評(píng)分、糾正母體血栓前狀態(tài)等方面提高子宮內(nèi)膜容受性[7-9]。前期實(shí)驗(yàn)研究表明，該方可通過改善子宮內(nèi)膜胞飲突表達(dá)、提高子宮內(nèi)膜雌激素受體、孕激素受體、白細(xì)胞抑制因子、整合素ανβ3、干細(xì)胞因子mRNA、HOXA-10 mRNA的表達(dá)、激活磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B（Phosphatidylinositol-3-kinase-Protein Kinase B，PI3K/AKT）/內(nèi)皮型一氧化氮合酶（Endothelial Nitric Oxide Synthase，eNOS）通路、增加自噬相關(guān)標(biāo)志物Beclin-1、LC3B的表達(dá)來改善子宮內(nèi)膜容受性[10-15]。

米非司酮和吲哚美辛是目前研究較成熟的胚胎著床障礙動(dòng)物模型建立用藥。米非司酮是一種孕激素拮抗劑，具有抗早孕作用，其機(jī)制是與孕激素受體競爭性結(jié)合從而達(dá)到抗孕酮的效果。米非司酮可引起前列腺素（Prosglandins，PGs）大量釋放、抑制黃體生成素分泌、從而導(dǎo)致流產(chǎn)、抗排卵及胚胎著床[16]。研究表明，米非司酮可抑制子宮內(nèi)膜Ang-1、VEGF的表達(dá)，阻礙子宮內(nèi)膜血管正常生成，造成子宮內(nèi)膜容受性降低[17]。吲哚美辛可通過抑制PGs合成酶環(huán)氧合酶（Cyclooxygenase，COX）的表達(dá)，降低PGs的含量，阻礙VEGF的表達(dá)，使子宮內(nèi)膜血管生成受到抑制，血管通透性降低，子宮內(nèi)膜不能正常蛻膜化，達(dá)到阻礙胚胎著床的作用[18]。米非司酮和吲哚美辛雖都具有抗著床效應(yīng)，都能夠復(fù)制穩(wěn)定的胚胎著床障礙模型，但吲哚美辛具有強(qiáng)烈的抗炎作用，對(duì)全身其他系統(tǒng)都有不良影響，易造成動(dòng)物損傷甚至死亡，而米非司酮未表達(dá)出對(duì)其他各系統(tǒng)有明顯不良反應(yīng)，且具有給藥次數(shù)少、劑量小的優(yōu)點(diǎn)，故本研究選用米非司酮建立胚胎著床障礙動(dòng)物模型。一般情況下，發(fā)育正常的小鼠胚胎在母鼠妊娠第4天到達(dá)宮腔，在子宮內(nèi)膜著床的時(shí)間約為妊娠第4.5天[19]。據(jù)此，本研究于小鼠妊娠第4天頸部皮下注射米非司酮油劑，通過抑制子宮內(nèi)膜血管生成，造成胚胎著床障礙模型[20]。戊酸雌二醇常作為在IVF-ET周期中雌激素補(bǔ)充治療用藥，可修復(fù)受損的子宮內(nèi)膜，提高移植后的子宮內(nèi)膜容受性[21]，故本研究選用戊酸雌二醇作為陽性對(duì)照藥物。132E811B-59F1-4B75-AC56-5F39F1BE546F

維持子宮內(nèi)膜發(fā)育、支持胚胎著床常伴有內(nèi)膜血管的生長和消退，故血管生成已成為評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜容受性的重要參考依據(jù)[22]。近年來發(fā)現(xiàn)Ang家族成員之一Ang-1參與調(diào)節(jié)血管生成及其穩(wěn)定性。研究表明，Ang-1基因在胚胎著床時(shí)期的子宮內(nèi)膜中過表達(dá)，參與著床部位的血管新生與重塑，對(duì)囊胚成功著床有重要意義[23]。VEGF參與血管生成，影響血管通透性，可促進(jìn)新生血管的發(fā)生和生長，有助于胚胎早期絨毛血管的形成，利于胚胎著床。圍著床期VEGF的過表達(dá)可促使子宮內(nèi)膜容受性增加[24]。VEGF和Ang保持動(dòng)態(tài)平衡，VEGF促使血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，加快血管生成;血管生成后，Ang可增強(qiáng)新生血管穩(wěn)定性，其中Ang-1在血管生成后期通過降低血管通透性，增加新生血管穩(wěn)定性[25-26]。而Ang-1還可與VEGF共同抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，降低血管通透性，抑制炎癥反應(yīng)，聯(lián)合作用保護(hù)血管[27]。

本研究通過檢測子宮內(nèi)膜組織中Ang-1 mRNA與VEGF mRNA的表達(dá)，評(píng)估小鼠子宮內(nèi)膜血管生成水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，米非司酮可造成小鼠子宮內(nèi)膜變薄，抑制子宮內(nèi)膜Ang-1 mRNA與VEGF mRNA表達(dá)，導(dǎo)致小鼠子宮內(nèi)膜血管生成障礙，容受性下降，妊娠率及平均著床位點(diǎn)數(shù)降低。Ang-1 mRNA與VEGF mRNA主要在子宮內(nèi)膜血管上皮細(xì)胞及血管周圍的間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，戊酸雌二醇和二補(bǔ)助育湯能夠提高二者的表達(dá)水平，提示二補(bǔ)助育湯可通過促進(jìn)子宮內(nèi)膜血管生成提高子宮內(nèi)膜容受性。

綜上所述，二補(bǔ)助育湯能夠提高子宮內(nèi)膜Ang-1 mRNA、VEGF mRNA的表達(dá)，提高妊娠率，增加胚胎著床位點(diǎn)數(shù)，其機(jī)制可能是通過促進(jìn)子宮內(nèi)膜血管生成，改善胚胎著床處血供，從而提高子宮內(nèi)膜容受性。

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（2021-03-30收稿本文編輯：楊燕）

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（82074480）作者簡介：周雨玫（1993.04—），女，博士研究生在讀，研究方向：中醫(yī)藥防治女性生殖內(nèi)分泌紊亂疾病、不孕癥等，E-mail：zhouyumeibucm@163.com通信作者：劉雁峰（1963.02—），女，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)藥防治女性生殖內(nèi)分泌紊亂疾病、不孕癥等，E-mail：liuyaf8888@sina.com132E811B-59F1-4B75-AC56-5F39F1BE546F