趙侗玲

遼寧省鞍山市婦兒醫(yī)院檢驗(yàn)科,遼寧鞍山 114000

EB病毒是一種常見的DNA病毒，屬于皰疹病毒家族成員之一，較易感染兒童，尤其是男童，可引發(fā)發(fā)熱、皮疹、淋巴結(jié)腫大等癥狀或體征[1]。EB病毒感染主要與患兒免疫力下降有關(guān)，因此臨床可通過深入分析與EB病毒感染患兒病理變化相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)，進(jìn)而獲得早期明確的診斷結(jié)果，以利于EB病毒感染疾病的防治。在臨床中，可敏感反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的常見指標(biāo)有外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、單核細(xì)胞等。其中T淋巴細(xì)胞亞群主要包括CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞等，其具有高度異質(zhì)性的特點(diǎn)，臨床常用于判斷自身免疫性疾病、免疫缺陷癥等[2]；白細(xì)胞具有防護(hù)作用，臨床常用于判斷機(jī)體的炎癥狀態(tài)[3]；單核細(xì)胞是機(jī)體血液中體積較大的血細(xì)胞，也是組成機(jī)體防御系統(tǒng)的重要部分，臨床常用于判斷機(jī)體的免疫功能[4]。本研究旨在探討EB病毒感染患兒T淋巴細(xì)胞亞群的水平變化及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇500例2019年10-12月本院收治的EB病毒感染患兒作為觀察組，并選取同期體檢健康兒童500例作為對(duì)照組，整理并分析其臨床資料。對(duì)照組研究對(duì)象年齡1～10歲，平均(6.31±1.23)歲；男340例，女160例。觀察組患兒年齡1～11歲，平均(6.32±1.17)歲；男345例，女155例；EB病毒載量：DNA≥1×105copy/mL 250例，DNA<1×105copy/mL 250例。兩組性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：患兒符合《EB病毒感染實(shí)驗(yàn)室診斷及臨床應(yīng)用專家共識(shí)》[5]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室檢查確診；臨床資料齊全；伴有急性發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大等癥狀或體征；淋巴細(xì)胞、異形淋巴細(xì)胞比例增加。觀察組排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有其他惡性腫瘤者；有血液系統(tǒng)疾病者；伴免疫功能障礙者；嚴(yán)重肝、腎功能異常者；有其他感染性疾病者等。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象家屬均知情同意。

1.2方法 于觀察組患兒入院當(dāng)天進(jìn)行EB病毒DNA獲取：將50 μL強(qiáng)陽(yáng)性、臨界陽(yáng)性、陰性質(zhì)控品放置于離心管中，并加入DNA提取液(50 μL)，使其充分混勻，然后將其置于金屬浴恒溫(100 ℃)加熱(10 min)，并使用美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司提供的超速離心機(jī)(離心半徑：10 cm；離心速度：12 000 r/min；離心時(shí)間：5 min)進(jìn)行離心，作為樣品1備用。在含有淋巴細(xì)胞分離液(1 mL)的試管中加入全血(1 mL)，并使用超速離心機(jī)(離心半徑：10 cm；離心速度：2 000 r/min；離心時(shí)間：20 min)進(jìn)行離心，取白細(xì)胞層(中間云霧狀細(xì)胞層)，再將其(1.5 mL)置于離心管中(離心半徑：10 cm；離心速度：12 000 r/min；離心時(shí)間：5 min)進(jìn)行離心，取下沉淀，然后在其中加入制備好的DNA提取液(50 μL)，并充分混勻，恒溫(100 ℃)下處理(10 min)后，使用超速離心機(jī)(離心半徑：10 cm；離心速度：12 000 r/min；離心時(shí)間：20 min)進(jìn)行離心，以備用。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)：在放入反應(yīng)液的PCR管中，依據(jù)病毒含量由無(wú)到有、由少至多的順序加入準(zhǔn)備好的樣品1上清液(2 μL)，樣品有定量參考品、陰性質(zhì)控品、標(biāo)本、臨界陽(yáng)性質(zhì)控品、強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品，然后將其放入PCR檢測(cè)儀器(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，型號(hào)：ABI7000)的樣品孔內(nèi)，參數(shù)設(shè)置：2 min 93 ℃；45 s 93 ℃；60 s 55 ℃共循環(huán)10次。30 s 93 ℃；45 s 55 ℃共循環(huán)30次。最后檢測(cè)EB病毒水平。T淋巴細(xì)胞亞群水平檢測(cè)：制備混合制劑，取單克隆抗體(CD127-PE、CD4-PC5、CD4-FITC/CD8-FE/CD3-PC、CD4-PC5)及CD4-PC5 各5 μL，加入EDTA-K2抗凝外周血(100 μL)，進(jìn)行溫育(室溫)避光(20 min)，加入溶血素(2 mL)，避光溫育(常溫)10 min，磷酸鹽緩沖液洗滌2次，并重懸細(xì)胞后，予以上機(jī)檢測(cè)。

1.3觀察指標(biāo) (1)觀察組患兒與對(duì)照組研究對(duì)象外周血細(xì)胞變化情況比較：淋巴細(xì)胞比例、WBC、單核細(xì)胞比例。(2)觀察組患兒與對(duì)照組研究對(duì)象T淋巴細(xì)胞亞群變化情況比較：CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞水平和CD4+/CD8+比值。(3)不同病毒載量患兒T淋巴細(xì)胞亞群變化情況比較。

2 結(jié) 果

2.1觀察組與對(duì)照組外周血細(xì)胞變化情況比較 觀察組患兒外周血淋巴細(xì)胞比例、WBC高于對(duì)照組(P<0.05)，兩組外周血單核細(xì)胞比例比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 觀察組與對(duì)照組外周血細(xì)胞變化情況比較

2.2觀察組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群變化情況比較 觀察組患兒外周血CD4+T淋巴細(xì)胞水平和CD4+/CD8+比值低于對(duì)照組，而外周血CD8+T淋巴細(xì)胞水平高于對(duì)照組(P<0.05)；觀察組患兒外周血CD3+T淋巴細(xì)胞水平與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 觀察組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群變化情況比較

2.3不同病毒載量患兒T淋巴細(xì)胞亞群變化情況比較 與EB病毒DNA≥1×105copy/mL的患兒相比，EB病毒DNA<1×105copy/mL患兒的外周血CD4+T淋巴細(xì)胞水平和CD4+/CD8+比值較高，外周血CD8+、CD3+T淋巴細(xì)胞水平較低(P<0.05)，見表3。

表3 不同病毒載量患兒T淋巴細(xì)胞亞群變化情況比較

3 討 論

EB病毒是一種可引起人類呼吸道感染、腫瘤的皰疹病毒，若未對(duì)患兒實(shí)施及時(shí)有效的治療，病情將進(jìn)一步發(fā)展，導(dǎo)致全身多個(gè)系統(tǒng)損傷，嚴(yán)重影響患兒身心健康。相關(guān)研究表明，EB病毒感染可造成患兒機(jī)體細(xì)胞免疫功能降低，進(jìn)而出現(xiàn)傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)，同時(shí)其還可導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等發(fā)生增殖和轉(zhuǎn)化，為惡性疾病發(fā)生打下基礎(chǔ)，且與多種惡性腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系[6]。近幾年，EB病毒感染患兒的發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)，且男性患兒比例高于女性[7]。

淋巴細(xì)胞可發(fā)揮產(chǎn)生、運(yùn)載抗體，防御病毒感染等作用，但當(dāng)患兒發(fā)生病毒感染性疾病時(shí)，其在外周血中的比例會(huì)升高[8]；白細(xì)胞具有防御作用，可參與機(jī)體的防御反應(yīng)，當(dāng)病菌入侵機(jī)體時(shí)，其可包圍﹑吞噬病菌，故在一些病毒感染性疾病中，其水平也可升高[9]；單核細(xì)胞可吞噬、清除受傷、衰老的細(xì)胞及其碎片，還可參與免疫反應(yīng)，促進(jìn)淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，故其比例升高可輔助診斷機(jī)體已遭受病毒感染[10]。CD4+T淋巴細(xì)胞作為反映人體細(xì)胞免疫功能的主要指標(biāo)，其主要負(fù)責(zé)對(duì)抗入侵的病菌，控制多種感染，故CD4+T淋巴細(xì)胞水平降低可提示患兒免疫功能降低，從而使發(fā)生病毒感染性疾病的風(fēng)險(xiǎn)增大，且易加重病情；CD8+T淋巴細(xì)胞主要源于白細(xì)胞分化，其可輔助T淋巴細(xì)胞受體識(shí)別抗原、特異性地殺傷靶細(xì)胞等，故患兒發(fā)生病毒感染疾病時(shí)，其水平較高[11]；CD3+T淋巴細(xì)胞主要通過與T淋巴細(xì)胞抗原受體結(jié)合，從而共同參與T淋巴細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別、標(biāo)記，當(dāng)患兒發(fā)生病毒感染性疾病時(shí)，其水平偏高；CD4+/CD8+比值可作為反映細(xì)胞免疫反應(yīng)是否平衡的敏感指標(biāo)，當(dāng)患兒發(fā)生病毒感染性疾病時(shí)，其比值降低，表示免疫功能受到抑制，機(jī)體防御能力降低[12]。

本研究結(jié)果顯示，觀察組患兒外周血淋巴細(xì)胞比例、WBC高于對(duì)照組(P<0.05)，外周血單核細(xì)胞比例與對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，外周血CD4+T淋巴細(xì)胞水平和CD4+/CD8+比值低于對(duì)照組(P<0.05)，外周血CD8+T淋巴細(xì)胞水平高于對(duì)照組(P<0.05)，外周血CD3+T淋巴細(xì)胞水平與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這表明當(dāng)患兒發(fā)生EB病毒感染疾病時(shí)，其機(jī)體外周血T淋巴細(xì)胞亞群、WBC、淋巴細(xì)胞水平會(huì)發(fā)生變化，誘導(dǎo)一系列的免疫應(yīng)答反應(yīng)，進(jìn)而對(duì)抗病毒感染，減輕機(jī)體損傷，與雷勛明等[13]研究結(jié)果基本一致。在EB病毒感染患兒中，其不同的病毒載量可反映機(jī)體感染的嚴(yán)重程度，病毒載量越高表明患兒的病情越重。本研究結(jié)果顯示，與EB病毒DNA≥1×105copy/mL的患兒相比，EB病毒DNA<1×105copy/mL患兒的外周血CD4+T淋巴細(xì)胞水平和CD4+/CD8+比值較高，外周血CD8+、CD3+T淋巴細(xì)胞水平較低，表明當(dāng)患兒發(fā)生EB病毒感染疾病時(shí)，其病情嚴(yán)重程度可隨病毒載量的增加而加重，且機(jī)體免疫功能下降，與榮婷婷等[14]的研究結(jié)果基本一致。

綜上所述，EB病毒感染患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群、WBC、淋巴細(xì)胞水平異常，誘發(fā)免疫應(yīng)答反應(yīng)，同時(shí)其病情嚴(yán)重程度可隨病毒載量的增加而加重。因此，臨床可通過外周血T淋巴細(xì)胞亞群、WBC、淋巴細(xì)胞檢測(cè)，以評(píng)估EB病毒感染患兒的實(shí)際病情及預(yù)后情況。