陳雪鳳 潘慶流 吳圣進(jìn) 劉增亮 張雯龍 石 鵬 韋賢平

（1廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所，廣西南寧 530007；2河池市宜州區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，廣西河池 547000）

大杯蕈又名大杯傘、豬肚菇、大杯香菇、大斗菇等[1?5]，是近年來推廣栽培的一種珍稀食用菌，營養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)含量與香菇、金針菇相當(dāng)，菌蓋中氨基酸含量為干物質(zhì)的16.5%以上，其中必需氨基酸占氨基酸總量的45%，亮氨酸和異亮氨酸也高于常見食用菌[5]。大杯蕈不僅營養(yǎng)豐富，味道鮮美，而且耐儲運(yùn)，因此深受廣大菇農(nóng)和消費(fèi)者的喜愛。大杯蕈屬于中高溫型食用菌，適宜廣西夏秋季栽培上市，其對于調(diào)節(jié)市場、解決生產(chǎn)淡季食用菌鮮品供應(yīng)具有重要意義。

目前，栽培的大杯蕈品種的顏色一般為褐色、棕黃色或黃白色[1，5?7]，如由陳克華等[7]選育的“莆蕈1號”、陳成杰等[8]選育的大杯傘SX330，但未有白色的大杯蕈品種報(bào)道。筆者研究的大杯蕈白色變異菌株是由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所分子輔助育種團(tuán)隊(duì)在栽培的大杯蕈（灰褐色）中發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行組織分離和保存的。為了進(jìn)一步鑒別大杯蕈菌株與大杯蕈白色變異菌株的異同及了解大杯蕈白色變異菌株的生長條件，筆者比較了大杯蕈菌株和大杯蕈白色變異菌株形態(tài)特征，分析大杯蕈白色變異菌株的部分營養(yǎng)成分，并研究菌絲生長適宜條件，以期為今后大杯蕈白色變異菌株的栽培管理及后續(xù)的開發(fā)利用提供可靠的數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株為大杯蕈菌株（引自廣西大學(xué)），大杯蕈白色變異菌株（由廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所發(fā)現(xiàn)并組織分離獲得），經(jīng)鑒定同為Pleurotusgigan?teus，兩菌株菌種均由廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所提供和保存。

PDA綜合培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，硫酸鎂3 g，磷酸二氫鉀2 g，瓊脂20 g，水1 000 mL。

栽培料配方：棉籽殼20%，桑枝屑30%，雜木屑29%，麩皮20%，石灰1%。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 兩菌株子實(shí)體性狀

常規(guī)方法制備出菇料袋（聚丙烯塑料袋規(guī)格為15 cm×30 cm×0.005 cm）。料袋接種后置室溫25~30℃，空氣相對濕度為60%的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)菌絲。培養(yǎng)40~45 d，當(dāng)袋口附近有少量菇蕾時(shí)，搬運(yùn)至出菇大棚內(nèi)覆土出菇。出菇環(huán)境條件為棚溫25~30℃，空氣相對濕度80%~85%。出菇后，觀察比較兩菌株子實(shí)體形態(tài)及顏色變化。采收第1潮菇，每個(gè)菌株抽取成熟度一致的30朵鮮菇，測定子實(shí)體菌蓋、菌柄直徑等。

1.2.2 兩菌株子實(shí)體營養(yǎng)成分分析

采收兩菌株第1潮八成熟的子實(shí)體，分別剪取菌柄菌蓋，經(jīng)45~50℃烘干，各設(shè)3個(gè)重復(fù)。烘干樣品送南寧益譜檢測技術(shù)有限公司檢測樣品中粗纖維、粗蛋白、氨基酸、纖維素、半纖維素含量。參考檢測方法：粗纖維測定采用GB/T 5009.10—2003，粗蛋白測定采用GB 5009.5—2016，氨基酸測定采用GB/T 5009.124—2016，纖維素、半纖維素采用van soest法。

1.2.3 大杯蕈白色變異菌株菌絲生長條件試驗(yàn)

1.2.3.1 菌絲生長適宜碳源試驗(yàn)

試驗(yàn)設(shè)6個(gè)碳源處理。以PDA綜合培養(yǎng)基為對照，其他處理分別用等質(zhì)量的蔗糖、果糖、乳糖、麥芽糖、可溶性淀粉代替PDA綜合培養(yǎng)基中的葡萄糖，配制成含不同碳源的培養(yǎng)基。將活化15 d的大杯蕈白色變異菌株菌絲片（直徑6 mm）接入含不同碳源培養(yǎng)基的平板中央，每個(gè)處理重復(fù)3次。接種后的平板置30℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)9~10 d后，觀察菌落生長情況，測量菌落半徑，并計(jì)算菌絲平均生長速度。

1.2.3.2 菌絲生長適宜氮源試驗(yàn)

試驗(yàn)設(shè)7個(gè)氮源處理。在PDA綜合培養(yǎng)基中分別加入酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、硝酸銨、硫酸銨、尿素、麩皮各3 g，配置成含不同氮源培養(yǎng)基，每個(gè)處理重復(fù)3次。接種、培養(yǎng)條件、測定方法同1.2.3.1。

1.2.3.3 菌絲生長適宜溫度測定

試驗(yàn)設(shè)8個(gè)溫度梯度（15℃、18℃、21℃、24℃、27℃、30℃、33℃、36℃），培養(yǎng)基為PDA綜合培養(yǎng)基，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)。接種、培養(yǎng)條件、測定方法同1.2.3.1。

1.2.3.4 菌絲生長適宜pH試驗(yàn)

試驗(yàn)設(shè)8個(gè)pH梯度（4、5、6、7、8、9、10、11）。PDA綜合培養(yǎng)基滅菌后，用1 mol/L HCl溶液與1 mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，配制成不同pH的培養(yǎng)基。每個(gè)處理重復(fù)3次。接種、培養(yǎng)條件、測定方法同1.2.3.1。

1.4 測定及統(tǒng)計(jì)分析

1.4.1 子實(shí)體性狀的測定方法

子實(shí)體厚度：測量菌蓋中心厚度；子實(shí)體菌蓋大?。骸笆弊址y定菌蓋直徑；菌柄直徑：在菌柄中部測定；菌柄長度：測菌褶與菌柄交界處至菌柄基部的距離；子實(shí)體菌蓋菌柄顏色：從菌蓋頂部與蓋邊緣的中間部位隨機(jī)選取5個(gè)點(diǎn)用色差儀測定L值，L值的大小表示顏色的深淺程度，L值越大說明子實(shí)體顏色越淺；分別稱量菌蓋、菌柄，計(jì)算蓋柄質(zhì)量比。所有數(shù)據(jù)取平均值。

1.4.2 菌絲生長速度的測定方法

當(dāng)接種菌塊萌發(fā)有絲狀菌絲并開始吃料時(shí)，第1次劃線，當(dāng)菌絲生長至第9天時(shí)，進(jìn)行第2次劃線。測量各個(gè)處理兩次劃線的菌落半徑。菌絲平均生長速度（mm/d）=（第2次劃線菌落半徑?第1次劃線菌落半徑）/菌絲生長天數(shù)。

1.4.3 數(shù)據(jù)分析

采用DPS7.0軟件處理數(shù)據(jù)，Tukey法分析差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩菌株子實(shí)體形態(tài)比較

由表1、圖1可見，大杯蕈白色變異菌株與大杯蕈子實(shí)體形態(tài)特征差異較大，特別是顏色和菌蓋形狀。大杯蕈白色變異菌株的子實(shí)體形態(tài)特征是菌蓋白色或灰白色，蓋半球形或傘帽形，后期表面不光滑，粗糙，有肉質(zhì)瘤狀凸起，菌蓋肉質(zhì)肥厚；菌柄灰白色或白色，菌柄短、粗壯；菌褶隨柄下延，不等長，分叉。

圖1 大杯蕈與大杯蕈白色變異菌株子實(shí)體及菌柄對比（第1幅照片左為白色變異菌株，其他三幅照片均右為白色變異菌株）

表1 大杯蕈白色變異菌株與大杯蕈子實(shí)體形態(tài)特征比較

2.2 兩菌株的營養(yǎng)成分分析

由表2可知，大杯蕈白色變異菌株的菌蓋、菌柄的半纖維素、粗纖維、纖維素的含量均比大杯蕈低，且差異極顯著，說明大杯蕈白色變異菌株的子實(shí)體肉質(zhì)更細(xì)嫩，口感更好。大杯蕈白色變異菌株的粗蛋白高于大杯蕈，差異極顯著。大杯蕈白色變異菌株的菌蓋氨基酸含量明顯比大杯蕈的高，差異極顯著，菌柄的氨基酸含量略低于大杯蕈，但差異不顯著。

表2 大杯蕈白色變異菌株與大杯蕈營養(yǎng)成分比較

2.3 大杯蕈白色變異菌株菌絲生長適宜碳源

由圖2、圖3可見，在含有供試碳源培養(yǎng)基上，大杯蕈白色變異菌株菌絲均能生長，其中含果糖、麥芽糖、可溶性淀粉、蔗糖培養(yǎng)基上，菌絲潔白濃密，生長旺盛；含葡萄糖、乳糖培養(yǎng)基上，菌絲生長較弱。Tukey法多重比較分析結(jié)果表明，培養(yǎng)基碳源為可溶性淀粉、果糖、蔗糖、麥芽糖，與培養(yǎng)基碳源為葡糖糖、乳糖，菌絲平均生長速度差異極顯著。由此可見，大杯蕈白色變異菌株菌絲生長適宜碳源是可溶性淀粉、果糖、蔗糖、麥芽糖。

圖2 大杯蕈白色變異菌株在供試碳源培養(yǎng)基中菌絲生長速度

圖3 供試碳源培養(yǎng)基上大杯蕈白色變異菌株菌落（培養(yǎng)9 d）

2.4 大杯蕈白色變異菌株菌絲生長適宜氮源

由圖4、圖5可見，除尿素外，在含其他供試氮源培養(yǎng)基上，大杯蕈白色變異菌株菌絲均能生長。含蛋白胨、麩皮、酵母膏、牛肉膏培養(yǎng)基上，菌絲潔白致密、生長旺盛；含硝酸銨、硫酸銨培養(yǎng)基上，菌絲稀疏、生長較弱。Tukey法多重比較分析結(jié)果表明，含蛋白胨、麩皮培養(yǎng)基上，菌絲平均生長速度與其他氮源差異極顯著。由此可見，大杯蕈白色變異菌株菌絲生長最適宜氮源為蛋白胨、麩皮。

圖4 大杯蕈白色變異菌株在供試氮源培養(yǎng)基中菌絲生長速度

圖5 供試氮源培養(yǎng)基上大杯蕈白色變異菌株菌落（培養(yǎng)9 d）

2.5 大杯蕈白色變異菌株菌絲生長適宜溫度

由圖6、圖7可知，培養(yǎng)溫度在15~30℃，大杯蕈白色變異菌株菌絲均能生長。培養(yǎng)溫度15℃、18℃、21℃菌絲平均長速較慢，24℃、27℃、30℃菌絲生長濃密且生長快，33℃、36℃菌絲難生長甚至不生長。Tukey法多重比較分析結(jié)果表明，培養(yǎng)溫度為27℃、30℃時(shí)，菌絲平均長速與其他溫度處理差異極顯著。由此可見，大杯蕈變異菌株菌絲生長最適宜溫度為27~30℃。

圖6 不同培養(yǎng)溫度下大杯蕈白色變異菌株菌絲生長速度

圖7 不同培養(yǎng)溫度下大杯蕈白色變異菌株菌落（培養(yǎng)9 d）

2.6 大杯蕈白色變異菌株菌絲生長適宜p H

由圖8、圖9可知，當(dāng)培養(yǎng)基pH為4~10時(shí)，大杯蕈白色變異株菌絲均能生長；培養(yǎng)基的pH為6、7、8時(shí)菌絲濃密、生長快；pH為4、5、9時(shí)，菌絲生長較弱且慢；pH為10、11時(shí)，菌絲能萌發(fā)但難生長。培養(yǎng)基pH為7時(shí)菌絲平均生長速度與pH8差異不顯著，但與其他處理差異極顯著。由此可見，最適合大杯蕈白色變異株菌絲生長的培養(yǎng)基pH為7。

圖8 不同p H培養(yǎng)基上大杯蕈白色變異菌株菌絲生長速度

圖9 不同p H培養(yǎng)基上大杯蕈白色變異菌株菌落（培養(yǎng)9 d）

3 小結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，大杯蕈白色變異菌株菌絲生長適宜碳源為可溶性淀粉、果糖、蔗糖、麥芽糖；最適宜生長氮源是蛋白胨、麩皮，其次牛肉膏、酵母膏；菌絲生長適宜溫度是24~30℃，最適宜生長溫度為27~30℃；培養(yǎng)基適宜p H為6~8，最適pH為7。

大杯蕈白色變異菌株與原大杯蕈菌株在子實(shí)體形態(tài)和營養(yǎng)成分上有較大的差異，具有一定的特異性。

目前，栽培的大杯蕈品種常見的只有褐色或棕黃色，且子實(shí)體菌柄表層木質(zhì)化程度高，纖維多，可食用性差，只能丟棄，大大降低了商品產(chǎn)量；同時(shí)大杯蕈菌蓋呈傘狀或杯狀或漏斗狀，杯狀子實(shí)體菌蓋邊緣薄且脆、易碎。大杯蕈白色變異菌株正好彌補(bǔ)了傳統(tǒng)大杯蕈品種的缺陷，并豐富了大杯蕈種質(zhì)資源，有利于促進(jìn)大杯蕈新品種的選育和開發(fā)。