馮旭，何穎，陳松，陳大貴，彭偉彪，王婷，張建

隨著經濟的迅猛發(fā)展，人們的工作以及生活節(jié)奏加快， 越來越多的人出現了失眠的癥狀，關于失眠的流行病學調查顯示，有15%～35% 的成年人存在入睡困難、睡眠時長短等問題［1］。海軍官兵的睡眠問題更為嚴重，調查表明，艦艇航行1 個月后，潛艇官兵的匹茲堡睡眠質量指數總分（Pittsburgh sleep quality index，PSQI）、睡眠效率、睡眠質量和入睡時間分值均顯著升高［2］。長期的睡眠障礙，可以引起一系列機體功能的損害，導致作業(yè)功效下降。所以開發(fā)改善睡眠的藥物或功能食品，對提升潛艇官兵作業(yè)功效具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 ICR（institute of cancer research）小鼠180 只（雄性，4～6 周，卡文斯實驗動物有限公司），體重范圍：17～21 g，實驗動物許可證號：scxk（蘇）2016?0010。

1.1.2 藥品與試劑 恬夢復合植物固體飲料（5 g/袋，主要成分為酸棗仁粉、蘆筍粉、γ-氨基丁酸、茶葉茶氨酸、紅棗粉、低聚異麥芽糖等）、棗仁安神膠囊（貴州同濟堂制藥有限公司，0.45 g×20 粒）、戊巴比妥鈉和巴比妥鈉。戊巴比妥鈉和巴比妥鈉均為分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 動物適應飼養(yǎng)7 d，稱重，將180 只小鼠隨機分為3 個實驗組，每個實驗組60 只分別進行實驗1.2.4、1.2.5、1.2.6。以成人每日劑量5 g 恬夢復合植物固體飲料折合成動物實驗的中劑量組，分別將每個實驗組中的小鼠隨機分為低、中、高劑量組（0.5、1.0、2.0 g/kg，0.2 ml/10 g 體積的恬夢復合植物固體飲料灌胃）、陽性藥組（0.45 g/kg，棗仁安神膠囊配制成2.25 g/100 ml 的混懸液，0.2 ml/10 g 體積灌胃）和空白對照組（相同體積蒸餾水灌胃），每組12 只，所有小鼠每天灌胃1 次，共30 d。各組小鼠體重、周齡等經統(tǒng)計學檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。參照《保健食品檢驗和評價技術規(guī)范實施手冊》進行改善睡眠功效評價［3］。

1.2.2 藥物對小鼠體重的影響 選擇一個實驗組動物60 只，給藥前及給藥后每10 d 稱量各小鼠體重，觀察實驗藥物對小鼠體重的影響。

1.2.3 藥物對小鼠直接催眠作用 計算小鼠灌胃后30 min內，出現睡眠的小鼠數量。觀察各實驗藥物對小鼠有無直接催眠的作用（直接催眠判定標準：小鼠處于背臥位時，在60 s內未翻正）［3］。

1.2.4 延長小鼠因戊巴比妥鈉作用睡眠時長實驗［3］使用合適劑量戊巴比妥鈉催眠后，給予預定劑量的實驗藥物，觀察其是否具有延長睡眠時長的效果。睡眠時長增加，則說明實驗藥物對戊巴比妥鈉引發(fā)的睡眠具有協(xié)同作用。預實驗確定40 mg/kg 的戊巴比妥鈉能使動物全部入睡，且睡眠時間≤60 min。連續(xù)灌胃30 d，在最后一次給藥30 min 后，各組小鼠通過腹腔注射給予預定劑量戊巴比妥鈉（40 mg/kg，0.2 ml/10 g），翻正反射消失且維持60 s 以上作為小鼠入睡標準，觀察各實驗藥物對戊巴比妥鈉引起的睡眠時長影響。

1.2.5 小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗［3］觀察實驗藥物是否與戊巴比妥鈉具有協(xié)同作用。預實驗結果確定能使80%～90%小鼠不入睡的戊巴比妥鈉閾下劑量為25 mg/kg。連續(xù)灌胃30 d，最后一次給藥30 min 后，各組小鼠通過腹腔注射給予預定劑量戊巴比妥鈉（25 g/kg，0.2 ml/10 g）［3］，翻正反射消失作為小鼠入睡指標，觀察各實驗藥物對戊巴比妥鈉閾下劑量引起的小鼠睡眠時長影響。

1.2.6 小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗［3］使用合適劑量的巴比妥鈉催眠小鼠，觀察實驗藥物是否能夠縮短小鼠的入睡潛伏期（自給藥至翻正反射消失）。預實驗結果確定280 mg/kg的巴比妥鈉能使動物全部入睡，而睡眠時間≤60 min。連續(xù)灌胃30 d，在最后一次給藥30 min 后，各組小鼠通過腹腔注射給予預定劑量巴比妥鈉（280 g/kg，0.2 ml/10 g），翻正反射消失作為小鼠入睡指標，觀察實驗藥物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。

1.3 統(tǒng)計學處理

使用SPSS 24.0 統(tǒng)計軟件進行方差分析和多重比較，計量資料采用±s表示。計數資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各實驗藥物對小鼠體重的影響

各實驗藥物對小鼠體重無明顯影響（P＞0.05），且各組動物狀態(tài)良好。見表1。

表1 實驗藥物對小鼠體重的影響（g，± s，每組n=12）

表1 實驗藥物對小鼠體重的影響（g，± s，每組n=12）

注：與空白對照組比較P 均＞0.05

組別低劑量組中劑量組高劑量組陽性藥組空白對照組給藥30 d 36.3±1.0 36.0±1.5 35.2±1.6 36.6±1.1 36.3±1.3給藥前19.2±1.2 19.2±0.8 19.7±1.5 19.8±0.9 19.6±0.9給藥10 d 31.2±1.7 30.9±1.5 30.7±1.9 31.8±1.3 30.1±1.6給藥20 d 34.1±1.7 33.5±1.7 34.0±1.5 33.7±1.1 33.1±1.3

2.2 直接睡眠作用

各組動物灌胃給藥30 min 后，所有小鼠均未入睡，說明實驗藥物對小鼠并無直接催眠作用，符合《保健食品檢驗和評價技術規(guī)范實施手冊》中改善睡眠保健食品的要求，可進行后面3 項實驗［3］。

2.3 延長小鼠因戊巴比妥鈉作用睡眠時長實驗

不間斷給藥30 d 后，中劑量（1 g/kg）、高劑量（2 g/kg）組和陽性藥物組的動物睡眠時長比空白對照組顯著增加（P＜0.05），表明足量的實驗藥物能夠延長因戊巴比妥鈉引起的小鼠睡眠時長。見表2。

表2 實驗藥物對延長戊巴比妥鈉睡眠時長的影響（s，± s）

表2 實驗藥物對延長戊巴比妥鈉睡眠時長的影響（s，± s）

注：與空白對照組比較aP＜0.05，bP＜0.01

組別低劑量組中劑量組高劑量組陽性藥組空白對照組睡眠時間1 815.2±291.0 2 249.8±352.3b 2 049.5±105.2a 2 270.4±484.6b 1 522.1±637.7小鼠數12 12 12 12 12戊巴比妥鈉（mg/kg）40 40 40 40 40

2.4 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗

實驗藥物各劑量對小鼠入睡率的影響比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 實驗藥物對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的影響［只（%）］

2.5 巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗

中劑量（1 g/kg）和高劑量（2 g/kg）的實驗藥物對小鼠睡眠潛伏期有明顯縮短作用（P＜0.05），陽性藥物組對小鼠睡眠潛伏期也有著相同的效果（P＜0.01），結果表明實驗藥物能夠縮短巴比妥鈉催眠下的小鼠睡眠潛伏期。見表4。

表4 實驗藥物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響（s，± s）

表4 實驗藥物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響（s，± s）

注：與空白對照組比較aP＜0.05,bP＜0.01

組別低劑量組中劑量組高劑量組陽性藥組空白對照組睡眠時間748.5±253.2 696.7±216.1a 739.8±130.5a 645.9±220.3b 873.6±167.6小鼠數12 12 12 12 12巴比妥鈉（g/kg）280 280 280 280 280

4 討論

恬夢復合植物固體飲料含有酸棗仁粉、蘆筍粉、γ-氨基丁酸和茶葉茶氨酸等成分，酸棗仁是我國傳統(tǒng)中藥，是具有明顯改善睡眠作用的藥食兩用藥物，酸棗仁中的黃酮類中成分對小鼠具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用，多糖成分則明顯降低了小鼠的自主活動性［4?5］。蘆筍粉對存在睡眠障礙的人群有良好的改善作用，不僅增加有效睡眠時長，還可以縮短驚醒后的再入睡時長，其可能的機制是調節(jié)HPA 軸或5-羥色胺分泌相關［6?7］。γ-氨基丁酸和茶氨酸為新資源食品，γ-氨基丁酸是一種存在于人體和自然界的非蛋白質氨基酸，在中樞神經系統(tǒng)中有著抑制性神經遞質的作用，在睡眠覺醒中也起著重要作用［8］。焦躁、不安、疲勞、憂郁、失眠等不適癥狀會伴隨著γ-氨基丁酸的缺失出現于人體［9?10］，研究表明，γ-氨基丁酸可以延長睡眠時間、增加閾下劑量入睡動物數量［11］。茶氨酸是茶葉中的一種游離氨基酸，具有鎮(zhèn)靜安神、抗疲勞、提高記憶力等功效，也具有顯著改善睡眠的功效［12］。以上多種成分，改善睡眠的機制不盡相同，通過合理復配，可以更好地達到改善睡眠的功效。

研究表明恬夢復合植物固體飲料灌胃給予30 d，對小鼠體重無影響。恬夢復合植物固體飲料低、中、高劑量均無直接促進小鼠睡眠的作用。在延長因戊巴比妥鈉引起的睡眠時間實驗中，中劑量和高劑量組的實驗藥物可以顯著增加小鼠的睡眠時長，表明實驗藥物對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠具有協(xié)同作用。在巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗中，中劑量和高劑量的實驗藥物顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期。根據《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》的要求［3］，上述3 項實驗中，延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗和巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗結果陽性，可判定恬夢復合植物固體飲料具有改善睡眠功能的作用。