楊 洋，包昌杰，李柯欣，潘 瑩，王馨鈺，方國(guó)權(quán)，陳 歡，張斯童，陳 光，王 剛*

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 秸稈生物學(xué)與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林 長(zhǎng)春 130118；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130118）

耐低溫微生物是指能夠長(zhǎng)期生活在寒冷環(huán)境中，并正常生長(zhǎng)繁殖的微生物，它們?cè)诘蜏丨h(huán)境中仍然具有高效的物質(zhì)吸收和轉(zhuǎn)化能力，對(duì)低溫環(huán)境中的能量與物質(zhì)循環(huán)起著至關(guān)重要的作用，擁有很強(qiáng)的生物技術(shù)應(yīng)用價(jià)值[1-3]。耐低溫微生物已廣泛應(yīng)用于環(huán)境凈化、污水處理、秸稈還田及生物堆肥等領(lǐng)域[4-7]。尤其是隨著東北地區(qū)有機(jī)廢物處理和利用問(wèn)題的凸顯，低溫菌微生物得到了日益廣泛的關(guān)注。

目前，在真菌、藍(lán)細(xì)菌、細(xì)菌、酵母菌及藻類等各種類群中均有耐冷菌被發(fā)現(xiàn)，真菌主要有酵母屬（Saccharomyces）、毛霉屬（Mucor）、青霉菌屬（Penicillium）[8]；細(xì)菌主要有假單胞菌屬（Pseudomonas）、微小桿菌屬（Exiguobacterium）[9]等。關(guān)于耐冷菌的耐冷機(jī)制已有相關(guān)研究，郭曉涵[10]研究發(fā)現(xiàn)，南極海洋細(xì)菌Poseidonibacter antarcticusSM1702～T通過(guò)調(diào)整細(xì)胞膜流動(dòng)性提高低溫耐受性；楊勝平等[11]研究發(fā)現(xiàn)，希瓦氏菌（Shewanella）DSM6067在低溫生長(zhǎng)過(guò)程中，細(xì)胞膜不飽和脂肪酸含量顯著增加；楊墨[12]明確了耐冷菌詹森菌屬（Janthinobacterium）M-11通過(guò)抗凍蛋白降低細(xì)胞催化過(guò)程所需催化能，進(jìn)一步提高細(xì)菌在低溫下的活性；儲(chǔ)建軍[13]研究發(fā)現(xiàn)，冰溫?；顥l件下縊蟶優(yōu)勢(shì)腐敗菌通過(guò)分泌低溫酶保持活性；黎浩揚(yáng)[14]研究發(fā)現(xiàn)，蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）D2通過(guò)過(guò)量表達(dá)冷休克蛋白提高菌體的低溫耐受能力。雖然人們對(duì)于低溫菌的耐受機(jī)理及應(yīng)用已研究多年，但其耐低溫機(jī)制尚不明確，限制其應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。此外，現(xiàn)有的耐低溫菌產(chǎn)品不能滿足人們對(duì)自然環(huán)境治理、低溫帶秸稈還田及相關(guān)工業(yè)應(yīng)用的需要。因此，研究耐冷菌耐冷機(jī)制以及應(yīng)用十分重要。

本研究以長(zhǎng)白山（常年被雪覆蓋）的苔原帶土樣中篩選到的一株耐低溫菌株7a-3為研究對(duì)象，采用形態(tài)觀察、生理生化試驗(yàn)及分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行菌種鑒定，并對(duì)其低溫生長(zhǎng)特性及耐低溫機(jī)理進(jìn)行初步研究，以期開(kāi)發(fā)工業(yè)生產(chǎn)菌種，提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

1.1.1 菌株

耐低溫菌株7a-3：分離自長(zhǎng)白山（常年被雪覆蓋）的苔原帶（東經(jīng)127°50′，北緯41°55′）土樣。

1.1.2 試劑

37種脂肪酸甲酯混標(biāo)：上海源葉生物科技有限公司；無(wú)水乙醇、氯化鈉、過(guò)氧化氫、可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；α-萘酚、甲基紅、溴百里酚藍(lán)：上海麥克林生化科技有限公司；甲醇、吐溫80、吐溫60、司班80（均為分析純）：天津市大茂化學(xué)試劑場(chǎng)；十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）、乙二胺四乙酸二鈉（ethylene diamine tetraacetic acid-2Na，EDTA-2Na）、硬脂酸鈉、聚乙烯醇（均為分析純）：西隴科學(xué)股份有限公司；細(xì)菌基因組脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）提取試劑盒：天根生化科技（北京）有限公司。

1.1.3 培養(yǎng)基

胰酪大豆胨（tryptic soy broth，TSB）液體培養(yǎng)基[15]：TSB 30 g，蒸餾水1 000 mL，121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。TSB固體培養(yǎng)基中添加瓊脂18～20 g。

LB液體培養(yǎng)基[15]：酵母粉5 g，蛋白胨10 g，NaCl 10 g，蒸餾水1 000 mL，121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。LB固體培養(yǎng)基中添加瓊脂18～20 g。

1.2 儀器與設(shè)備

XB 220A分析天平：瑞士Precisa公司；THZ-82A電子恒溫水浴鍋：金壇市科析儀器有限公司；DK-98-II電子恒溫水浴鍋：天津市泰斯特儀器有限公司；SW-CJ-2D型紫外超凈工作臺(tái)：江蘇蘇凈集團(tuán)有限公司；2-16KL低溫高速離心機(jī)：美國(guó)SIGMA公司；FLUOstar Omega酶標(biāo)儀：美國(guó)Omega公司；NikonDS-Ri2顯微鏡：德國(guó)Nikon公司；XL-30 ESEM FEG掃描電鏡：美國(guó)FEI公司；7890A氣相色譜（gas chromatography，GC）儀：美國(guó)安捷倫公司；HZQ-F160振蕩培養(yǎng)箱：哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；ABI ProFlexTM梯度聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增儀：美國(guó)ABI公司。

1.3 方法

1.3.1 耐低溫菌株7a-3的鑒定

（1）形態(tài)觀察

菌落形態(tài)：菌落形態(tài)觀察按照郭曉涵[10]的方法進(jìn)行；革蘭氏染色：按照朱艷蕾[16]的方法進(jìn)行；掃描電鏡分析：依據(jù)王瑩等[17]的方法進(jìn)行。

（2）生理生化試驗(yàn)

按照黃秀梨等[18-19]的方法對(duì)耐低溫菌株7a-3進(jìn)行V-P反應(yīng)、甲基紅試驗(yàn)、淀粉水解試驗(yàn)、7%NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、糖、醇發(fā)酵試驗(yàn)。

（3）分子生物學(xué)鑒定

采用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取耐低溫菌株7a-3的基因組DNA，交由上海生工生物工程有限公司進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測(cè)序。將所測(cè)序結(jié)果提交至美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心（national center for biotechnology information，NCBI）的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中，采用基本局部比對(duì)搜索工具（basic local alignment search tool，BLAST）進(jìn)行比對(duì)搜索，選取同源性較高的模式菌株的16S rRNA，采用MEGA 5.0軟件中的鄰接（neighbor joining，NJ）法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.3.2 不同培養(yǎng)溫度下菌株7a-3的生長(zhǎng)情況

將菌株7a-3接種于LB固體培養(yǎng)基，25 ℃條件下培養(yǎng)，待有單菌落出現(xiàn)后挑取單菌落于LB液體培養(yǎng)基中，25 ℃、180 r/min培養(yǎng)，采用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)600 nm處測(cè)定OD600nm值為0.8～1.0之間時(shí)，菌株處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，活力最好。

將活化好的菌株7a-3按1%（V/V）的接種量接種于LB液體培養(yǎng)基，分別置于4 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、31 ℃、32 ℃、33 ℃，180 r/min條件下培養(yǎng)，每2 h取樣，采用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)600 nm處測(cè)定OD600nm值，以培養(yǎng)時(shí)間（x）為橫坐標(biāo)，OD600nm值（y）為縱坐標(biāo)繪制生長(zhǎng)曲線。

1.3.3 表面活性劑對(duì)菌株7a-3在37 ℃條件下生長(zhǎng)的影響

將吐溫80、Span80、吐溫60、SDS、EDTA、硬脂酸鈉、聚乙烯醇按1%添加量添加于LB液體培養(yǎng)基中，將活化好的菌株7a-3按1%（V/V）的接種量接種于LB液體培養(yǎng)基中，37 ℃、180 r/min條件下培養(yǎng)，觀察其生長(zhǎng)情況。

1.3.4 無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)菌株7a-3在37 ℃條件下生長(zhǎng)的影響

將活化好的菌株7a-3按1%（V/V）的接種量接種于LB液體培養(yǎng)基中，25 ℃條件下培養(yǎng)24 h后，培養(yǎng)液過(guò)濾除菌，得到的濾液命名為無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液。按照5%（V/V）的比例將無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液加入LB液體培養(yǎng)基中作為試驗(yàn)組，按照5%（V/V）比例將LB液體培養(yǎng)基加入LB液體培養(yǎng)基中作為對(duì)照組，按照1%（V/V）的接種量接種菌株7a-3，37 ℃、180 r/min條件下培養(yǎng)，每12 h取樣，測(cè)定OD600nm值，考察添加無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)菌株7a-3生長(zhǎng)的影響。

1.3.5 不同培養(yǎng)溫度下菌株7a-3細(xì)胞膜脂肪酸成分及含量分析

按照任文靜[20]的方法提取不同培養(yǎng)溫度下菌株7a-3細(xì)胞膜的脂肪酸，采用GC法測(cè)定脂肪酸組成及含量[21-22]。

氣相色譜條件：載氣為高純氮?dú)猓∟2），流速1.0 mL/min，HP-88毛細(xì)管色譜柱（100 m×0.25 mm，0.20 μm），進(jìn)樣口溫度250 ℃，檢測(cè)器溫度260 ℃，分流比30∶1，進(jìn)樣體積5 μL。升溫程序?yàn)?40 ℃保持5 min，4 ℃/min升溫到240 ℃，保持30 min。

定性定量方法：參照標(biāo)準(zhǔn)品和碳鏈長(zhǎng)度值確定脂肪酸種類，對(duì)各組分峰面積積分，歸一化法分析計(jì)算各脂肪酸組分的相對(duì)百分含量。

1.3.6 不同培養(yǎng)溫度下菌株7a-3細(xì)胞膜形態(tài)的比較

收集各培養(yǎng)溫度（4 ℃、30 ℃、37 ℃（按照1.3.4中方法培養(yǎng)））下菌株7a-3的菌體，采用掃描電鏡觀察細(xì)胞膜形態(tài)[23]。

1.3.7 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用Excel 2016、Origin 9.5軟件繪制數(shù)據(jù)圖表。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株7a-3的鑒定

2.1.1 形態(tài)觀察

由圖1可知，菌株7a-3的菌落為圓形、白色、不透明、中間凸起、邊緣光滑；革蘭氏染色結(jié)果呈陰性；細(xì)胞呈短桿狀，大小約為0.5 μm×2 μm。

圖1 菌株7a-3的菌落（A）及細(xì)胞（B、C）形態(tài)Fig. 1 Colony (A) and cell (B,C) morphology of strain 7a-3

2.1.2 生理生化試驗(yàn)結(jié)果

菌株7a-3的生理生化試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，菌株7a-3在7%氯化鈉培養(yǎng)基中不生長(zhǎng)，V-P試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性，甲基紅試驗(yàn)結(jié)果呈陰性，表明該菌株能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，但不能進(jìn)一步分解，不可產(chǎn)生乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物。過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性，說(shuō)明其并不能產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶。糖、醇發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株7a-3可發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、淀粉、甘露醇產(chǎn)酸使培養(yǎng)基變黃，但利用能力有強(qiáng)有弱。其中對(duì)葡萄糖的利用能力最強(qiáng)，麥芽糖和淀粉次之，對(duì)于蔗糖和甘露醇的利用能力最差。根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，初步鑒定該菌株為假單胞菌屬（Pseudomonassp.）。

表1 菌株7a-3的生理生化試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Physiological and biochemical test results of strain 7a-3

2.1.3 分子生物學(xué)鑒定

基于16S rDNA基因序列菌株7a-3的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)見(jiàn)圖2。

圖2 基于16S rDNA基因序列菌株7a-3的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig. 2 Phylogenetic tree of strain 7a-3 based on 16S rDNA gene sequences

由圖2可知，菌株7a-3與莓實(shí)假單胞菌（Pseudomonas fragi）ATCC 4973聚于一支，親緣關(guān)系最近。結(jié)合形態(tài)觀察及生理生化試驗(yàn)結(jié)果，鑒定菌株7a-3為莓實(shí)假單胞菌（Pseudomonas fragi）。

2.2 不同培養(yǎng)溫度下莓實(shí)假單胞菌7a-3的生長(zhǎng)情況

不同培養(yǎng)溫度下莓實(shí)假單胞菌7a-3的生長(zhǎng)曲線見(jiàn)圖3。

由圖3可知，莓實(shí)假單胞菌7a-3在4～33 ℃條件下均能生長(zhǎng)，且在4～30 ℃范圍內(nèi)隨著培養(yǎng)溫度的升高，OD600nm值越高，生長(zhǎng)情況越好，最適生長(zhǎng)溫度為30 ℃；當(dāng)培養(yǎng)溫度在30～33 ℃范圍內(nèi)隨著培養(yǎng)溫度的升高，OD600nm值降低；當(dāng)培養(yǎng)溫度高于33 ℃之后，莓實(shí)假單胞菌不能生長(zhǎng)。

2.3 表面活性劑對(duì)莓實(shí)假單胞菌7a-3在37 ℃條件下生長(zhǎng)的影響

有文獻(xiàn)報(bào)道，表面活性劑可改變微生物生理學(xué)性質(zhì)、細(xì)胞脂肪酸組分和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，有利于胞內(nèi)產(chǎn)物的外排和菌體對(duì)周圍營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收[24-28]。添加表面活性劑（吐溫80、Span80、吐溫60、SDS、乙二胺四乙酸二鈉、硬脂酸鈉、聚乙烯醇）對(duì)莓實(shí)假單胞菌7a-3在37 ℃條件下的生長(zhǎng)情況無(wú)改善作用，說(shuō)明該菌株在37 ℃不能生長(zhǎng)與細(xì)胞膜通透性變化無(wú)關(guān)。

2.4 無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)莓實(shí)假單胞菌7a-3在37 ℃條件下生長(zhǎng)的影響

為明確莓實(shí)假單胞菌7a-3在37 ℃條件下不能生長(zhǎng)的機(jī)理，考察無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)莓實(shí)假單胞菌7a-3在37 ℃條件下生長(zhǎng)的影響，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)莓實(shí)假單胞菌7a-3在37 ℃條件下生長(zhǎng)的影響Fig. 4 Effect of cell-free medium on the growth of Pseudomonas fragi 7a-3 at 37 ℃

由圖4可知，添加無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液后，莓實(shí)假單胞菌7a-3在37 ℃恢復(fù)生長(zhǎng)能力，說(shuō)明無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液中含有維持菌株生長(zhǎng)的生長(zhǎng)因子，該物質(zhì)是隨著菌株在低溫下生長(zhǎng)逐漸產(chǎn)生的。延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間后又停止生長(zhǎng)，說(shuō)明37 ℃條件下，菌株生長(zhǎng)不能產(chǎn)生該生長(zhǎng)因子。由此說(shuō)明，菌株37 ℃與適宜溫度下培養(yǎng)，菌株體內(nèi)的代謝途徑是不同的。研究結(jié)果也表明，可通過(guò)控制生長(zhǎng)因子添加來(lái)調(diào)控該菌株在37 ℃條件下的生長(zhǎng)情況。

2.5 不同培養(yǎng)溫度下莓實(shí)假單胞菌7a-3細(xì)胞膜脂肪酸的變化

不同培養(yǎng)溫度下莓實(shí)假單胞菌7a-3細(xì)胞膜脂肪酸類型的變化規(guī)律見(jiàn)圖5，脂肪酸種類及相對(duì)含量變化規(guī)律見(jiàn)圖6。

圖5 不同培養(yǎng)溫度下莓實(shí)假單胞菌7a-3細(xì)胞膜脂肪酸類型變化規(guī)律Fig. 5 Changes of fatty acid types in cell membrane of Pseudomonas fragi 7a-3 under different culture temperatures

圖6 不同培養(yǎng)溫度下莓實(shí)假單胞菌7a-3細(xì)胞膜脂肪酸種類及相對(duì)含量的變化Fig. 6 Changes of type and relative content of fatty acids in cell membrane of Pseudomonas fragi 7a-3 under different culture temperatures

由圖5可知，莓實(shí)假單胞菌7a-3在4 ℃、30 ℃、37 ℃三個(gè)培養(yǎng)溫度下，細(xì)胞膜不飽和脂肪酸的相對(duì)含量呈先下降后上升的趨勢(shì)，其中單不飽和脂肪酸相對(duì)含量較多且變化量較大，對(duì)細(xì)胞膜不飽和脂肪酸相對(duì)含量影響較大。綜上所述，說(shuō)明莓實(shí)假單胞菌7a-3適應(yīng)低溫與高溫條件都有細(xì)胞膜不飽和脂肪酸種類及相對(duì)含量變化發(fā)揮作用，而其中發(fā)揮主要作用的為單不飽和脂肪酸的種類及相對(duì)含量變化。張曉雙[21]研究表明，不飽和脂肪酸的增加可以增加細(xì)胞膜流動(dòng)性，初步推測(cè)莓實(shí)假單胞菌7a-3的耐低溫能力與細(xì)胞膜不飽和脂肪酸相對(duì)含量增加導(dǎo)致細(xì)胞膜流動(dòng)性增強(qiáng)相關(guān)。

由圖6可知，莓實(shí)假單胞菌7a-3在不同培養(yǎng)溫度下細(xì)胞膜脂肪酸種類有所變化，37 ℃培養(yǎng)條件下相比于30 ℃培養(yǎng)條件下，細(xì)胞膜脂肪酸種類主要從長(zhǎng)鏈脂肪酸向短鏈脂肪酸轉(zhuǎn)變，在此過(guò)程中不飽和脂肪酸的相對(duì)含量也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，其中增加最為明顯的為（C12：0）月桂酸、（C15：1）順-10-十五烷酸、（C16：1）棕櫚油酸、（C17：1）順-10-十七烯酸，其中（C12：0）月桂酸的相對(duì)含量由1.78%增加為7.67%，（C15：1）順-10-十五烷酸的相對(duì)含量由15.51%增加為23.78%，（C16：1）棕櫚油酸的相對(duì)含量由0.97%增加為8.71%，（C17：1）順-10-十七烯酸的相對(duì)含量由1.93%增加為20.98%。4 ℃培養(yǎng)條件下相比于30 ℃培養(yǎng)條件下，細(xì)胞膜脂肪酸種類由長(zhǎng)鏈脂肪酸向短鏈脂肪酸轉(zhuǎn)化，在此過(guò)程中不飽和脂肪酸總相對(duì)含量也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，其中增加最為明顯的為（C12：0）月桂酸、（C16：1）棕櫚油酸、（C18：1n9c）油酸、（C18：2n6t）亞油酸，其中（C12：0）月桂酸的相對(duì)含量由1.78%增加為8.98%，（C16：1）棕櫚油酸的相對(duì)含量由0.97%增加為12.97%，（C18：1n9c）油酸的相對(duì)含量由0.94%增加為6.99%，（C18：2n6t）亞油酸的相對(duì)含量由0.44%增加為6.45%。說(shuō)明莓實(shí)假單胞菌7a-3適應(yīng)低溫條件有細(xì)胞膜脂肪酸種類及相對(duì)含量變化發(fā)揮作用。

2.6 不同培養(yǎng)溫度下莓實(shí)假單胞菌7a-3的細(xì)胞膜形態(tài)

由圖7可知，30 ℃培養(yǎng)條件下莓實(shí)假單胞菌7a-3的細(xì)胞膜比4 ℃培養(yǎng)條件下的細(xì)胞膜光滑，在4 ℃條件下培養(yǎng)時(shí)，莓實(shí)假單胞菌7a-3生長(zhǎng)受到抑制，細(xì)胞膜出現(xiàn)的褶皺使其比表面積增大，有利于物質(zhì)代謝以及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。而在30 ℃條件下培養(yǎng)時(shí)，細(xì)菌處于適宜溫度下，生長(zhǎng)代謝并未受到抑制，因此細(xì)胞膜變得較為平滑，其比表面積相對(duì)較小。在37 ℃條件下培養(yǎng)時(shí)，細(xì)菌的生長(zhǎng)代謝減慢，細(xì)菌通過(guò)形態(tài)變化減少細(xì)胞膜比表面積，從而減少物質(zhì)出入細(xì)胞膜消耗能量，進(jìn)而減少不必要的能量消耗。且從表觀上看，相比于30 ℃培養(yǎng)條件下，4 ℃與37 ℃培養(yǎng)條件下細(xì)胞膜均較為粗糙，與2.5節(jié)中細(xì)胞膜不飽和脂肪酸增加的結(jié)果相互印證。

圖7 不同培養(yǎng)溫度下莓實(shí)假單胞菌7a-3細(xì)胞膜的形態(tài)Fig. 7 Morphology of cell membrane of Pseudomonas fragi 7a-3 under different culture temperatures

3 結(jié)論

采用形態(tài)觀察、生理生化試驗(yàn)及分子生物學(xué)技術(shù)鑒定菌株7a-3為莓實(shí)假單胞菌（Pseudomonas fragi），其生長(zhǎng)溫度范圍為4～33 ℃，最適生長(zhǎng)溫度為30 ℃，表面活性劑不能促進(jìn)該菌株在37 ℃條件下生長(zhǎng)，其自身低溫發(fā)酵代謝物可促進(jìn)該菌在37 ℃條件下生長(zhǎng)。相對(duì)于30 ℃，4 ℃條件下，菌株7a-3細(xì)胞膜的脂肪酸種類由長(zhǎng)鏈脂肪酸向短鏈脂肪酸轉(zhuǎn)化，不飽和脂肪酸的相對(duì)含量增加，且單不飽和脂肪酸相對(duì)含量的變化較大，細(xì)胞膜較為粗糙，初步推測(cè)其耐低溫能力與細(xì)胞膜不飽和脂肪酸含量增加導(dǎo)致細(xì)胞膜流動(dòng)性增強(qiáng)相關(guān)。