王 燕, 舒鳳玲, 陳東月, 王亞軍, 解家松, 周素明

銀鯧脾臟和腎臟組織細(xì)胞體外培養(yǎng)研究

王 燕, 舒鳳玲, 陳東月, 王亞軍, 解家松, 周素明*

（寧波大學(xué) 海洋學(xué)院, 浙江 寧波 315832）

為探究銀鯧脾臟和腎臟組織細(xì)胞體外培養(yǎng)條件, 本研究采用組織塊培養(yǎng)法對銀鯧脾臟和腎臟組織進(jìn)行原代培養(yǎng). 實(shí)驗選用DMEM/F-12、M199和DMEM等作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基, 在其中分別添加體積分?jǐn)?shù)為10％、15％、20％的胎牛血清, 并添加青鏈霉素及慶大霉素以防細(xì)菌污染. 結(jié)果表明: 銀鯧脾臟和腎臟組織在胎牛血清體積分?jǐn)?shù)為20％的DMEM/F-12培養(yǎng)基中貼壁最好, 遷出細(xì)胞的種類最多, 細(xì)胞生長速度最快. 其中脾臟組織共遷出6種不同的細(xì)胞, 分別為: 免疫細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、上皮樣細(xì)胞、成纖維樣細(xì)胞、造血灶和未知細(xì)胞; 腎臟組織共遷出3種細(xì)胞, 分別為: 上皮樣細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和成纖維樣細(xì)胞.

銀鯧; 脾臟; 腎臟; 細(xì)胞培養(yǎng)

銀鯧()屬鱸形目(Perciformes)、鯧科(Stromateidae)、鯧屬(), 是我國沿海重要的經(jīng)濟(jì)魚類之一, 主要分布于東海、南海、黃海、渤海等地區(qū). 由于銀鯧刺少、肉質(zhì)細(xì)膩鮮美, 深受消費(fèi)者的喜愛, 其市場需求量不斷增大. 隨著野生銀鯧資源逐年減少, 以及我國禁漁期制度的執(zhí)行, 捕撈銀鯧已經(jīng)無法滿足市場的需求[1-2]. 因此, 銀鯧的人工養(yǎng)殖及苗種繁育受到有關(guān)研究者的極大關(guān)注, 許多研究團(tuán)隊已開展銀鯧人工繁殖的相關(guān)研究. 近些年, 銀鯧的繁育及全人工養(yǎng)殖技術(shù)在寧波地區(qū)取得了重大突破[3-6], 但由于馴化時間短、養(yǎng)殖環(huán)境與野生環(huán)境存在較大差異等原因, 導(dǎo)致人工養(yǎng)殖的銀鯧對環(huán)境中的病原微生物易感, 養(yǎng)殖過程中銀鯧疾病頻繁發(fā)生, 已成為銀鯧養(yǎng)殖業(yè)亟待解決的問題[1].

細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法的重要手段之一, 是推動生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)展的重要技術(shù). 水產(chǎn)動物的細(xì)胞培養(yǎng)始于20世紀(jì)60年代, 最早被用于水產(chǎn)動物病毒的分離與純化, 該技術(shù)對水產(chǎn)動物的疾病防治有著重大貢獻(xiàn)[7-8]. Wolf和Quimby于1962年建立了世界上第一株魚類細(xì)胞系–—虹鱒生殖腺細(xì)胞系(Rainbow Trout Gonadal Cell, RTG-2)[9]. 目前, 已建立的魚類細(xì)胞系至少550株以上, 其材料主要源自魚類的鰭、肌肉、表皮、腎臟、脾臟等不同組織. 隨著魚類細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究的深入, 其應(yīng)用范圍也從最初的病毒分離純化擴(kuò)展到魚類的生理學(xué)、免疫學(xué)和病害防治等方面[10-11]. 脾臟和腎臟是魚類重要的免疫造血器官, 在抵抗外來抗原的免疫調(diào)節(jié)過程中起到重要作用[12]. 目前已經(jīng)有多種魚類, 如草魚()、花鱸()、赤點(diǎn)石斑魚()、斑點(diǎn)叉尾()、松江鱸()、大黃魚()、羅非魚()等建立了脾臟及腎臟組織來源的細(xì)胞系[13-19]. 上述細(xì)胞系的建立為魚類免疫及病毒性疾病的致病機(jī)理等基礎(chǔ)研究提供了培養(yǎng)簡單、遺傳穩(wěn)定的細(xì)胞模型和材料.

隨著銀鯧人工繁育及養(yǎng)殖技術(shù)的突破, 養(yǎng)殖銀鯧的商業(yè)化道路已成為必然. 但目前對銀鯧生理、遺傳、營養(yǎng)及疾病等基礎(chǔ)研究仍較為匱缺.

本文以銀鯧脾臟、腎臟組織為研究材料, 通過組織塊培養(yǎng)方法, 探索其離體培養(yǎng)條件, 旨在為銀鯧脾臟、腎臟組織來源細(xì)胞系的建立及后續(xù)生理學(xué)、免疫學(xué)和病害防治等研究提供參考.

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗材料

實(shí)驗銀鯧購自寧波市象山港灣水產(chǎn)苗種有限公司, 體長(8±2)cm, 體質(zhì)量(5.0±2.5)g.

主要試劑: DMEM(HyClone)、M199(HyClone)、DMEM/F-12(HyClone); 0.25％胰酶(含EDTA)、雙抗(青霉素100IU·mL-1、鏈霉素100μg·mL-1);胎牛血清(FBS); 100mg慶大霉素; 25mg可溶性兩性霉素B, 以上試劑均購自寧波鎮(zhèn)海百川生物科技有限公司.

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基的配制

在3種培養(yǎng)液(DMEM/F-12、M199、DMEM)中分別添加10％、15％、20％胎牛血清, 50mg·mL-1慶大霉素、可溶性兩性霉素B(3mg·mL-1)、100IU·mL-1青鏈霉素混合液配制成完全培養(yǎng)基.

1.2.2 組織分離及處理

將銀鯧置于已消毒的托盤中, 用75％乙醇對銀鯧進(jìn)行體表消毒, 然后斷尾放血, 移至超凈臺中, 用彎頭鑷子將銀鯧的脾臟和腎臟取出, 置于裝有2mL含抗生素(終質(zhì)量濃度為100IU·mL-1的青鏈霉素混合液和100mg·mL-1慶大霉素、3mg·mL-1可溶性兩性霉素B)的PBS的EP管中漂洗3次, 每次5min, 棄漂洗液; 然后分別加入1mL DMEM、M199、DMEM/F-12(添加終質(zhì)量濃度為100IU·mL-1的青鏈霉素混合液和100mg·mL-1慶大霉素、3mg·mL-1可溶性兩性霉素B)3種培養(yǎng)基進(jìn)行消毒30min; 最后用剪刀將組織碎剪成1mm3組織塊, 用上述3種培養(yǎng)基清洗2次, 每次5min.

1.2.3 腎臟和脾臟組織的原代培養(yǎng)

將經(jīng)處理的組織細(xì)胞液(DMEM、M199、DMEM/F-12分別添加0.5％胎牛血清、終質(zhì)量濃度100IU·mL-1的青鏈霉素混合液和100mg·mL-1慶大霉素)重懸后均勻接種于25cm2培養(yǎng)瓶中, 貼壁4h后分別添加3mL DMEM、M199、DMEM/F-12培養(yǎng)基(添加20％胎牛血清、終質(zhì)量濃度100IU·mL-1的青鏈霉素混合液和100mg·mL-1慶大霉素), 并正置于26℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng). 隨后在倒置顯微鏡下觀察并記錄. 根據(jù)細(xì)胞的遷出及生長狀況, 每2～3d更換一半培養(yǎng)基.

2 結(jié)果

2.1 培養(yǎng)基對銀鯧脾臟、腎臟組織細(xì)胞原代培養(yǎng)的影響

銀鯧脾臟和腎臟組織細(xì)胞原代培養(yǎng)的實(shí)驗結(jié)果見表1. 從表1可知, 在添加20％胎牛血清的3種基礎(chǔ)培養(yǎng)基中, 銀鯧脾臟和腎臟的組織塊邊緣都有細(xì)胞遷出, 其中DMEM和M199兩種培養(yǎng)基中組織細(xì)胞遷出數(shù)量少、鋪瓶率較低. 在隨后培養(yǎng)過程中, 2種組織的組織塊不會脫落, 但無細(xì)胞遷出; 而DMEM/F-12基礎(chǔ)培養(yǎng)基中脾臟和腎臟組織塊遷出細(xì)胞數(shù)量較多、鋪瓶率高, 而且細(xì)胞的生長效果最好.

表1 銀鯧脾臟、腎臟細(xì)胞原代培養(yǎng)基篩選

2.2 脾臟組織塊遷出細(xì)胞形態(tài)和造血灶的產(chǎn)生

脾臟組織塊接種貼壁5d后, 在添加20％FBS的DMEM/F-12培養(yǎng)基中大量細(xì)胞從組織塊邊緣遷出, 并且呈放射狀排列在組織塊周圍, 按其形態(tài)和遷出順序可以分為6種細(xì)胞(圖1).

(1)A型細(xì)胞: 組織塊接種貼壁后, 一些貼壁的植塊在啟動培養(yǎng)的第3天, 最先遷出少量全體通透的圓形(直徑約10μm)或橢圓形細(xì)胞(圖1(a)). 細(xì)胞個體多數(shù)較小, 細(xì)胞核清晰, 可以貼壁, 但貼壁不牢固. 培養(yǎng)第5天觀察到部分細(xì)胞呈現(xiàn)橢圓形并伴有偽足生長, 遷出一些呈現(xiàn)馬蹄形和三角形的細(xì)胞. (2)B型細(xì)胞: DMEM/F-12培養(yǎng)基中培養(yǎng)到第8 天, 觀察到B型細(xì)胞從一些組織塊邊緣遷出(圖1(b)). 這些細(xì)胞排列不均勻, 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在大量黑色顆粒物質(zhì), 在細(xì)胞培養(yǎng)瓶底部以多層交叉網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)存在, 細(xì)胞層質(zhì)密、細(xì)胞貼壁牢固, 當(dāng)細(xì)胞合成大片細(xì)胞層時在貼壁牢固的細(xì)胞層上出現(xiàn)一些零散的圓形細(xì)胞. (3)C型細(xì)胞: 在啟動培養(yǎng)到第12天觀察到C型細(xì)胞, 該細(xì)胞貼壁較牢固, 細(xì)胞形態(tài)為多角形、扁平狀, 細(xì)胞排列緊密, 胞體內(nèi)存在大量顆粒狀物質(zhì), 細(xì)胞核不易辨清(圖1(c)). (4)D型細(xì)胞: D型細(xì)胞與C型細(xì)胞同時出現(xiàn), 是培養(yǎng)過程中一些組織塊集中遷出的細(xì)胞(圖1(d)). D細(xì)胞(長徑50～120μm, 短徑5～10μm)胞體多呈梭形、多角形和扁平星形等, 具有突起, 細(xì)胞顏色暗沉, 細(xì)胞核明顯, 呈卵圓形, 一些細(xì)胞核中有2個核仁, 胞內(nèi)含有許多小顆粒, 細(xì)胞呈交叉生長, 細(xì)胞貼壁極牢固. (5)E型細(xì)胞: 細(xì)胞大小不一、貼壁不牢, 最初依附于基質(zhì)細(xì)胞生長, 表層出現(xiàn)一些全體通亮的圓形細(xì)胞, 單個零星分布, 慢慢聚集成簇, 成團(tuán)塊的細(xì)胞仍維持圓形, 逐漸變成小山樣(圖1(e)). (6)F型細(xì)胞: 細(xì)胞形態(tài)多樣, 有不規(guī)則的三角形、梭形和圓形(圖1(f)).

圖1 體外培養(yǎng)的銀鯧脾臟細(xì)胞

2.3 腎臟組織塊遷出細(xì)胞形態(tài)

接種的腎臟組織塊貼壁4d后, 大量的細(xì)胞開始從組織塊的周圍遷出, 并出現(xiàn)明顯的生長暈(圖2(a)). 開始的原代細(xì)胞是多種細(xì)胞共存, 隨著培養(yǎng)時間的推移, 最終培養(yǎng)物中共產(chǎn)生3種不同形態(tài)的細(xì)胞(圖2).

(1)A型細(xì)胞: 接種3～5d后的貼壁組織有細(xì)胞遷出, 細(xì)胞貼壁不牢, 細(xì)胞的胞核較小, 細(xì)胞呈現(xiàn)帶有短小突起的圓形或橢圓形, 部分細(xì)胞帶有較長偽足, 呈現(xiàn)不規(guī)則形狀(圖2(b)). (2)B型細(xì)胞: 在啟動培養(yǎng)7d后, 一些植塊邊緣開始遷出B型細(xì)胞(圖2(c)),遷出的細(xì)胞形態(tài)不一, 有的細(xì)胞呈現(xiàn)扁平狀、多角形, 胞質(zhì)內(nèi)含有大量黑色顆粒. (3)C型細(xì)胞: 貼壁組織培養(yǎng)初期, C型細(xì)胞與B型細(xì)胞同時遷出(圖2(d)), 細(xì)胞胞體呈現(xiàn)長梭形, 細(xì)胞交叉排列且沒有生長方向, 一般形成復(fù)雜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu). 當(dāng)細(xì)胞不斷增殖, 細(xì)胞排列也更加密集, 形成質(zhì)密的細(xì)胞層, 此時細(xì)胞貼壁極牢固.

圖2 體外培養(yǎng)的銀鯧腎臟細(xì)胞

3 討論

DMEM、M199和DMEM/F-12是魚類細(xì)胞培養(yǎng)中廣泛使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基. DMEM相對于MEM含有豐富的氨基酸和維生素; M199適用于多種魚類細(xì)胞的培養(yǎng); DMEM/F-12營養(yǎng)成分豐富, 使用的血清較少[20-23]. Alvarez等[24]將DMEM/F-12培養(yǎng)基成功用于淡水魚和海水魚的鰭、腎等組織的培養(yǎng). 李苗苗等[25]發(fā)現(xiàn)DMEM/F-12和L-15均適用于鰻鱺腎臟細(xì)胞的生長和增殖. Mauger等[26]在金魚鰭條組織的體外培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)DMEM/F-12能夠誘導(dǎo)培養(yǎng)物快速堿化, 因此不適合其鰭條組織細(xì)胞的增殖. 上述研究結(jié)果表明, 不同種類甚至同一種類不同組織遷出的細(xì)胞所需的培養(yǎng)基不同, 篩選合適的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是提高細(xì)胞在體外成活率的關(guān)鍵.

本研究選用3種培養(yǎng)基(DMEM、M199和DMEM/F-12)作為銀鯧脾臟和腎臟等組織細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基, 經(jīng)過對比發(fā)現(xiàn)DMEM/F-12對銀鯧組織細(xì)胞的培養(yǎng)效果明顯優(yōu)于DMEM和M199(表1), 表明DMEM/F-12比較適合銀鯧脾臟和腎臟組織細(xì)胞的體外培養(yǎng).

胎牛血清是哺乳動物及魚類細(xì)胞體外培養(yǎng)重要的添加成分, 能夠為細(xì)胞提供生長所需的生長因子和各種營養(yǎng)物質(zhì), 但同時也含有一些對細(xì)胞增殖不利的物質(zhì)[27-28]. 因此, 在對細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)時需要對胎牛血清的濃度進(jìn)行優(yōu)化. 本研究在對銀鯧脾臟和腎臟組織進(jìn)行離體培養(yǎng)時對添加的胎牛血清設(shè)置了3個不同的濃度梯度, 通過對比細(xì)胞遷出數(shù)量和增殖速度發(fā)現(xiàn), 當(dāng)胎牛血清濃度為10％和15％時, 脾臟和腎臟組織遷出細(xì)胞少、細(xì)胞的增殖速度慢; 而當(dāng)血清濃度提高到20％時, 脾臟和腎臟組織塊邊緣遷出大量細(xì)胞, 而且細(xì)胞生長最快、效果最好. 上述結(jié)果說明銀鯧脾臟和腎臟組織細(xì)胞對胎牛血清濃度的依賴性較強(qiáng), 高濃度胎牛血清能刺激細(xì)胞遷出及增殖.

脾臟和腎臟是魚類重要的免疫器官[29], 其中脾臟主要由血細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和黑色素巨噬細(xì)胞組成, 而腎臟主要由處于不同成熟階段的血細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及具有排泄和內(nèi)分泌功能的細(xì)胞組成[30-32]. 在魚類的特異性和非特異性免疫中, 脾臟和腎臟發(fā)揮著不可替代的作用, 脾臟的免疫防御功能僅次于頭腎[33]. 本研究在對銀鯧脾臟組織進(jìn)行離體培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)有貼壁性不強(qiáng)、細(xì)胞較小、呈明亮的球狀細(xì)胞(圖1(a)), 這種細(xì)胞與Mu?oz等[34]在鱸魚(L)的血細(xì)胞體外培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)的淋巴細(xì)胞形態(tài)非常接近. 通過體外細(xì)胞染色發(fā)現(xiàn), 該類型細(xì)胞核質(zhì)比較多, 符合淋巴細(xì)胞特征, 因此推測該細(xì)胞類型為淋巴細(xì)胞. 王文君等[35]在大瀧六線魚脾臟細(xì)胞體外培養(yǎng)研究中得到一種基質(zhì)細(xì)胞, 該細(xì)胞貼壁性較強(qiáng), 其形態(tài)交叉分布, 在匯合之前就生長在其他細(xì)胞上, 以多層網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)存在, 這種細(xì)胞與圖1(b)細(xì)胞形態(tài)特征非常相似. 另外, 它們在生長及遷移過程中無接觸抑制現(xiàn)象, 能重疊生長, 與Diago等[36]在虹鱒()頭腎基質(zhì)細(xì)胞系TPS的生長相符, 由此推測圖1(b)細(xì)胞為基質(zhì)細(xì)胞. 圖1(c)細(xì)胞貼壁性較強(qiáng)、細(xì)胞形態(tài)多樣、形狀不規(guī)則, 為多邊形, 胞體呈扁平的棱形, 細(xì)胞中含有小顆粒, 這種細(xì)胞與Fla?o等[37]在虹鱒脾臟培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)的上皮樣細(xì)胞和Diago等[36]在虹鱒頭腎基質(zhì)細(xì)胞系培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)的上皮樣細(xì)胞形態(tài)特征極為相似, 所以推測圖1(c)細(xì)胞為類上皮樣細(xì)胞. 圖1(d)細(xì)胞或并排排列, 或交叉排列, 呈現(xiàn)出成纖維細(xì)胞樣, 這在虹鱒魚脾臟組織細(xì)胞培養(yǎng)[37]中以及虹鱒魚脾臟外植體構(gòu)建具有網(wǎng)狀內(nèi)皮特征的細(xì)胞系[38]中都有觀察到, 故推測為成纖維樣細(xì)胞. 基質(zhì)細(xì)胞的類型多種多樣, 結(jié)構(gòu)多層化, 更換培養(yǎng)基培養(yǎng)一段時間后, 圓形相的亮細(xì)胞松散附著在基質(zhì)上, 通常它們以小簇的形式出現(xiàn), 其中一些發(fā)展成巨大的團(tuán)塊或堆積成類似“小山”樣的細(xì)胞. 當(dāng)將其脫離基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行單獨(dú)培養(yǎng)時, 發(fā)現(xiàn)其出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象, 所以圖1(e)細(xì)胞是依附基質(zhì)細(xì)胞生存. 這與Ganassin等[39]在虹鱒魚脾臟組織細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)的造血灶類似, 故推測圖1(e)細(xì)胞為造血灶. 此外, 在脾臟組織遷出細(xì)胞中觀察到一種貼壁性較強(qiáng)的細(xì)胞, 該細(xì)胞顏色較深、細(xì)胞排列緊密, 呈現(xiàn)卵圓形、扁平狀、扇形等多種形態(tài). 目前, 在魚類脾臟組織細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的文獻(xiàn)中尚未見到有關(guān)此類細(xì)胞的描述, 因此對圖1(f)細(xì)胞類型的確認(rèn)還需進(jìn)一步研究. 在對銀鯧腎臟組織培養(yǎng)過程中, 也出現(xiàn)了多種類型細(xì)胞, 包括巨噬細(xì)胞、成纖維樣細(xì)胞和上皮樣細(xì)胞等. 而隨著培養(yǎng)時間的延長, 巨噬細(xì)胞、成纖維樣細(xì)胞數(shù)量逐漸減少直至消失, 最終類上皮樣細(xì)胞在培養(yǎng)物中成為優(yōu)勢細(xì)胞. 隨著培養(yǎng)時間的延長以及傳代次數(shù)的增加, 類上皮樣細(xì)胞形態(tài)呈扁平狀、細(xì)胞間隙增大、細(xì)胞密度降低, 同時細(xì)胞增殖緩慢. 許多研究表明[40-42], 細(xì)胞的增殖與細(xì)胞的密度密切相關(guān), 來源不同的細(xì)胞擁有不同的特性, 有的細(xì)胞比較依賴于高密度才能生長. 趙晶等[43]在分離培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞時提出細(xì)胞的接種密度能夠影響細(xì)胞的增殖. 本研究發(fā)現(xiàn), 銀鯧腎臟組織來源類似上皮樣細(xì)胞, 對細(xì)胞密度要求很高. 細(xì)胞密度太低時, 細(xì)胞增殖緩慢、間隙增大、鋪層時間延長, 同時容易造成細(xì)胞衰老; 細(xì)胞密度過高時, 培養(yǎng)基營養(yǎng)成分不足, 細(xì)胞呈現(xiàn)纖細(xì)狀, 甚至卷曲脫落. 所以, 銀鯧腎臟組織遷出細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件還有待進(jìn)一步研究.

4 結(jié)語

本研究以銀鯧的脾臟和腎臟組織為材料, 用組織塊培養(yǎng)法成功進(jìn)行了銀鯧脾臟和腎臟組織細(xì)胞原代培養(yǎng), 發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)溫度為26℃時, 銀鯧的脾臟和腎臟組織細(xì)胞在添加20％FBS的DMEM/ F-12培養(yǎng)基中生長速度最快, 細(xì)胞遷出種類較多, 其中脾臟組織共遷出6種類型細(xì)胞, 腎臟組織共遷出3種類型細(xì)胞, 這可為銀鯧脾臟和腎臟組織細(xì)胞株和細(xì)胞系的建立提供參考.

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The primary culture of cells from spleen and kidney tissues of

WANG Yan, SHU Fengling, CHEN Dongyue, WANG Yajun, XIE Jiasong, ZHOU Suming*

( School of Marine Sciences, Ningbo University, Ningbo 315832, China )

Tissues from spleen and kidney of the silver pomfret were collected for primary cell culture using tissue piece cultivation method, in order to study the primary cell cultured conditions. DMEM, M199 and DMEM/F-12 supplemented with different concentrations of fetal bovine serum (10％, 15％ and 20％ FBS) and antibiotics (penicillin, gentamicin) were applied to prevent bacterial contamination. The results showed that tissues in DMEM/F-12 with 20％ FBS had the best cell adherence and fastest cell growth, based on cell attachment efficiency and growth rate. The immune cells, stromal cells, epithelioid cells, fibroblast-like cells, and hematopoietic foci were present in the spleen tissue cultures of silver pompano. Hematopoietic foci cells were observed on the stromal layer. In cell cultures of silver pomfret kidney, there were mainly three types of cells. These were the epithelioid cells, macrophages and fibroblast-like cells. The establishment of cell lines from spleen and kidney of silver pomfret would benefit the research on the functions of the fish spleen and kidney.

; spleen; kidney; cell culture

S917.4; Q246

A

1001-5132（2022）04-0009-06

2021?08?18.

寧波大學(xué)學(xué)報（理工版）網(wǎng)址: http://journallg.nbu.edu.cn/

浙江省重點(diǎn)研發(fā)計劃項目（2019C02059）; 寧波市公益項目（202002N3043）; 寧波市自然科學(xué)基金（2019A610426）.

王燕（1995－）, 女, 江蘇連云港人, 在讀碩士研究生, 主要研究方向: 魚類疾病. E-mail: 2793747318@qq.com

通信作者:周素明（1981－）, 女, 湖北棗陽人, 博士/講師, 主要研究方向: 水產(chǎn)動物疾病防控及健康養(yǎng)殖. E-mail: zhousuming@nbu.edu.cn

（責(zé)任編輯 史小麗）