曹偉平，甄 偉，陳 丹，豐 碩，宋 健*

（1.河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所/河北省農(nóng)業(yè)有害生物綜合防治工程技術(shù)研究中心/農(nóng)業(yè)部華北北部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，保定 071000；2.河北小五臺(tái)山國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局，張家口 075700）

球孢白僵菌Beauveriabassiana因其廣泛的宿主范圍和感染不同昆蟲的毒力多樣性，被世界各地廣泛應(yīng)用于農(nóng)林害蟲的生物防控[1]，在我國已成功用于防治馬尾松毛蟲DendrolimuspunctatusWalker、天牛、玉米螟、金龜子等多種害蟲，是目前我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)展有機(jī)綠色產(chǎn)品的首選生物藥劑之一。以白僵菌為活性成分注冊登記的藥劑呈現(xiàn)逐年增加的趨勢，截至2019年,我國微生物農(nóng)藥共登記468個(gè)產(chǎn)品，其中白僵菌產(chǎn)品為23種。產(chǎn)孢量和孢子性能是發(fā)酵生產(chǎn)的重要指標(biāo)，但不同的白僵菌菌株產(chǎn)孢能力存在明顯差異。

培養(yǎng)基是影響孢子形成和產(chǎn)孢量的關(guān)鍵因子，豐富的氮源可以促進(jìn)菌絲的生長并能增加菌苔厚度，還有利于白僵菌孢子的萌發(fā)[2]；如果營養(yǎng)物質(zhì)供給不足，容易衰老退化，出現(xiàn)菌落局變、菌苔生長瘠薄或菌絲徒長的現(xiàn)象，導(dǎo)致分生孢子產(chǎn)率下降[3]，針對營養(yǎng)物質(zhì)包括碳氮源[4-6]、維生素、無機(jī)鹽[7,8]和微量元素[9,10]等對真菌無性生殖的研究已有較多報(bào)道。研究還發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)孢培養(yǎng)基上分生孢子產(chǎn)孢量和毒性方面有顯著差異[11]。李會(huì)平等[12]把白僵菌菌株多次接種于桑天牛Aprionagermari幼蟲，可以提高白僵菌對桑天牛幼蟲的侵染力，而在 SDAY培養(yǎng)基多次傳代培養(yǎng)得到的白僵菌，對桑天牛幼蟲的侵染力則有所降低。張慧等[6]在培養(yǎng)基中添加蟬蛻或西花薊馬蟲尸粉，白僵菌產(chǎn)孢量會(huì)隨培養(yǎng)代數(shù)呈現(xiàn)指數(shù)上升。關(guān)兵兵等[13]發(fā)現(xiàn)白僵菌在蟬蛻誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量顯著高于PDA培養(yǎng)基，且與產(chǎn)孢相關(guān)的蛋白表達(dá)上調(diào)，體現(xiàn)出一定的毒力相關(guān)性。除營養(yǎng)因素外，很多學(xué)者針對真菌進(jìn)行了誘導(dǎo)產(chǎn)孢的相關(guān)研究，如采用菌絲損傷法[14-16]、光照射法[17,18]、變溫處理法[19]誘導(dǎo)番茄早疫病菌Alternariasolani產(chǎn)孢；菌絲損傷處理和紫外線照射法誘導(dǎo)辣椒褐斑病Cercosporacapsici產(chǎn)孢[20]；藍(lán)光照射法誘導(dǎo)綠僵菌Metarhiziumanisopliae產(chǎn)孢[21]等，均可顯著提高產(chǎn)孢量。

生長調(diào)節(jié)劑是一類與激素具有相似生理和生物學(xué)效應(yīng)的物質(zhì)，具有調(diào)控植物等生長和發(fā)育的功能物質(zhì)，Kamisaka等[22]發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中添加濃度為10～200 mg/L的赤霉素（GA3）可以促進(jìn)葡萄酒酵母菌Saccharomy ceselliptoideiis產(chǎn)孢，超出此范圍的GA3對酵母菌產(chǎn)孢量造成了不同程度的減少，而5～400 mg/L的生長素IAA、2,4-d和NAA均抑制酵母菌的產(chǎn)孢。在從枝菌根Abruscularmycoihrrazs生長過程中外施激素吲哚乙酸（IAA）、GA3和6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）對從枝菌根的侵染、產(chǎn)孢均有不同程度的影響[23,24]。筆者實(shí)驗(yàn)室篩選到了對華北大黑鰓金龜Holotrichiaobeita和暗黑鰓金龜Holotrichiaparallela幼蟲高毒力的球孢白僵菌菌株JG-17（文章待發(fā)表），試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，JG-17在SDAY培養(yǎng)基上菌絲茂盛，產(chǎn)孢周期長，產(chǎn)孢量低，為了提高產(chǎn)孢量，研究了外施生長調(diào)節(jié)劑對白僵菌產(chǎn)孢的誘導(dǎo)作用，明確生長調(diào)節(jié)劑促進(jìn)白僵菌產(chǎn)孢的適宜用量和應(yīng)用時(shí)期，為提高白僵菌發(fā)酵生產(chǎn)效率提供理論依據(jù)和技術(shù)參數(shù)。

1 材料和方法

1.1 供試菌株及生長調(diào)節(jié)劑

球孢白僵菌菌株 JG-17（以下簡稱白僵菌），由河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所殺蟲微生物實(shí)驗(yàn)室分離保存。在SDAY平板培養(yǎng)基（牛肉蛋白胨1%、葡萄糖4%、酵母浸粉1%、定容1000 mL、瓊脂1.6%、自然pH，121 ℃滅菌30 min）上接種，（26±1）℃培養(yǎng)20 d，收集孢子粉，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

生長調(diào)節(jié)劑：97%萘乙酸（NAA，Solarbio，溶于丙酮），98%二氯苯氧乙酸（2,4-d，北京金泰宏達(dá)生物科技有限公司，溶于乙醇），99% 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA，Solarbio，溶于乙酸），99%脫落酸（ABA，Solarbio，溶于乙醇），98%吲哚乙酸（IAA，Solarbio，溶于丙酮），90%赤霉素（GA3，Solarbio，溶于乙醇），85%乙烯利（上海源葉生物科技有限公司，溶于水），除乙烯利外，其余幾種物質(zhì)均用少量有機(jī)溶劑溶解后，再用蒸餾水稀釋，常溫放置備用，使用前用0.22 μm微孔過濾器滅菌。

1.2 球孢白僵菌發(fā)育進(jìn)程的觀察

將白僵菌JG-17孢子粉置于裝有玻璃珠的滅菌0.1% Tween -80溶液的三角瓶中，搖床180 r/min振蕩分散均勻，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)并稀釋得到1×107孢子/mL的孢懸液。取100 μL涂布于SDAY平板上，然后將滅菌蓋玻片30度角斜插入平板上，以便生長的菌絲延伸到蓋玻片上。將平板放置于（26±1）℃、RH 60%±10%、黑暗條件下培養(yǎng)，分別于0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11 d小心取下蓋玻片，于40×光學(xué)顯微鏡下觀察菌株發(fā)育特征；并取培養(yǎng)144、168、192、216、240、264、288、312、336、360、384 h的平板，使用內(nèi)徑為5.0 mm的打孔器，于平板1/2半徑的圓上等距離打孔，取5個(gè)菌餅，置于有5 mL滅菌0.1% Tween -80溶液的試管中，漩渦器上充分振蕩，雙層紗布過濾，稀釋適當(dāng)倍數(shù)后用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，計(jì)算單位面積產(chǎn)孢量，每個(gè)時(shí)間段取3個(gè)平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算式為產(chǎn)孢量Q＝X×N×5×104/nπr2（其中X為稀釋倍數(shù)，N為5中格內(nèi)的孢子計(jì)數(shù)，n為打孔菌餅數(shù)，r為打孔器內(nèi)徑），制作產(chǎn)孢量隨時(shí)間變化曲線。

1.3 生長調(diào)節(jié)劑的篩選

將SDAY培養(yǎng)基倒入平板待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將生長調(diào)節(jié)劑溶液通過0.22 μm微孔過濾器滅菌，用Potter噴霧塔（在無菌操作間進(jìn)行，使用前噴霧塔的噴頭和噴臺(tái)用75%酒精消毒）將生長調(diào)節(jié)劑溶液均勻噴灑在SDAY培養(yǎng)基表層，使其在培養(yǎng)基表層的劑量為20、100、1000 ng/cm2，以未噴施生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基作為空白對照。移液器吸取5 μL濃度為1×107孢子/mL孢懸液，點(diǎn)接于SDAY平板培養(yǎng)基上，在（26±1）℃下培養(yǎng)。每隔2 d用游標(biāo)卡尺測量菌落生長直徑，共測定10 d，以最小二乘法計(jì)算各個(gè)處理下白僵菌菌落的生長速率。培養(yǎng)至第16 d測定產(chǎn)孢量，方法同1.2。

1.4 菌株JG-17不同生長階段施用乙烯利

同方法1.2，吸取1×107孢子/mL JG-17孢懸液100 μL均勻涂布于SDAY平板上，置于（26±1）℃、黑暗條件下培養(yǎng)，在白僵菌JG-17營養(yǎng)生長階段（5～7 d菌齡）、生殖生長初期（8～9 d菌齡）和生殖生長階段（10～14 d菌齡），利用噴霧塔在菌絲表層施用不同劑量的無菌乙烯利溶液，噴施劑量為20、40、80、100、200、500、1000、1500 ng/cm2，每處理3次重復(fù)，設(shè)置未處理對照，各處理置于（26±1）℃下恒溫培養(yǎng)至第16 d時(shí)測定產(chǎn)孢量，方法同1.2。

1.5 孢子活力及抗逆性檢測

1.5.1 孢子萌發(fā)率測定 對促進(jìn)JG-17產(chǎn)孢效果明顯的乙烯利處理濃度，培養(yǎng)至第16 d后，分別收集各處理平板的分生孢子，使用滅菌0.1%（v/v）Tween -80溶液配置較高濃度母液，再稀釋配成濃度為1×107孢子/mL的孢懸液，取100 μL涂布接種于SDAY平板，于（26±1）℃恒溫培養(yǎng)，于24 h后在40×光學(xué)顯微鏡下統(tǒng)計(jì)孢子萌發(fā)率，用最小二乘法計(jì)算50%孢子萌發(fā)所需的時(shí)間GT50[25,26]。分生孢子芽管長度大于其直徑的1/2視為萌發(fā)，每處理重復(fù)3次。

1.5.2 耐熱性測定 吸取1.5.1中濃度為1×107孢子/mL孢懸液0.5 mL置于1.5 mL離心管中，于50 ℃恒溫水浴處理5 min后，吸取100 μL涂布接種于SDAY平板上，（26±1）℃恒溫培養(yǎng)24 h后，測定萌發(fā)率，分生孢子萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)同1.5.1，每處理重復(fù)3次。

1.5.3 耐紫外線測定 取1.5.1中濃度為1×108孢子/mL孢懸液300 μL滴在滅菌蓋玻片上，待風(fēng)干后置于8 W紫外燈下距離30 cm照射5 min，然后將載有孢子的蓋玻片置于黑暗處放置30 min。用3 mL無菌0.1% Tween-80溶液充分洗滌蓋玻片上的分生孢子，使其分散均勻后取100 μL涂布于SDAY平板上，（26±1）℃恒溫培養(yǎng)24 h后，測定最終萌發(fā)率，分生孢子萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)同1.5.1，每處理重復(fù)3次。

1.6 生物測定

將1.5.1中孢懸液母液稀釋至濃度為5×107孢子/mL，測定JG-17菌懸液對華北大黑鰓金龜和暗黑鰓金龜幼蟲的致病力。生測方法：將規(guī)格為高100 mm×直徑15 mm指形管在電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱175 ℃滅菌2 h，每個(gè)指形管底部放入1.5 cm3大小土豆塊作為幼蟲飼料，細(xì)土曝曬過篩后，加水混勻，使其濕度為18%～20%，細(xì)土裝至指形管四分之三處，作為幼蟲處置室。挑取健康活潑、大小一致的2齡金龜子幼蟲，將試蟲逐頭浸沒在JG-17孢懸液中5 s，取出后放在濾紙上吸去多于水分后放入幼蟲處置室中，待試蟲鉆入土中后在幼蟲處置室口塞入滅菌棉球，如有長時(shí)間未鉆入土中的試蟲，將其取出并挑取新的幼蟲重新在相應(yīng)的JG-17孢懸液浸沒處理，至所有處理幼蟲均鉆入土中。每個(gè)幼蟲處置室放置1頭幼蟲，每處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)10頭試蟲。試蟲置于27 ℃下飼養(yǎng)，施藥后定期檢查蠐螬死蟲數(shù)，將死蟲挑出后保濕處理，待其體表長出白色菌絲體視為菌株JG-17侵染致死。計(jì)算死亡率和校正死亡率：死亡率（%）＝死蟲數(shù)/試蟲數(shù)×100；校正死亡率（%）＝（處理組死亡率—對照死亡率）/（100—對照組死亡率）×100。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel計(jì)算平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，采用SPSS 18.0軟件中的Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 球孢白僵菌菌株JG-17發(fā)育時(shí)段

白僵菌菌株JG-17分生孢子接種在SDAY培養(yǎng)基上經(jīng)歷萌發(fā)、芽管、菌絲及產(chǎn)孢四個(gè)發(fā)育階段（圖1）。孢子在培養(yǎng)基上首先吸水膨大，之后伸出芽管，以分生孢子芽管長度大于其直徑的 1/2視為萌發(fā)。JG-17分生孢子為（1.7～2.2）μm×（3.6～5.3） μm的短柱狀（圖1a）；培養(yǎng)1 d時(shí)，多數(shù)孢子已萌發(fā)，從一端或兩端伸出芽管（圖1b）；2～3 d時(shí)，菌絲致密成團(tuán)，呈現(xiàn)樹狀分支，邊緣菌絲延展（圖1c）；生長至4～5 d時(shí)，培養(yǎng)基平板上有可見白色菌落，邊緣菌絲繼續(xù)延展，菌絲出現(xiàn)彎曲交接（圖1d）；生長至6～7 d，菌落更加致密，菌絲體出現(xiàn)明顯分隔（圖1e）；生長至8～9 d時(shí)，顯微鏡下可看到較多的具有分支的瓶型分生孢子梗，視野里仍為大量致密菌絲體，可見極少量分生孢子（圖1f）；10～11 d時(shí)，顯微鏡視野內(nèi)觀察到分生孢子長鏈及較多量的孢子（圖1g）；12 d時(shí)，視野內(nèi)分生孢子逐漸增多（圖1h），平皿菌落表面為厚實(shí)的白色絮狀菌絲，未見明顯的孢子層（圖2）。產(chǎn)孢量的檢測結(jié)果表明（圖3），培養(yǎng)216 h時(shí)，有極少量孢子產(chǎn)生，產(chǎn)孢量為1.0×105孢子/cm2；240 h時(shí)，產(chǎn)孢量為8.0×105孢子/cm2；之后，產(chǎn)孢量逐漸上升，264～312 h，為分生孢子形成快速上升期；312 h時(shí)，產(chǎn)孢量為6.5×106孢子/cm2，達(dá)到產(chǎn)孢量的83%；336 h后，產(chǎn)孢量上升速度有所減緩，產(chǎn)孢量趨于穩(wěn)定。

圖1 球孢白僵菌JG-17不同發(fā)育階段Fig.1 The development stages of B.bassiana strain JG-17

圖2 球孢白僵菌JG-17菌落特征Fig.2 Morphological characteristics of strain JG-17

圖3 球孢白僵菌JG-17不同生長階段的產(chǎn)孢量Fig.3 Conidiation abundance at different growth stages of B.bassiana strain JG-17

從形態(tài)觀察和產(chǎn)孢量分析，菌株JG-17發(fā)育24 h前為萌發(fā)期，48～168 h為菌絲快速生長期，216 h為產(chǎn)孢前期，240 h為產(chǎn)孢初期，264～312 h為產(chǎn)孢盛期，336 h后進(jìn)入產(chǎn)胞末期。

2.2 生長調(diào)節(jié)劑對球孢白僵菌JG-17生長發(fā)育的影響

菌株JG-17在含有生長調(diào)節(jié)劑的SDAY平板培養(yǎng)基上生長時(shí)（表1），除6-BA顯著抑制菌株JG-17的生長發(fā)育，其余5種生長調(diào)節(jié)劑的3個(gè)使用劑量均沒有顯著影響JG-17的生長，生長速率和未處理對照均沒有顯著差異（P＞0.05）；從單位面積產(chǎn)孢量來看，生長調(diào)節(jié)劑劑量為20 ng/cm2和100 ng/cm2時(shí)，各處理二者之間的孢子數(shù)量差異不顯著（P＞0.05），當(dāng)劑量增加到1000 ng/cm2時(shí)，各處理產(chǎn)孢量在數(shù)值上表現(xiàn)為下降趨勢；100 ng/cm2的乙烯利可以顯著促進(jìn)菌株JG-17產(chǎn)孢（P＜0.05），相比未處理對照產(chǎn)孢量提高了97.3%。

表1 生長調(diào)節(jié)劑對球孢白僵菌JG-17生長發(fā)育的影響Table 1 Effect of plant growth regulators on the growth and development of B.bassiana strain JG-17

2.3 在不同生長階段施用乙烯利對球孢白僵菌JG-17產(chǎn)孢速度和產(chǎn)孢量的影響

在球孢白僵菌 JG-17營養(yǎng)生長階段和生殖生長初期噴施乙烯利，可顯著縮短 JG-17產(chǎn)孢時(shí)間，提高JG-17產(chǎn)孢水平。在菌絲表層施用乙烯利，第二天鏡檢即有可見孢子，而未施用乙烯利的對照，第10 d進(jìn)入產(chǎn)孢階段。從乙烯利施用劑量來看，20～1500 ng/cm2乙烯利對JG-17產(chǎn)孢均有不同程度的促進(jìn)作用，80～500 ng/cm2乙烯利處理的產(chǎn)孢量相對更優(yōu)，其中100 mg/cm2的乙烯利處理，產(chǎn)孢量最高，1500 ng/cm2處理所得的產(chǎn)孢量最低。從施用時(shí)期來看，在菌株JG-17生殖生長初期（8 d菌齡）施用乙烯利最有利于促進(jìn)產(chǎn)孢，最高產(chǎn)孢量為未處理對照的6.28倍（表2）。在生殖生長階段施用乙烯利，各處理的最高產(chǎn)孢量為未處理對照的2.84倍，低于在營養(yǎng)生長階段和生殖生長初期的處理，且隨著菌齡的增加，所有施用劑量處理后的產(chǎn)孢量均呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢（表3）。

表2 營養(yǎng)生長階段和生殖生長初期噴霧施用乙烯利對球孢白僵菌JG-17產(chǎn)孢量的影響Table 2 Effect of ethephon used at mycelial growth and begining of the forming sporulation stage on B.bassiana strain conidial production

表3 生殖生長階段噴霧施用乙烯利對菌株JG-17產(chǎn)孢量的影響Table 3 Effect of ethephon used at forming sporulation stage on strain JG-17 conidial production

2.4 乙烯利對球孢白僵菌JG-17分生孢子活力和抗逆性的影響

進(jìn)一步測定乙烯利劑量20～1500 ng/cm2處理菌株JG-17 8 d菌齡所得分生孢子的活力和抗逆性，結(jié)果表明，乙烯利劑量20～1500 ng/cm2對分生孢子的萌發(fā)率和萌發(fā)速度沒有明顯的影響。菌株JG-17耐熱性較差，所有處理50 ℃恒溫5 min均大幅度降低孢子的萌發(fā)率，萌發(fā)率均不及未處理所得孢子的25%，各處理之間差異不顯著（P＞0.05），初始觀察到孢子萌發(fā)的時(shí)間均延長到42 h之后；紫外線照射極大降低了菌株JG-17分生孢子的萌發(fā)率，所有處理孢子的萌發(fā)率均不及未處理孢子的15%，各處理之間差異不顯著（P＞0.05），孢子初始萌發(fā)時(shí)間延長到了60 h之后（表4）。

表4 乙烯利處理對球孢白僵菌JG-17分生孢子活力和抗逆性的影響Table 4 Effect of ethephon on the viability and stress tolerance of B.bassiana strain JG-17 conidia

2.5 蠐螬接種球孢白僵菌JG-17孢子懸浮液后幼蟲死亡率的變化

蠐螬感染白僵菌JG-17后，初期行動(dòng)呆滯，身體呈萎靡狀態(tài)，蟲體死亡初期，身體僵硬呈“C”形，身體開始變硬，之后變?yōu)榘导t色，保濕放置2～3 d后蟲體長出白色絨毛狀菌絲（圖4）。菌株JG-17經(jīng)不同劑量乙烯利處理后獲得的分生孢子對華北大黑鰓金龜和暗黑鰓金龜兩種幼蟲的侵染趨勢均基本保持一致，1000 ng/cm2和1500 ng/cm2兩個(gè)劑量處理的菌株JG-17孢子對兩種金龜子幼蟲的累計(jì)死亡率雖然低于其余乙烯利處理和未處理對照，但差異不顯著（P＞0.05）（圖5）；100 ng/cm2和200 ng/cm2乙烯利處理菌株JG-17對華北大黑鰓金龜幼蟲的致死效率沒有影響，LT50與未處理對照接近，1500 ng/cm2乙烯利在一定程度上影響了對華北大黑鰓金龜幼蟲的致死效率，LT50較未處理對照延長了2.6 d；各劑量乙烯利對暗黑鰓金龜幼蟲的致死效率沒有明顯影響，與未處理對照的LT50較為接近（表5）。

表5 球孢白僵菌JG-17對華北大黑鰓金龜和暗黑鰓金龜幼蟲的LT50Table 5 LT50 of B.bassiana strain JG-17 to larvae of H.obeita and H.parallela

圖4 球孢白僵菌JG-17感染的蠐螬Fig.4 The grubs infected by B.bassiana strain JG-17

圖5 蠐螬接種乙烯利處理后的球孢白僵菌JG-17孢懸液的累計(jì)死亡率Fig.5 Cumulative mortality of grubs inoculated with conidia suspension of B.bassiana strain JG-17 treated by different dosage of ethephon

3 討論

乙烯利作為一種優(yōu)良生長激素具有增強(qiáng)促進(jìn)細(xì)胞中核糖核酸和蛋白質(zhì)合成的作用，對植株的營養(yǎng)生長和生殖生長有一定的影響作用，常用于促進(jìn)植株老葉脫落、果實(shí)的著色和成熟。本研究表明，對于在SDAY上不易產(chǎn)孢的白僵菌菌株 JG-17，在營養(yǎng)生長階段和生殖生長初期，通過外源法在菌絲體表層噴施20～500 ng/cm2的乙烯利，均可顯著提升菌株JG-17的產(chǎn)孢量，以192 h菌齡施用100 ng/cm2處理產(chǎn)孢量最佳，產(chǎn)孢量為未處理對照的 6.28倍；在生殖生長階段噴施乙烯利，僅當(dāng)乙烯利施用量為 100 ng/cm2和200 ng/cm2的處理可以顯著提高產(chǎn)孢量，但產(chǎn)孢量也明顯低于營養(yǎng)生長階段和生殖生長初期的同水平處理，其余處理反而降低了產(chǎn)孢量。何雪嬌等[27]應(yīng)用乙烯利可促進(jìn)蕨類植物高山羊齒的生殖生長，提高了高山羊齒的產(chǎn)孢率；劉思儉等[28]研究發(fā)現(xiàn)在較低濃度可以刺激海藻類江籬孢子的萌發(fā)，但高濃度則導(dǎo)致植物體死亡。本試驗(yàn)印證了合理的乙烯利濃度可以促進(jìn)真菌的生長發(fā)育。

在不同營養(yǎng)條件下產(chǎn)生的真菌孢子與目標(biāo)害蟲具有不同程度的毒力，真菌孢子抗逆性會(huì)有所差異[25,29]。乙烯利處理菌株JG-17所得孢子的活孢率、耐熱性和耐紫外線能力與對照沒有顯著差異，對靶標(biāo)害蟲華北大黑鰓金龜和暗黑鰓金龜幼蟲的致病力也沒有顯著影響，表明在發(fā)酵過程中外施乙烯利可以作為一種促進(jìn)白僵菌產(chǎn)孢的有效手段。

影響真菌產(chǎn)孢的因素較多，在菌株生長過程中通過外界刺激法誘導(dǎo)產(chǎn)孢對于真菌發(fā)酵是一種簡便易行的發(fā)酵技術(shù)，前人在促進(jìn)真菌產(chǎn)孢方面進(jìn)行了很多嘗試和研究，劉麗麗等[30]對7株茄鏈格孢Alternariasolani菌株在培養(yǎng)7 d后通過刮除氣生菌絲法（菌絲損傷）可抑制氣生菌絲的營養(yǎng)生長，使其轉(zhuǎn)為生殖生長，使得產(chǎn)孢量極顯著增加，相比未經(jīng)菌絲損傷的處理，產(chǎn)孢量最高可提高342.9倍。郭春秋等[31]對10種在常規(guī)人工培養(yǎng)基上只形成營養(yǎng)菌絲體而不產(chǎn)生繁殖孢子的真菌進(jìn)行了掃刷營養(yǎng)體的處理，其中2種真菌經(jīng)掃刷營養(yǎng)體可誘導(dǎo)產(chǎn)孢。通過噴霧塔在菌絲體表層施用乙烯利，不排除氣流所產(chǎn)生的沖擊對于菌絲體存在一定的損傷作用，通過外源法引入乙烯利促進(jìn)白僵菌孢子產(chǎn)生的機(jī)制以及乙烯利的利用效率和代謝產(chǎn)物對農(nóng)作物生長的影響還有待進(jìn)一步研究。

一定劑量范圍的乙烯利可以顯著促進(jìn)白僵菌孢子的形成及脫落，縮短白僵菌繁殖周期，極大地提高白僵菌分生孢子的生產(chǎn)效率，且噴施乙烯利使用形式方便，發(fā)酵基質(zhì)可以為平板培養(yǎng)基，也可以是其他形式的固體培養(yǎng)基，是一種改善有益病原真菌發(fā)酵工藝的優(yōu)良方法。試驗(yàn)結(jié)果可應(yīng)用到更多的菌類研究和制劑化生產(chǎn)中，為提升真菌等有益菌株的工業(yè)化生產(chǎn)效率提供了新的思路。