蘇曉玲，陳道印，趙東緒，華啟云，羅谷輝

(金華市農(nóng)業(yè)科學研究院，浙江金華 321017)

蜜蜂作為一種經(jīng)濟昆蟲，不僅可以為人類提供營養(yǎng)豐富的蜂產(chǎn)品，而且對提高農(nóng)作物產(chǎn)量、改善農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)和維護生態(tài)平衡具有十分重要的作用(Kleinetal., 2006)。低溫是蜜蜂生存和繁衍的限制性因素之一，當外界溫度較低和缺乏蜜源時，蜜蜂進入長達幾個月的越冬期，而蜂群的安全越冬對蜂群的生存和翌年的養(yǎng)蜂生產(chǎn)至關(guān)重要；同時，蜜蜂作為我國自然生態(tài)系統(tǒng)和農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)重要的授粉者，蜂群的成功越冬對于滿足早春開花作物的授粉需求非常重要(Dokeetal., 2015)。

昆蟲能夠通過調(diào)節(jié)行為和改變體內(nèi)生理生化反應(yīng)來適應(yīng)低溫環(huán)境(Johannes and Heath, 2017)。蜜蜂以群體越冬，這是對低溫環(huán)境的行為適應(yīng)。當外界氣溫降到10℃以下時，蜂群內(nèi)的蜜蜂形成一個球形蜂團(Phillipsetal., 1914)，結(jié)團的蜜蜂通過振動飛行肌產(chǎn)生熱量，維持蜂團外緣溫度在6℃以上，從而使蜜蜂順利越冬(Dokeetal., 2015)。另外，昆蟲會發(fā)生一系列的生理生化反應(yīng),如降低過冷卻點，減少體內(nèi)含水量，排除體內(nèi)冰核物質(zhì)和積累抗寒物質(zhì)等方式來抵抗凍害(陳豪等, 2010)。常志光等(2008)研究發(fā)現(xiàn)，卡尼鄂拉蜂A.m.carnicaPollmann, 1879體內(nèi)水分、蛋白質(zhì)和脂肪含量在越冬前期隨氣溫下降逐漸增高，越冬后期隨氣溫升高而降低，這幾種物質(zhì)含量與越冬蜂的抗寒性密切相關(guān)。秦明等(2017)研究表明，中華蜜蜂在應(yīng)對寒冷環(huán)境刺激時主要通過降低體內(nèi)游離水含量、提高糖原和小分子糖含量等方式降低體內(nèi)過冷卻點，提高自身耐寒性能。

長時間高溫或低溫脅迫可以誘導昆蟲的氧化應(yīng)激，誘發(fā)產(chǎn)生大量的活性氧，導致脂質(zhì)過氧化損傷、蛋白羰基化損傷、DNA斷裂等，最終導致機體功能障礙，昆蟲的存活率下降(Rojasretal., 1996; Jiangetal., 2019)?？寡趸赶到y(tǒng)是昆蟲等變溫動物抵御溫度脅迫的一個重要抗逆機制，正常情況下，細胞內(nèi)自由基的產(chǎn)生與清除依靠超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過氧化氫酶(catalase，CAT)和過氧化物酶(peroxidase，POD)等抗氧化酶的協(xié)調(diào)作用，使自由基維持在一個低水平(唐維媛等, 2016)。SOD能清除O2-形成H2O2，H2O2能與O2-形成毒性更強的HO-(Dubovskiyetal., 2008)。CAT和POD均能清除昆蟲體內(nèi)H2O2，CAT在H2O2濃度較高時發(fā)揮作用，而POD可以在低H2O2濃度的情況發(fā)揮高效的作用，二者共同作用將H2O2維持在較低水平(Kashiwagietal., 1997)。夏振宇等(2019)研究了中華蜜蜂短期低溫脅迫下體內(nèi)總抗氧化能力、SOD和POD酶活變化，證明了中華蜜蜂體內(nèi)抗氧化酶在低溫脅迫下協(xié)同發(fā)揮作用。

中華蜜蜂Apisceranacerana(簡稱“中蜂”)作為我國重要的本土資源，長期與我國當?shù)氐沫h(huán)境適應(yīng)，具有較強的抗逆性。目前中蜂的飼養(yǎng)方式主要分為原始飼養(yǎng)與活框飼養(yǎng)。不同飼養(yǎng)方式的中蜂蜂群在自然越冬階段的生理生化反應(yīng)和抗氧化水平未見報道。本研究對越冬期活框飼養(yǎng)和原始飼養(yǎng)中蜂的蜂體水分、蛋白質(zhì)、甘油等抗寒物質(zhì)和SOD、POD、CAT等抗氧化指標進行測定，評價了越冬不同階段的抗寒物質(zhì)代謝水平和抗氧化水平，以期為中蜂抗寒生理機制提供依據(jù)；同時分析了不同飼養(yǎng)模式下中蜂對低溫適應(yīng)性的差異，以期為中蜂科學飼養(yǎng)管理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗蜂群

選擇浙江省金華市羅店鎮(zhèn)活框飼養(yǎng)和原始飼養(yǎng)的中華蜜蜂各5群，活框飼養(yǎng)蜂群采用郎氏標準箱飼養(yǎng)，越冬初期群勢為3足框；原始飼養(yǎng)蜂群采用圓桶飼養(yǎng)，越冬初期群勢為1.5足框。試驗蜂群的群勢為當?shù)胤鋱龅某Ｒ娙簞?。蜜蜂越冬前統(tǒng)一檢查蜂群，補喂越冬飼料，越冬期間不進行操作。

1.2 試驗方法

1.2.1樣品采集

分別于越冬初期(2020年11月15日)、越冬中期(2020年12月15日)和越冬后期(2021年1月15日)進行工蜂取樣，并以春繁期(2021年2月15日)蜜蜂作為對照樣本。每個蜂群中隨機取活蜂樣本20頭帶回實驗室，測定蜜蜂鮮重、游離水、蛋白質(zhì)和糖原等抗寒生理指標。同時，取成年工蜂30頭立即置于液氮冷凍，并于-80℃超低溫冰箱內(nèi)保存，用于測定蜜蜂SOD、POD和CAT等抗氧化指標。

1.2.2游離水含量測定

每群取工蜂10頭，用電子天平稱量10頭蜜蜂鮮重(FW)，然后將蜜蜂樣本放入65℃電熱恒溫鼓風干燥箱中，48 h后測定10頭蜜蜂干重(DW)，計算蜂體的游離水含量(%)=[(FW-DW)/FW]×100(秦明等, 2017)。

1.2.3糖原含量測定

將蜜蜂解剖去掉蜜囊后，準確稱取樣品質(zhì)量，加入0.75 mL提取液充分勻漿，按照糖原含量測試盒(蘇州科銘生物技術(shù)有限公司)步驟測定糖原含量(秦明等, 2017)。每群測定3頭，重復(fù)3次。

1.2.4蛋白質(zhì)濃度測定

稱取1頭蜜蜂，加入2 mL PBS緩沖液，冰浴勻漿，8 000 g，4℃離心10 min，取上清，使用考馬斯亮藍法蛋白含量測試盒(蘇州科銘生物技術(shù)有限公司)進行測定(Baoetal., 2020)。每群測定3頭，重復(fù)3次。

1.2.5甘油含量測定

使用差重法準確稱量蜜蜂樣本重量，使用組織細胞甘油酶法測定試劑盒(北京普利萊基因技術(shù)有限公司)測定蜂體甘油含量。將標準品分別稀釋至1 000、500、250、125、62.5和31.25 μmol/L后測定各標準管的吸光度，并繪制標準曲線y=0.0008x-0.0221，R2=0.9999，根據(jù)該方程將各樣本的吸光度換算成甘油含量，再以每毫克蛋白濃度進行校正(徐凱等, 2018)。每次測定3頭，重復(fù)3次。

1.2.6抗氧化指標測定

稱取1頭蜜蜂，加入1 mL提取液，冰浴勻漿，8 000 g，4℃離心10 min，取上清，分別使用超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和過氧化物酶(POD)(蘇州科銘生物技術(shù)有限公司)測試盒進行測定；稱取1頭蜜蜂，加入1 mL提取液，冰浴勻漿，10 000 g，4℃離心10 min，取上清，使用總抗氧化能力(FRAP法)(蘇州科銘生物技術(shù)有限公司)測試盒進行測定，用蜂體蛋白質(zhì)濃度進行校準(Wangetal., 2019)。每群測定3頭，重復(fù)3次。

1.2.7氣溫數(shù)據(jù)獲取

由金華市氣象局提供樣點附近氣溫數(shù)據(jù)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用LSD法進行多重比較分析，結(jié)果表示為平均值±標準差。P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 中蜂越冬期溫度變化

根據(jù)金華市氣象局氣象數(shù)據(jù)統(tǒng)計，2020年11月-2021年2月取樣點的月平均氣溫分別為15.3℃、7.9℃、6.4℃和12.1℃，月最低氣溫分別為7.3℃、-5.6℃、-6.4℃和1.3℃(圖1)?？梢?，在蜜蜂越冬中期和后期外界環(huán)境溫度較低。

圖1 取樣點溫度變化Fig.1 Changes of temperature at the sampling point

2.2 越冬蜂體重

活框飼養(yǎng)中蜂和原始飼養(yǎng)中蜂體重(圖2)在越冬期均呈“先升后降”趨勢，但不同越冬階段蜜蜂體重差異不顯著(P>0.05)；春繁期活框飼養(yǎng)中蜂體重顯著增加至0.097 g(P<0.05)，而原始飼養(yǎng)中蜂則顯著降低至0.071 g(P<0.05)，且兩者達到差異顯著水平(P<0.05)。

圖2 中蜂體重Fig.2 Fresh weight of Apis cerana cerana注：柱上標有不同字母表示不同時間相同飼養(yǎng)方式中蜂差異顯著(P<0.05)；*表示不同飼養(yǎng)方式中蜂在同一時間差異顯著。下圖同。Note: Histograms with different lowercase letters indicated significantly different between different stages of the same breeding methods of Apis cerana cerana at 0.05 level. * indicated significantly different between different breeding methods of the same stages at 0.05 level. The same below.

2.3 越冬蜂游離水含量

活框飼養(yǎng)中蜂和原始飼養(yǎng)中蜂蜂體游離水含量(圖3)在越冬期呈降低趨勢，在越冬后期降至最低?；羁蝻曫B(yǎng)中蜂體內(nèi)游離水含量在越冬初期達到最高為70.86%，在越冬后期降至68.86%，春繁期升高至70.90%(P<0.05)，3個階段游離水含量差異顯著(P<0.05)。而原始飼養(yǎng)中蜂越冬初期游離水含量為76.64%，越冬后期降至75.08%，春繁期繼續(xù)降低至72.19%，各個階段差異不顯著(P>0.05)。越冬期活框飼養(yǎng)中蜂蜂體游離水含量均低于原始飼養(yǎng)中蜂，且兩者差異顯著(P<0.05)。

圖3 中蜂游離水含量Fig.3 Content of free water of Apis cerana cerana

2.4 越冬蜂蛋白質(zhì)濃度

活框飼養(yǎng)中蜂和原始飼養(yǎng)中蜂蛋白質(zhì)濃度(圖4)均呈“升-降-升”趨勢，越冬中期蛋白質(zhì)濃度最高，且與其他時期蛋白質(zhì)濃度存在顯著差異(P<0.05)?；羁蝻曫B(yǎng)中蜂蛋白質(zhì)濃度由越冬初期的16.23 mg/g顯著上升至越冬中期的19.72 mg/g(P<0.05)，在越冬后期下降至14.77 mg/g(P<0.05)，春繁期蛋白質(zhì)濃度為15.53 mg/g，與越冬初期、越冬后期差異不顯著(P>0.05)。原始飼養(yǎng)中蜂蛋白質(zhì)濃度由越冬初期15.72 mg/g顯著上升至越冬中期的18.24 mg/g(P<0.05)，在越冬后期下降至14.76 mg/g(P<0.05)，春繁期蛋白質(zhì)濃度為16.80 mg/g，較越冬后期顯著上升(P<0.05)。相同階段的兩種飼養(yǎng)方式中蜂蛋白質(zhì)濃度差異不顯著(P>0.05)。

圖4 中蜂蛋白質(zhì)濃度Fig.4 Content of protein of Apis cerana cerana

2.5 越冬蜂糖原含量

兩種飼養(yǎng)方式的中蜂糖原含量(圖5)均呈“先降后升”趨勢，越冬中期與越冬后期糖原含量最低。活框飼養(yǎng)中蜂的糖原含量由越冬初期的8.30 mg/g下降至越冬中期的2.08 mg/g(P<0.05)，至越冬后期糖原含量下降至最低1.57 mg/g，春繁期上升至3.69 mg/g(P<0.05)。原始飼養(yǎng)中蜂糖原含量由越冬初期的10.07 mg/g下降至越冬中期的2.99 mg/g(P<0.05)，由越冬后期的3.03 mg/g上升至春繁期的6.11 mg/g(P<0.05)?；羁蝻曫B(yǎng)中蜂的糖原含量在越冬階段和春繁期均低于原始飼養(yǎng)中蜂，越冬期差異不顯著(P>0.05)，春繁期差異顯著(P<0.05)。

圖5 中蜂糖原含量Fig.5 Contert of glycogen of Apis cerana cerana

2.6 越冬蜂甘油含量

兩種飼養(yǎng)方式的中蜂甘油含量(圖6)呈“先升后降”趨勢，越冬后期甘油含量最高，在相同階段不同飼養(yǎng)方式中蜂之間甘油含量差異均達到顯著水平(P<0.05)。活框飼養(yǎng)中蜂甘油含量在越冬初期(362.50 μmol/mg prot)與越冬中期(350.46 μmol/mg prot)無顯著差異(P>0.05)，在越冬后期顯著上升至483.11 μmol/mg prot(P<0.05)，于春繁期顯著下降至117.96 μmol/mg prot(P<0.05)。原始飼養(yǎng)中蜂甘油含量由越冬初期的236.62 μmol/mg prot、越冬中期的245.26 μmol/mg prot上升至越冬后期的319.92 μmol/mg prot，差異顯著(P<0.05)，在越冬后期又顯著下降至263.04 μmol/mg prot(P<0.05)。活框飼養(yǎng)中蜂越冬期甘油水平均顯著高于原始飼養(yǎng)中蜂(P<0.05)，春繁期顯著低于原始飼養(yǎng)中蜂(P<0.05)。

2.7 抗氧化指標

2.7.1SOD、CAT和POD酶活變化

越冬期和春繁期活框飼養(yǎng)中蜂SOD(圖7)、CAT(圖8)和POD(圖9)變化趨勢一致，呈“降-升-降”趨勢，但不同酶活的變化幅度不一致。在越冬初期SOD、CAT和POD酶活較高，越冬中期出現(xiàn)顯著下降(P<0.05)，分別由194.53、49.32 和60.43 U/mg prot下降至117.95、43.08和28.19 U /mg prot，且差異顯著(P<0.05)；越冬后期酶活性分別升高至149.07(P<0.05)、48.89和75.26 U/mg prot(P<0.05)，隨后春繁期再降低至69.81(P<0.05)、43.15和72.31 U/mg prot。

圖7 中蜂SOD酶活性Fig.7 Enzymatic activity of SOD of Apis cerana cerana

圖8 中蜂CAT酶活性 Fig.8 Enzymatic activity of CAT of Apis cerana cerana

圖9 中蜂POD酶活性Fig.9 Enzymatic activity of POD of Apis cerana cerana

原始飼養(yǎng)中蜂SOD呈“先升后降”趨勢，由越冬初期的153.41上升至越冬中期的203.89(P<0.05)，越冬后期顯著下降至161.07 U/mg prot(P<0.05)，直至在春繁期降至最低的77.15 U/mg prot(P<0.05)。原始飼養(yǎng)中蜂CAT與POD酶活呈“先降后升”趨勢，分別由越冬初期的50.71和101.24 U/mg prot下降至越冬中期的46.24和22.10 U/mg prot(P<0.05)，在春繁期上升至53.81(P<0.05)和72.93 U/mg prot(P<0.05)。

兩種飼養(yǎng)方式中蜂的SOD活性在越冬期差異顯著(P<0.05)，春繁期差異不顯著(P>0.05)；CAT活性與SOD相反；POD活性在越冬初期和越冬后期差異顯著(P<0.05)。

2.7.2總抗氧化能力(T-AOC)

兩種飼養(yǎng)方式之間的總抗氧化能力(圖10)在相同階段差異顯著(P<0.05)?；羁蝻曫B(yǎng)中蜂越冬初期T-AOC含量為132.26 nmol Trolox/mg prot，越冬中期上升至149.99 nmol Trolox/mg prot(P<0.05)，在越冬后期上升至220.73 nmol Trolox/mg prot(P<0.05)，在春繁期穩(wěn)定至213.27 nmol Trolox/mg prot(P>0.05)。原始飼養(yǎng)中蜂T-AOC含量由越冬初期的54.60上升至越冬中期與越冬后期的79.97與78.48 nmol Trolox/mg prot，春繁期顯著上升至234.34 nmol Trolox/mg prot(P<0.05)。活框飼養(yǎng)中蜂的T-AOC在越冬階段高于原始飼養(yǎng)中蜂，差異顯著(P<0.05)；在春繁期低于原始飼養(yǎng)中蜂，差異顯著(P<0.05)。

圖10 中蜂總抗氧化能力Fig.10 Enzymatic activity of T-AOC of Apis cerana cerana

3 結(jié)論與討論

3.1 中華蜜蜂越冬期間抗寒物質(zhì)變化

越冬不同階段蜜蜂的蛋白質(zhì)含量呈“先升后降”趨勢，表明越冬初期中蜂蛋白質(zhì)等抗寒物質(zhì)得到積累，到了越冬后期又被大量消耗。春繁期蜜蜂蛋白質(zhì)含量升高，這可能是由于外界溫度回升，蜜粉源植物開花泌蜜，蜜蜂采食蜂蜜和花粉后體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)得以補充。兩種飼養(yǎng)方式中蜂體重在春繁期表現(xiàn)出不同升降趨勢，且差異顯著，這可能是由于不同的飼養(yǎng)方式影響了蜂群的采集效率，但這需要進一步的實驗論證。徐凱等(2018)比較了中蜂和意蜂Apismellifera低溫處理前后17種血淋巴氨基酸含量，多數(shù)氨基酸在低溫處理后(0℃)有一定的積累。本研究中蜂體蛋白質(zhì)濃度在越冬初期到中期顯著增加，越冬后期顯著下降，這可能是蜜蜂在越冬初期進行越冬能量儲備，在越冬中后期低溫狀態(tài)下，蛋白質(zhì)分解成為氨基酸參與到蜜蜂的低溫調(diào)控中，蛋白質(zhì)是參與蜜蜂低溫調(diào)控的重要物質(zhì)。

越冬昆蟲常在越冬前將體內(nèi)游離水含量轉(zhuǎn)化為結(jié)合水，降低蟲體游離水含量，以提高過冷卻能力而順利越冬(Wolfeetal., 2002)。本研究中，蜜蜂游離水含量在越冬中期和后期出現(xiàn)下降，與任金龍等(2021)研究的意大利蝗卵在較冷的1-2月游離水含量和總含水量降低的結(jié)論一致，表明中蜂在低溫環(huán)境體內(nèi)游離水含量會顯著降低，這也許是蜜蜂順利越冬的重要抗寒機制(秦明等, 2017)。

甘油是昆蟲體內(nèi)重要的低溫保護劑，甘油很容易穿過細胞膜，可以減少細胞膜上的滲透壓力，起到穩(wěn)定蛋白質(zhì)和保護細胞膜的作用。在低溫下機體細胞合成并積累一定的甘油，用以緩解冰凍與低溫對細胞的機械損傷(Kostaletal., 2007; Johannes and Heath, 2017)。本研究中蜜蜂的甘油水平在越冬階段持續(xù)增加，表明中蜂為了抵御越冬期低溫環(huán)境使體內(nèi)甘油水平得到了積累。徐凱等(2018)研究表明，10℃低溫處理后蜂體甘油水平顯著上調(diào)，本研究與其結(jié)果一致。越冬結(jié)束后，隨著外界溫度的升高，甘油水平降到較低水平，甘油含量變化與溫度變化趨勢相反，表明甘油是蜜蜂應(yīng)對低溫環(huán)境的一種調(diào)節(jié)物質(zhì)，起到了低溫保護作用。

糖原是昆蟲越冬期的重要能量來源，在冬季溫度降低時昆蟲開始儲存糖原，以保證順利度過越冬期(景曉紅和康樂, 2004)。昆蟲抗寒物質(zhì)的積累會提高昆蟲抗寒能力，如甘油、海藻糖、葡萄糖和果糖以及氨基酸等物質(zhì)(趙靜等, 2008)。在本試驗中發(fā)現(xiàn)，在越冬初期糖原含量顯著高于其他階段，表明中蜂在越冬前積累了大量的糖原，在越冬中期和后期糖原含量顯著下降，可能蜜蜂在抵御外界寒冷時消耗了大量的糖原，致使體內(nèi)糖原含量較低(歐陽芳等, 2014)。Rozsypal等(2013)研究表明，9月份剛開始滯育的蘋果蠹蛾毛蟲的糖原含量比7月份非滯育毛蟲增加了一倍，這些糖原在越冬期被大量消耗，本研究結(jié)果與上述結(jié)果一致。在春繁期糖原含量顯著增加，可能是有外界蜜源后，蜜蜂大量采食后體內(nèi)糖原水平得以補充的結(jié)果。

綜上所述，本研究中蜜蜂在自然越冬時通過降低體內(nèi)游離水含量，增加甘油含量來增加抗寒能力，同時貯備大量糖原和蛋白質(zhì)供越冬期能量消耗。

3.2 中華蜜蜂越冬期間抗氧化指標變化

昆蟲體內(nèi)廣泛存在由SOD、CAT和POD等組成的抗氧化酶系統(tǒng)，在一定程度上影響到昆蟲的抗逆能力(Siesetal., 1993)。SOD酶是抗活性氧自由基的第一道防線，能夠催化生物體內(nèi)的O2-生成H2O2，CAT酶與POD酶能夠進一步催化H2O2進行分解成H2O和O2。本研究中，越冬初期SOD、CAT和POD酶活性處于較高水平，可能是低溫誘導了蜜蜂體內(nèi)SOD等抗氧化酶的升高，蜜蜂通過提高抗氧化酶的活性來降低體內(nèi)氧化應(yīng)激刺激，適應(yīng)低溫環(huán)境，這與夏振宇等(2019)研究的低溫脅迫誘導了中華蜜蜂體內(nèi)SOD活性的升高的結(jié)論一致。進入越冬中期，氣溫大幅降低，蜜蜂為維持生存，減少能量消耗，使酶活性降低。劉楠楠等(2020)研究歐洲黑蜂Apismelliferamellifera和新疆黑蜂的SOD和CAT酶活力均在越冬中期達到最低值，本研究中酶活力變化與上述結(jié)果一致。越冬中期酶活的抑制現(xiàn)象表明外界低溫環(huán)境可能超過蜜蜂的耐受溫度導致活性氧調(diào)節(jié)失衡，此時蜜蜂體內(nèi)存在過量的氧自由基可能對蜜蜂造成了一定氧化損傷。越冬后期溫度開始上升，蜜蜂體內(nèi)3種抗氧化酶活性開始上升，清除過量O2-，恢復(fù)體內(nèi)活性氧動態(tài)平衡，這與諶苗苗等(2020)研究結(jié)果類似。本研究發(fā)現(xiàn)，春繁期間SOD酶活性較越冬后期出現(xiàn)顯著下降，而CAT和POD并沒有顯著差異。推測這可能是因為春繁時外界溫度升高，蜜蜂體內(nèi)O2-的產(chǎn)生與清除恢復(fù)動態(tài)平衡，因此SOD酶活處于較低水平，而蜜蜂體內(nèi)H2O2仍未恢復(fù)到越冬前水平，導致CAT和POD酶活仍處于較高水平，這需要進一步測定蜂體的O2-和H2O2水平進行驗證。

總抗氧化能力(T-AOC)是體現(xiàn)抗氧化體系的抗氧化能力總和，包含了直接作用在自由基或是間接消耗掉容易生成自由基的物質(zhì)，防止自由基在機體內(nèi)發(fā)生進一步反應(yīng)，是反映生物體內(nèi)抗氧化能力的重要指標(曹善茂等, 2018)。本研究兩種飼養(yǎng)方式中蜂的T-AOC在整個越冬階段不斷增加，表明蜜蜂在越冬期通過不斷提高抗氧化能力來應(yīng)對環(huán)境低溫刺激，這與歐洲黑蜂和新疆黑蜂的T-AOC在自然越冬時的變化規(guī)律一致(劉楠楠等, 2020)。

3.3 中蜂不同飼養(yǎng)方式抗寒物質(zhì)和抗氧化水平比較

活框飼養(yǎng)中蜂在越冬初期和中期體重和蛋白質(zhì)含量均高于原始飼養(yǎng)中蜂，且活框飼養(yǎng)中蜂體重在春繁期顯著大于原始飼養(yǎng)中蜂(P<0.05)。蜜蜂體重與蜜蜂的個體大小呈正相關(guān)，蜜蜂體重和個體受到蜂王的生產(chǎn)性能、蜂群營養(yǎng)狀況和巢房大小等因素的影響，而蜜蜂個體大在抗病力、生產(chǎn)力和抗逆性等方面更有優(yōu)勢(胡宗文等, 2020)。秦明等(2017)發(fā)現(xiàn)中蜂體內(nèi)游離水含量顯著低于意蜂，游離水越低，抗寒性越強。本研究中越冬期各個階段活框飼養(yǎng)中蜂游離水含量均顯著低于原始飼養(yǎng)中蜂(P<0.05)，甘油含量顯著高于原始飼養(yǎng)中蜂(P<0.05)，表明活框飼養(yǎng)的中蜂個體表現(xiàn)出了對低溫環(huán)境更強的抗逆性，有利于蜂群的順利越冬。

越冬中后期外界溫度達到全年最低水平，此時活框飼養(yǎng)中蜂的SOD和CAT酶活性均低于原始飼養(yǎng)中蜂，而POD活性卻高于原始飼養(yǎng)中蜂，且總抗氧化能力也高于原始飼養(yǎng)中蜂，這可能表明活框飼養(yǎng)中蜂體內(nèi)氧自由基水平更低，但蜜蜂體內(nèi)還存在多種抗氧化損傷的機制或其他抗氧化物，它們協(xié)同發(fā)揮作用以避免冷刺激造成自身損傷。春繁期活框飼養(yǎng)中蜂的總抗氧化能力與3種抗氧化酶活性均出現(xiàn)了下降，而原始飼養(yǎng)的中蜂的總抗與POD酶活性仍出現(xiàn)了升高，這表明不同的飼養(yǎng)方式會影響蜜蜂體內(nèi)的氧化自由基的生成，進一步影響到了蜜蜂體內(nèi)的抗氧化能力。而本研究中活框飼養(yǎng)中蜂越冬群勢較大，且在春繁期群勢發(fā)展更快，因此，建議蜂農(nóng)實際生產(chǎn)中可以通過飼養(yǎng)大群，合并弱群進行越冬，提高越冬成功率，加快春繁速度。

蜜蜂以群體越冬，蜜蜂的抗寒能力除了受到個體抗寒水平的影響，還受到蜜蜂群體的影響，群體對小環(huán)境的溫濕度調(diào)節(jié)能力對蜂群抗寒力有重要作用，而群體大的蜂群具有更強的溫濕度調(diào)節(jié)能力。原始飼養(yǎng)中蜂因不受干預(yù)，自由發(fā)展，越冬群勢普遍較?。欢羁蝻曫B(yǎng)中蜂通過調(diào)整巢脾、培育越冬蜂等管理操作增加了越冬蜂群群勢，因此可能具有更強的溫度調(diào)節(jié)能力和抗寒能力。但兩種飼養(yǎng)方式蜂群內(nèi)部的溫濕度缺少試驗數(shù)據(jù)，蜜蜂的群體抗寒力還需進一步研究。