賈 明，肖成盧＊

（盧氏縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 盧氏 472200）

豬偽狂犬病（PR）是一種由偽狂犬病毒引起的豬急性流行病，臨床表現(xiàn)為母豬繁殖障礙，仔豬發(fā)燒、腹瀉和共濟失調(diào)，育肥豬呼吸困難和種公豬生殖障礙。豬是豬偽狂犬病毒的天然宿主，發(fā)病豬、隱性感染豬和康復(fù)豬是重要的傳染源。由于該病發(fā)病率和死亡率很高（仔豬病死率可達100%），又缺乏有效治療藥物控制，傳播速度快，嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為B類動物疫病，我國列為二類動物傳染病。因此，養(yǎng)豬場需要加強科學(xué)監(jiān)測，掌握流行現(xiàn)狀，開展該病的綜合防治和凈化。

為了解PRV在盧氏縣養(yǎng)豬場分布和流行現(xiàn)狀及野毒感染情況，研究采用PRV gE-ELISA、gB-ELISA 抗體檢測方法對來自12家中小規(guī)模養(yǎng)豬場的483份豬血清進行了抗體血清學(xué)檢測，以期為豬偽狂犬病的科學(xué)免疫、綜合防控和凈化提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 待檢血清

來自盧氏縣不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)的12 家中小規(guī)模養(yǎng)豬場，所有豬場均進行了PRVgE 缺失疫苗免疫，每頭豬前腔靜脈采血5 ml，靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min收集血清，放入EP管中，-20℃保存?zhèn)錂z，共483份。

1.2 試驗試劑

豬偽狂犬病病毒gE 蛋白、gB 蛋白ELISA 抗體檢測試劑盒，購自武漢科前生物制品有限公司。

1.3 檢測方法

按照說明書操作：用樣品稀釋液按1∶40稀釋待檢血清、陽性血清和陰性血清，各取100 μl加入抗原包被板，振勻，37℃孵育45 min；棄去抗原包被孔中的液體，每孔加入洗滌液200 μl，靜置5 min后去掉洗滌液，吸水紙上拍干，反復(fù)5次；每孔加100μl酶標記物，37℃下孵育30 min，然后用洗滌液洗滌5次；每孔先加1滴底物液A，再加1滴底物液B，混勻，室溫18～20℃下，避光顯色15min；每孔加1 滴終止液，混勻，10 min內(nèi)測定在酶標儀上測各孔OD630 nm值。當陰性對照孔平均OD630 nm 值與陽性對照平均OD630 nm 值之差≥0.3 時，判斷試驗成立。S=樣品孔OD630 nm值，N=陰性對照孔平均OD630 nm值。若S/N比值＞0.4，樣品判為PRV抗體陰性；若S/N比值≤0.4但＞0.35，樣品判為可疑，該樣品重測，如結(jié)果再次相同，判為PRV抗體陽性；若S/N比值≤0.35，樣品PRV抗體陽性。

2 結(jié)果

2.1 不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)PRV血清學(xué)檢測結(jié)果

見表1。對盧氏縣8個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的483份豬血清進行PRV gE、gB抗體監(jiān)測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，gE 抗體陽性率為13.46%，gB抗體陽性率為93.55%。潘河鄉(xiāng)的PRVgE 抗體陽性率最高，為18.64%，五里川鎮(zhèn)最低，為10.34%。官道口鎮(zhèn)的gB 抗體陽性率最高，為95.52%，杜關(guān)鎮(zhèn)的最低，為90.00%。

表1 不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)PRV血清學(xué)檢測結(jié)果

2.2 不同生長階段豬的PRV血清學(xué)檢測結(jié)果

見表2。此次試驗從生豬不同生長階段抽取血清進行PRV gE和gB抗體檢測，結(jié)果顯示，在483份血清中，gE抗體陽性率介于5.88%～15.38%，平均為10.56%；gB抗體陽性率介于82.35%～94.56%，平均為92.33%。

表2 不同生長階段豬的PRV血清學(xué)檢測結(jié)果

3 討論

目前，PR 的預(yù)防和控制主要依靠疫苗免疫。由于豬偽狂犬基因缺失疫苗具有免疫抗體持續(xù)作用時間長、效價保持較高水平、起效較快和生物安全性強等優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于養(yǎng)豬場。采用PRV gE 基因抗體檢測試劑盒能夠準確檢測PRV 野毒抗體，將疫苗免疫株與野毒感染株進行區(qū)分，從而可以判斷豬群PRV野毒感染情況。

試驗中，從盧氏縣8 個不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)PRV 抗體檢測結(jié)果看，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)均有豬群gE 抗體陽性率出現(xiàn)，介于10.34%～18.64，相差不大，表明養(yǎng)豬場在使用了基因缺失苗免疫后，起到了明顯效果。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)檢測結(jié)果不同，分析原因與免疫程序、豬機體狀況和養(yǎng)殖管理等因素有關(guān)。盡管抽檢豬場均進行了gE 基因缺失苗免疫注射，但是檢測結(jié)果顯示，PR在各鄉(xiāng)鎮(zhèn)均有感染流行。因此，雖然疫苗接種起到有效防控該病發(fā)生的作用，但是不能根本排除感染潛在風(fēng)險，因為帶毒豬可以持續(xù)排毒，嚴重危險健康豬群，應(yīng)引起重視，加強監(jiān)測和防控。

對不同生長階段豬的PRV血清學(xué)檢測，種公豬、種母豬、仔豬、育肥豬和后備母豬的gB抗體陽性率最低為種公豬的82.35%，均高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%。但是所有豬場均未達到100%，表明豬場內(nèi)存在感染PRV 的豬群。其原因可能與豬的個體差異、疫苗的質(zhì)量以及豬群中存在豬瘟、豬繁殖和呼吸障礙綜合征、豬副嗜血桿菌病等免疫抑制性疾病等因素有關(guān)。

結(jié)合監(jiān)測結(jié)果，盧氏縣豬偽狂犬病的凈化和綜合防控要做好以下幾個環(huán)節(jié)。

一是合理制定免疫接種程序。仔豬在出生后3 d內(nèi)采用滴鼻法或噴霧法注入基因缺失疫苗0.5頭份，在30 d時采用肌注法免疫gE 基因缺失疫苗1 頭份，而后在70 d 時再進行肌肉注射gE基因缺失疫苗1頭份。后備母豬于配種前15 d接種基因缺失疫苗，繁殖母豬在產(chǎn)前20 d或在配種后75 d進行基因缺失疫苗的免疫接種。

二是嚴格做好種豬引種檢疫，堅持自繁自養(yǎng)生產(chǎn)模式，若確需引種，引種前對豬偽狂犬病進行各項病原學(xué)檢測，檢測結(jié)果為陰性的種豬方可引種。

三是強化飼養(yǎng)管理，定期防疫檢測，淘汰陽性豬，對檢測結(jié)果陽性豬和發(fā)病豬，及早隔離進行治療。同時，對其他陰性豬群采用緊急免疫接種。

四是加強養(yǎng)殖場內(nèi)消毒滅源工作，尤其是加強養(yǎng)殖場內(nèi)的滅鼠工作。